检索结果-内蒙古大学图书馆

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第9期35卷 10-14页

作者：于春梅李鹏郑其升李斐苏鑫铭曹瑞兵周斌陈溥言南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为了给伪狂犬病病毒(PrV)UL24蛋白的细胞定位和功能研究提供参考依据,据GenBank公布的PrVUL24基因序列(登录号NC006151)设计1对引物,以质粒pUL24-GFP为模板,用PCR方法扩增出部分缺失的基因片段mUL24(modified UL24)。将mUL24片段定向克... 详细信息

为了给伪狂犬病病毒(PrV)UL24蛋白的细胞定位和功能研究提供参考依据,据GenBank公布的PrVUL24基因序列(登录号NC006151)设计1对引物,以质粒pUL24-GFP为模板,用PCR方法扩增出部分缺失的基因片段mUL24(modified UL24)。将mUL24片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建融合表达载体pET-UL24。阳性质粒转化宿主菌***21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白(His)6-UL24以包涵体的形式获得表达。用纯化后的pET-UL24融合蛋白免疫家兔,ELISA分析表明,在血清效价达到1∶2 560以上,Western-blot分析制备的抗体可以和pET-UL24表达产物发生反应,具有良好的免疫特异性。

关键词：伪狂犬病毒 UL24基因原核表达抗体制备

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适合猪圆环病毒2型敏感复制的PK15细胞株的克隆与鉴定

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中国兽医科学 2011年第1期41卷 14-18页

作者：陈念劬王先炜李玉峰姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为了有效提高猪圆环病毒2型(PCV2)在PK15细胞中增殖的效价,采用有限稀释法将PK15细胞进行克隆,通过间接免疫荧光方法筛选对PCV2敏感的克隆细胞。结果表明,通过克隆后获得1株对PCV2高度易感的细胞PK15-B1,该细胞接种PCV2后培养3d,病毒的T... 详细信息

为了有效提高猪圆环病毒2型(PCV2)在PK15细胞中增殖的效价,采用有限稀释法将PK15细胞进行克隆,通过间接免疫荧光方法筛选对PCV2敏感的克隆细胞。结果表明,通过克隆后获得1株对PCV2高度易感的细胞PK15-B1,该细胞接种PCV2后培养3d,病毒的TCID50达10-7.0/mL,病毒效价和生产速度明显高于PK15母细胞,且没有支原体、猪圆环病毒1型、牛黏膜病病毒、猪瘟病毒和脑心肌炎病毒等外源性微生物污染,为PCV2体外增殖和生物学特性的研究奠定了重要基础。

关键词：猪圆环病毒2型 PK15细胞克隆

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猪链球菌2型对扁桃腺上皮细胞的黏附和侵袭作用

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微生物学报 2004年第4期44卷 523-525页

作者：曾巧英陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室甘肃农业大学动物医学院兰州730070

猪链球菌 2型 (SS2 )是重要的人畜共患病病原体 ,溶菌酶释放蛋白 (MRP)是SS2的主要毒力因子之一。用天然表达MRP的江苏分离株HA980 1和不表达MRP的上海分离株SH0 0 6 4 4 4 ,研究SS2对仔兔扁桃腺上皮细胞的黏附和侵袭作用。黏附计数结... 详细信息

猪链球菌 2型 (SS2 )是重要的人畜共患病病原体 ,溶菌酶释放蛋白 (MRP)是SS2的主要毒力因子之一。用天然表达MRP的江苏分离株HA980 1和不表达MRP的上海分离株SH0 0 6 4 4 4 ,研究SS2对仔兔扁桃腺上皮细胞的黏附和侵袭作用。黏附计数结果表明 ,HA980 1 (MRP+ )和SH0 0 6 4 4 4 (MRP- )均能对扁桃腺上皮细胞高水平黏附。扫描和透射电镜均观察到HA980 1的高水平黏附现象 ,黏附部位是细胞膜和细胞微绒毛 ,并观察到细胞膜上有链球菌正处于内化过程中。裂解记数结果表明 ,HA980 1有低度侵袭力 ,SH0 0 6 4 4 4未检测到侵袭力。结果提示 ,扁桃腺是SS2的定殖器官和感染门户 ;MRP+ 菌株黏附后直接侵入细胞内是其穿过扁桃腺上皮细胞屏障的机制之一。

关键词：细胞侵袭细胞黏附扁桃腺上皮细胞猪链球菌细菌培养

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猪繁殖和呼吸综合征病毒膜蛋白和核衣壳蛋白基因序列分析

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畜牧兽医学报 1999年第4期30卷 358-364页

作者：蔡家利姜平蔡宝祥马志永农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院重庆北碚西南农业大学动物养殖学院

猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）弱毒疫苗株（ＰＲＭＶ）基质膜（Ｍ）蛋白和核衣壳（Ｎ）蛋白基因克隆于ｐＢＶ２２０载体，然后将ＭＮ基因亚克隆于ｐＳＫ＋（ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ＋）载体，构建成重组质粒ＰＢＳＭＮ进... 详细信息

猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）弱毒疫苗株（ＰＲＭＶ）基质膜（Ｍ）蛋白和核衣壳（Ｎ）蛋白基因克隆于ｐＢＶ２２０载体，然后将ＭＮ基因亚克隆于ｐＳＫ＋（ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ＋）载体，构建成重组质粒ＰＢＳＭＮ进行序列测定，共测得９５８ｂｐ，Ｍ和Ｎ基因分别位于ＯＲＦ６和ＯＲＦ７。将所测序列和推导的氨基酸序列进行计算机分析，并与其它ＰＲＲＳＶ毒株进行比较，发现ＰＲＭＶ毒株与美洲毒株的ＭＮ基因同源性为９２９％～９７０％，而与欧洲毒株的同源性为６８０％。ＰＲＭＶ和ＬＶ毒株Ｍ和Ｎ基因所推导的氨基酸同源性分别为７９１％和５８５％，说明Ｍ基因相对保守。分析了常见的４６种限制性内切酶酶切位点，发现其中１７种酶在ＭＮ基因段有３４个酶切位点。本研究将为我国进行ＰＲＲＳ基因诊断技术研究、毒株分型、疫苗研制及Ｍ和Ｎ抗原的制备等提供有价值的资料。

关键词：蓝耳病 PRRS 膜蛋白核衣壳蛋白病毒序列分析

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猪伪狂犬病毒引起PK-15细胞自噬的研究

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南京农业大学学报 2018年第4期41卷 701-707页

作者：许长萌王志建王咪刘倩玉王先炜南京农业大学动物医学院/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

[目的]研究猪伪狂犬病毒(PRV)感染猪肾传代细胞系(PK-15)后对细胞自噬的影响,以及细胞自噬在PRV感染复制过程中的作用。[方法]采用Western blot、透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦、siRNA转染等方法研究了PK-15细胞感染PRV后的细胞自噬... 详细信息

[目的]研究猪伪狂犬病毒(PRV)感染猪肾传代细胞系(PK-15)后对细胞自噬的影响,以及细胞自噬在PRV感染复制过程中的作用。[方法]采用Western blot、透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦、siRNA转染等方法研究了PK-15细胞感染PRV后的细胞自噬。利用自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-MA分析自噬对病毒复制的影响,再通过沉默自噬相关基因Beclin-1,进一步观察自噬对PRV复制的影响。[结果]PRV感染PK-15细胞后,LC3-Ⅰ显著转化为LC3-Ⅱ,PK-15细胞内自噬小体的数量明显增加。PRV感染增加了LC3阳性斑点的细胞数。同时,变异毒株PRV ZJ01与传统毒株PRV LA诱导的自噬存在差异。自噬的药理学变化试验和siRNA转染结果还显示自噬能够促进PRV的复制。[结论]PRV感染PK-15细胞可以诱导自噬并有利于病毒的复制。

关键词：自噬猪伪狂犬病毒(PRV) LC3 自噬流复制 Beclin-1

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猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶基因的克隆与鉴定

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微生物学报 2006年第5期46卷 730-733页

作者：段志涛何孔旺张雪寒倪艳秀陆承平江苏省农科院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

根据GenBank猪链球菌2型（SS2）报道序列．对江苏分离株SS2-H部分测序，发现位于已知毒力基因orf2与mrp之间存在两个新的开放阅读框序列。选取可能含有抗原决定簇肽段对应的核酸序列，该阅读框（2738～3694）编码319个氨基酸残基，分子... 详细信息

根据GenBank猪链球菌2型（SS2）报道序列．对江苏分离株SS2-H部分测序，发现位于已知毒力基因orf2与mrp之间存在两个新的开放阅读框序列。选取可能含有抗原决定簇肽段对应的核酸序列，该阅读框（2738～3694）编码319个氨基酸残基，分子量为33．5kDa，与已知任何基因无同源性。通过InterPro、PHD、DNAstar分析阅读框，并定向克隆至pET-32α（＋）载体中，转化至大肠杆菌BL21，表达出分子量为48kDa的融合蛋白，蛋白免疫转印可被SS2的抗血清识别，具有免疫原性；并且含有IMP dehydrogenase结构域，催化IMP生成XMP；流式细胞仪检测该蛋白可明显影响HEp-2细胞周期。

关键词：猪链球菌2型毒力因子 IMPDH

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鸡胚致死孤儿病毒Ⅲa蛋白基因的克隆、表达及其抗原性鉴定

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农业生物技术学报 2003年第6期11卷 616-619页

作者：周斌齐香荣杨耀武芦银华陈溥言沈阳农业大学动物医学系南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室沈阳110161 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

通过随机引物 PCR 鉴定了鸡(Gallus domesticus)胚孤儿致死病毒(CELOV)污染鸭肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒。根据GenBank 上已公布的核苷酸序列,自行设计一对引物。PCR 扩增到1 728 bp 的特异性条带,将其在大肠杆菌(Escherichia coli)中高效... 详细信息

通过随机引物 PCR 鉴定了鸡(Gallus domesticus)胚孤儿致死病毒(CELOV)污染鸭肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒。根据GenBank 上已公布的核苷酸序列,自行设计一对引物。PCR 扩增到1 728 bp 的特异性条带,将其在大肠杆菌(Escherichia coli)中高效表达,产物蛋白经 Western blot 鉴定为阳性后,又长程免疫小白鼠获得抗Ⅲa蛋白的抗血清。间接免疫荧光实验(IFA)鉴定蛋白产物具有抗原性。

关键词：鸡胚致死孤儿病毒(CELOV) Ⅲa 蛋白抗原性

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细菌CpG DNA对鸡接种禽流感病毒H9亚型灭活苗的免疫增强作用

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中国兽医学报 2005年第2期25卷 135-138页

作者：崔义邦何孔旺陆承平郭爱珍南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏省农业科学院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室华中农业大学动物医学院病毒室湖北武汉430070

为了探讨细菌核酸对 H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的免疫增强作用 ,将 1 5日龄蛋用公鸡 1 2 0只随机分为 4组 ,即空白组、抗原组、细菌核酸佐剂组及白油佐剂组 ,每组 30只。于 2 8日龄时 ,细菌核酸佐剂组以灭活 H 9亚型禽流感病毒作为抗原 ... 详细信息

为了探讨细菌核酸对 H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的免疫增强作用 ,将 1 5日龄蛋用公鸡 1 2 0只随机分为 4组 ,即空白组、抗原组、细菌核酸佐剂组及白油佐剂组 ,每组 30只。于 2 8日龄时 ,细菌核酸佐剂组以灭活 H 9亚型禽流感病毒作为抗原 ,大肠杆菌牦牛株核酸作为佐剂 ,免疫接种于试验鸡 ,用 XTT法检测 T、B淋巴细胞增殖反应 ,并用血凝与血凝抑制法检测血清抗体水平。结果显示 ,在细菌核酸佐剂组 ,鸡的血凝抑制抗体水平和 T、B淋巴细胞增殖反应均显著高于抗原单独免疫组 (P<0 .0 5 ) ,而免疫组均显著高于空白组 (P<0 .0 5 ) ;细菌核酸佐剂组的抗体滴度峰值略高于白油佐剂组 (P>0 .0 5 ) ,但 T、B淋巴细胞增殖指数峰值显著高于白油佐剂组 (P<0 .0 1 )。结论认为 ,大肠杆菌牦牛株核酸可显著增强免疫鸡对禽流感病毒 H9亚型灭活疫苗的免疫反应。

关键词：鸡禽流感病毒H9亚型灭活苗免疫增强作用细菌核酸免疫佐剂

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猪繁殖与呼吸综合征病毒和致病性沙门氏菌的混合感染

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中国兽医学报 2005年第4期25卷 337-338页

作者：汤景元姜平邓雨修李玉峰南京农业大学动物医学院农业部动物疾病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

2003年9～11月某猪场发生母猪持续性繁殖障碍和7日龄仔猪呼吸困难、寒颤、下痢、体温升高和实质性器官出血为主要特征的疾病.3头发病仔猪的病变组织用RT-PCR检测,均为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性;由3头发病猪病料中所分离的细菌... 详细信息

2003年9～11月某猪场发生母猪持续性繁殖障碍和7日龄仔猪呼吸困难、寒颤、下痢、体温升高和实质性器官出血为主要特征的疾病.3头发病仔猪的病变组织用RT-PCR检测,均为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性;由3头发病猪病料中所分离的细菌,可于普通琼脂、伊红美蓝和麦康凯琼脂培养基上生长,革兰氏染色阴性,形态与组织触片镜检及生化反应特性与沙门氏菌一致,可致死小鼠,仅对头孢唑啉呈中度敏感.结合该病的流行病学调查、临床症状、病理剖检,确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和致病性沙门氏菌混合感染.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征致病性沙门氏菌混合感染

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脑心肌炎病毒灭活疫苗佐剂的筛选及其效力评价

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中国兽医学报 2015年第2期35卷 242-246页

作者：蒋康富白娟李玉峰王先炜姜平南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

采用ISA201、ISA15A、GEL、CP940和1313佐剂分别与脑心肌炎病毒(EMCV)灭活抗原混合,配制成5种疫苗,采用BALB/c小鼠进行免疫保护试验。结果显示,5种佐剂疫苗对小鼠无明显不良反应,均能够诱导机体产生抗EMCV特异性ELISA抗体、中和抗体和... 详细信息

采用ISA201、ISA15A、GEL、CP940和1313佐剂分别与脑心肌炎病毒(EMCV)灭活抗原混合,配制成5种疫苗,采用BALB/c小鼠进行免疫保护试验。结果显示,5种佐剂疫苗对小鼠无明显不良反应,均能够诱导机体产生抗EMCV特异性ELISA抗体、中和抗体和淋巴细胞增殖反应,其中ISA15A、ISA201和GEL佐剂组抗体水平和淋巴细胞增殖转化刺激指数都显著高于抗原对照组(P<0.01),而且,ISA15A佐剂组免疫应答反应高于ISA201和GEL佐剂组(P>0.05)。采用EMCV强毒攻击,ISA15A、ISA201和GEL佐剂组免疫保护率均达90%,表明用ISA15A、ISA201和GEL这3种佐剂配制的EMCV灭活疫苗具有较高的免疫疫保护效力,为该病灭活疫苗研制奠定基础。

关键词：脑心肌炎病毒灭活疫苗免疫效力

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