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植物病理学报 2018年第1期48卷 55-60页

作者：许苗叶文武王淑琛冯慧郑小波南京农业大学植物保护学院农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室南京210095

本研究基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立了一种快速、准确和灵敏的接骨木镰孢的检测技术。通过比对接骨木镰孢与其近源种之间的候选靶标序列,选取TEF1-α(translation elongation factor1-α... 详细信息

本研究基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立了一种快速、准确和灵敏的接骨木镰孢的检测技术。通过比对接骨木镰孢与其近源种之间的候选靶标序列,选取TEF1-α(translation elongation factor1-α,翻译延伸因子)基因作为靶标,设计并筛选出一套对该病原菌具有种特异性的LAMP引物,建立了检测接骨木镰孢的LAMP体系。该体系在反应前加入染料羟基萘酚蓝(hydroxynaphthol blue,HNB),经62℃恒温反应70 min之后,可根据肉眼观察到的反应物的颜色判定结果。特异性分析结果表明,仅接骨木镰孢的DNA经检测后呈天蓝色的阳性反应,而其他供试菌株的DNA均呈紫色的阴性反应。该方法对DNA的最低检测限为100 pg·μL^(-1)。在采自内蒙古和黑龙江的28份马铃薯干腐病疑似病害样本中,检测到14份阳性样品。该方法的建立为接骨木镰孢的检测及其所致病害的诊断提供了快捷准确的技术。

关键词：接骨木镰孢马铃薯干腐病 LAMP检测 TEF1-α基因

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采用生态位模型预测黄顶菊在中国的潜在适生区

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应用生态学报 2010年第12期21卷 3063-3069页

作者：曹向锋钱国良胡白石刘凤权南京农业大学植物保护学院植物病理学系农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室南京210095

选取32个环境地理变量,结合黄顶菊在中国的分布记录,运用GARP、Maxent、ENFA、Bioclim和Domain5种生态位模型,模拟黄顶菊在中国的潜在适生分布区域,并利用受试者工作特征曲线(ROC)比较不同模型模拟精度.结果表明:Maxent模型的模拟精度最... 详细信息

选取32个环境地理变量,结合黄顶菊在中国的分布记录,运用GARP、Maxent、ENFA、Bioclim和Domain5种生态位模型,模拟黄顶菊在中国的潜在适生分布区域,并利用受试者工作特征曲线(ROC)比较不同模型模拟精度.结果表明:Maxent模型的模拟精度最好.采用Maxent模型进行模拟,黄顶菊在我国有7.5%的适生面积,河北中南部、北京、天津、河南、山东、安徽和江苏具有高度潜在入侵风险.

关键词：黄顶菊潜在适生区生态位

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亚甲基四氢叶酸还原酶参与调控稻瘟病菌的生长、发育和致病性

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植物病理学报 2015年第3期45卷 270-279页

作者：洪丽杜艳张海峰张正光郑小波南京农业大学植物保护学院/农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室南京210095

稻瘟病菌（Magnaporth oryzae）引起的稻瘟病是水稻上一种毁灭性病害,每年给全球水稻生产造成10%~30%的产量损失,严重威胁着全球的粮食生产安全。从分子水平探究该病菌的致病机制,对于挖掘潜在的控制稻瘟病的药剂靶标具有重要的理论和... 详细信息

稻瘟病菌（Magnaporth oryzae）引起的稻瘟病是水稻上一种毁灭性病害,每年给全球水稻生产造成10%~30%的产量损失,严重威胁着全球的粮食生产安全。从分子水平探究该病菌的致病机制,对于挖掘潜在的控制稻瘟病的药剂靶标具有重要的理论和实践意义。本研究在稻瘟病菌中鉴定到2个分别与酿酒酵母亚甲基四氢叶酸还原酶Met12和Met13同源的蛋白,命名为Mo Met12和Mo Met13。Mo Met12和Mo Met13分别含有690和631个氨基酸,两者的一致性为32%。对这2个蛋白编码基因分别进行敲除突变,发现ΔMomet12和ΔMomet13突变体在CM营养丰富培养基上生长减慢、气生菌丝减少。ΔMomet13在MM基本培养基上不能生长,在SDC和OM营养饥饿培养基上生长显著减慢,气生菌丝稀薄。ΔMomet12在M M、SDC和OM培养基上生长均显著减慢;对突变体进行产孢和致病性测定发现,ΔMomet13突变体在CM和SDC培养基上均丧失了产孢能力,而ΔMomet12在CM培养基上产孢量显著下降,在SDC上产孢能力丧失;ΔMomet13突变体侵染菌丝扩展和致病力显著下降,ΔMomet12突变体致病力与野生型比较无明显变化。加入外源的甲硫氨酸可恢复ΔMomet12和ΔMomet13突变体在不同培养基上的生长和产孢缺陷,且能部分恢复ΔMomet13突变体的致病能力。上述结果表明,Mo Met12和Mo Met13通过参与甲硫氨酸的生物合成,从而控制稻瘟病菌的生长和无性繁殖。Mo Met13同时是一个重要的致病相关因子,参与病菌侵染菌丝的生长和致病过程。

关键词：稻瘟病菌亚甲基四氢叶酸还原酶甲硫氨酸无性繁殖致病力

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灰飞虱海藻糖酶基因的克隆及RNA干扰效应

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昆虫学报 2012年第8期55卷 911-920页

作者：张倩鲁鼎浩蒲建吴敏韩召军南京农业大学植物保护学院农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室南京210095

RNA干扰(RNAi)不但可以用于研究基因的功能,还可以通过沉默靶标基因干扰特定的生命过程。因此,通过深入研究,发掘高效专一性靶基因和RNAi技术,有可能开辟针对性的害虫RNAi防控新途径。本研究通过灰飞虱Laodelphax striatellus转录组数... 详细信息

RNA干扰(RNAi)不但可以用于研究基因的功能,还可以通过沉默靶标基因干扰特定的生命过程。因此,通过深入研究,发掘高效专一性靶基因和RNAi技术,有可能开辟针对性的害虫RNAi防控新途径。本研究通过灰飞虱Laodelphax striatellus转录组数据分析并结合RACE技术,克隆了灰飞虱两种海藻糖酶的全长基因,分别命名为LSTre-1和LSTre-2,其GenBank登录号分别为JQ027050和JQ027051。它们均具有海藻糖酶基因的典型特征,与已报道的其他昆虫的海藻糖酶基因具有很高的相似性,并表现出一定的虫种亲缘关系。其中LSTre-1为水溶性海藻糖酶基因,全长2042 bp,开放阅读框编码602个氨基酸,前端有25个氨基酸的信号肽,但无跨膜结构域;LSTre-2为膜结合型海藻糖酶基因,全长2619 bp,开放阅读框编码618个氨基酸,前端有26个氨基酸的信号肽,有2个疏水性跨膜结构域。利用喂食法研究2种海藻糖酶基因dsRNA对灰飞虱的致死效应,发现靶向水溶性酶基因的干扰效应略高于靶向膜结合型的,但两种海藻糖酶基因的dsRNA都可以显著抑制灰飞虱海藻糖酶基因的表达,降低其活力,还能显著抑制试虫的生长,大幅增加试虫死亡率。结果提示,通过适宜途径干扰海藻糖酶基因可以开发防治灰飞虱的新途径。

关键词：灰飞虱海藻糖酶 dsRNA RNA干扰致死效应

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大豆枯萎病菌尖孢镰孢遗传多样性及大豆品种抗性

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植物病理学报 2015年第2期45卷 167-174页

作者：王健生李潇张海峰张正光郑小波南京农业大学植物保护学院/农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室南京210095

了解大豆枯萎病菌的群体遗传特征及明确大豆种质对大豆枯萎病的抗性,对抗病育种、抗性品种的合理布局以及制定更有效的病害防治策略具有重要的参考价值。本研究利用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD),对采自我... 详细信息

了解大豆枯萎病菌的群体遗传特征及明确大豆种质对大豆枯萎病的抗性,对抗病育种、抗性品种的合理布局以及制定更有效的病害防治策略具有重要的参考价值。本研究利用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD),对采自我国不同地区的大豆枯萎病菌—尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)进行遗传多样性分析,筛选到10个多态性随机引物,共扩增出75条RAPD条带,其中55条为多态性条带,占73.3%。利用UPGMA法对DNA扩增图谱进行聚类分析,以相似系数0.68为阈值,55个分离物可分为9个遗传聚类组,表明我国大豆枯萎病菌具有丰富的种内遗传多样性,所划分的群体与分离物来源地不相关。同时,对上述分离物进行致病性分析,发现我国的大豆枯萎病菌具有明显的致病力分化现象。进一步利用3个代表性分离物对来自我国不同大豆产区的180个大豆品种(资源)进行抗大豆枯萎病鉴定,发现皖豆28、中黄13、中黄51、中作X08076和5D034等5个品种对大豆枯萎病具有良好抗性,占供试材料的2.8%,表明不同大豆品种对枯萎病的抗性存在一定的差异。

关键词：大豆枯萎病尖孢镰孢菌遗传多样性 RAPD分析品种抗性

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甜菜夜蛾田间种群对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和高效氯氰菊酯的代谢抗性机制

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应用昆虫学报 2012年第6期49卷 1482-1489页

作者：侍甜车午男吴益东杨亦桦南京农业大学植物保护学院农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室南京210095

甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)云南晋宁、上海奉贤和江苏六合种群对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐抗性为45～437倍,对高效氯氰菊酯抗性为211～555倍,对其它药剂抗性不明显。这3个田间种群3龄幼虫多功能氧化酶、谷胱甘肽S-转移酶和... 详细信息

甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)云南晋宁、上海奉贤和江苏六合种群对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐抗性为45～437倍,对高效氯氰菊酯抗性为211～555倍,对其它药剂抗性不明显。这3个田间种群3龄幼虫多功能氧化酶、谷胱甘肽S-转移酶和酯酶的活力分别为室内敏感种群的2.7～8.4倍、1.9～8.6倍和1.6～5.7倍。多功能氧化酶抑制剂PBO和酯酶抑制剂DEF对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的增效比为1.2～4.3和1.3～7.7;PBO和DEF对高效氯氰菊酯的增效比为1.8～58和3.6～245;谷胱甘肽S-转移酶抑制剂DEM对这2种药剂均无增效作用。上述结果表明,解毒代谢增强可能是甜菜夜蛾田间种群对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和高效氯氰菊酯的重要抗性机理,与酯酶和多功能氧化酶活性升高有关,与谷胱甘肽S-转移酶活性升高无关。本文的研究结果还表明,对于代谢抗性机理复杂的多抗性田间种群,根据不同解毒酶抑制剂对药剂的增效作用判断不同解毒代谢酶在抗性形成中的作用更加可靠。

关键词：甜菜夜蛾甲氨基阿维菌素苯甲酸盐高效氯氰菊酯多功能氧化酶谷胱甘肽S-转移酶酯酶

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小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体α亚基cDNA的克隆、序列分析与不同发育阶段表达分析

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昆虫学报 2009年第1期52卷 17-26页

作者：赵宇杨亦桦武淑文吴益东南京农业大学植物保护学院农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室南京210095

烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR）介导昆虫中枢神经系统中胆碱能突触兴奋性神经递质的快速传递，也是新烟碱类杀虫剂和多杀菌素的作用靶标。本研究利用RT-PCR和RACE技术，克隆了小菜蛾Plutella xylostella nAChRα亚基的一个新基因（Pxx8）... 详细信息

烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR）介导昆虫中枢神经系统中胆碱能突触兴奋性神经递质的快速传递，也是新烟碱类杀虫剂和多杀菌素的作用靶标。本研究利用RT-PCR和RACE技术，克隆了小菜蛾Plutella xylostella nAChRα亚基的一个新基因（Pxx8）的全长cDNA（GenBank登录号为EU914853）。Pxα8的cDNA序列全长1744bp，开放阅读框为1602bp，编码534个氨基酸，具有nAChRd亚基的典型特征，与其他昆虫nAChRα8亚基具有77％～96％的相似性，与果蝇nAChR132亚基具有76％的相似性。既胡的开放阅读框存在单核苷酸多态性位点，导致多个位点氨基酸的替换。雌性4龄幼虫的多态性位点多于雄性4龄幼虫，而且雌、雄4龄幼虫的多态性位点均不相同。半定量RT—PCR研究结果表明，Pxcα8mRNA在成虫期表达量高于蛹期和4龄幼虫期。本研究结果为进一步研究小菜蛾nAChR亚基的多样性和对多杀菌素的靶标抗性机制提供重要基础。

关键词：小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体 α亚基 cDNA克隆半定量RT-PCR

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CrylA毒素与二化螟中肠刷状缘膜囊泡受体蛋白配基结合分析

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昆虫学报 2009年第2期52卷 153-158页

作者：徐永桂杨亦桦吴益东南京农业大学植物保护学院、农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室南京210095

分离和鉴定二化螟Chilo suppresalis幼虫中肠刷状缘膜囊泡(BBMV)中Cryl A毒素的受体蛋白,对于阐明Cryl A毒素作用机理和二化螟抗性机理具有十分重要的意义。为此,本文就Cryl A毒素对二化螟杀虫活性及Cryl Ac与二化螟中肠受体的配基结合... 详细信息

分离和鉴定二化螟Chilo suppresalis幼虫中肠刷状缘膜囊泡(BBMV)中Cryl A毒素的受体蛋白,对于阐明Cryl A毒素作用机理和二化螟抗性机理具有十分重要的意义。为此,本文就Cryl A毒素对二化螟杀虫活性及Cryl Ac与二化螟中肠受体的配基结合进行了研究。结果表明:Cryl Ab对二化螟室内品系(CN)的毒力高于Cryl Ac,而Cryl Ac高于Cryl Aa。配基结合分析表明二化螟CN品系幼虫中肠BBMV中有6个Cryl Ac结合蛋白(分子量分别为50,70,90, 120,160和180 kDa),其中180,160和90 kDa结合蛋白的条带颜色明显深于其他结合蛋白的条带,表明这3个受体蛋白具有较高的结合浓度。同源竞争结合研究表明,180和90 kDa结合蛋白为Cryl Ac的低亲合性结合蛋白,其他4个为高亲合性结合蛋白。为了研究Cryl Ac和Cryl Ab受体结合部位的相互作用,进行了异源竞争结合研究。Cryl Ab可以与Cryl Ac所有的6个结合蛋白进行竞争性结合,与180,120,70和50 kDa结合蛋白具有高亲合性,而与160和90 kDa结合蛋白具有低亲合性。结果显示,Cryl Ac与Cryl Ab在二化螟幼虫中肠BBMV上拥有多个共享的结合位点,但对每个结合位点的亲合性有差异。基于毒素结合部位的相似性,Cryl Ac和Cryl Ab不宜同时用于转基因Bt水稻来控制二化螟。

关键词：二化螟刷状缘膜囊泡苏云金杆菌 Cry1A 配基印迹

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东方粘虫(Pseudaletia separata(Walker))微卫星富集文库的构建与分析

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生态学报 2008年第8期28卷 3860-3867页

作者：张国彦翟保平南京农业大学昆虫学系农业部病虫害监测与治理重点开放实验室南京210095 河南省植物保护植物检疫站郑州450002

根据生物素与链亲和素的强亲和性原理，用包被链亲和素的磁珠亲和捕捉与生物素标记的微卫星寡核苷酸探针（CA）15 （GA）15、（GTT）12、（GAT）12、（TAGA）3和（GTGA）。退火结合的含接头和微卫星序列的单链粘虫基因组DNA限制性酶切... 详细信息

根据生物素与链亲和素的强亲和性原理，用包被链亲和素的磁珠亲和捕捉与生物素标记的微卫星寡核苷酸探针（CA）15 （GA）15、（GTT）12、（GAT）12、（TAGA）3和（GTGA）。退火结合的含接头和微卫星序列的单链粘虫基因组DNA限制性酶切片段，获得单链目的片段。经PCR扩增形成双链后连接到pGEM—T载体上，再转化到DH5α热感受态细胞中，首次成功构建粘虫基因组微卫星富集文库。随机抽样（16次抽样，每库共12—114个克隆）测序发现，6个文库总的微卫星阳性克隆率30．07％，CA／GAT／GTT等3个文库的阳性克隆率达到40％以上。单次抽样最高阳性克隆率达到56％。粘虫微卫星富集文库的建立和高多态性微卫星单拷贝位点的筛选将为粘虫的生态遗传学研究、连锁图谱构建、分子进化和系统发育研究等提供大量遗传标记，对昆虫迁飞的分子生态研究也有重大意义。

关键词：东方粘虫微卫星富集文库序列分析

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稻纵卷叶螟危害后水稻叶片的光谱特征

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中国农业科学 2010年第13期43卷 2679-2687页

作者：黄建荣孙启花刘向东南京农业大学植物保护学院昆虫学系/农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室

【目的】阐明水稻受稻纵卷叶螟危害后不同受害程度的叶片、卷叶的分布形式及卷叶率对稻叶光谱特征的影响,获取诊断水稻受害程度的模型,以便为稻纵卷叶螟的遥感监测提供理论指标与方法。【方法】试验以不同受害等级的虫害叶及健康叶为材... 详细信息

【目的】阐明水稻受稻纵卷叶螟危害后不同受害程度的叶片、卷叶的分布形式及卷叶率对稻叶光谱特征的影响,获取诊断水稻受害程度的模型,以便为稻纵卷叶螟的遥感监测提供理论指标与方法。【方法】试验以不同受害等级的虫害叶及健康叶为材料,在室内恒定条件下采用ASD光谱仪分别测定不同受害程度、受害叶片的不同分布形式、及不同卷叶率下稻叶的光谱反射率,并采用直线回归法,建立基于光谱参数的水稻受害程度诊断模型。【结果】水稻虫害叶光谱反射率均随受害等级的增加,在绿光区(530—570nm)和近红外区(700—1050nm)降低,而在红光区(610—700nm)增加。能反演叶片受害程度的敏感波段为530—564nm、614—695nm和706—1050nm。建立了5个反演叶片受害程度的模型,诊断准确率在80%—90%之间,并且以741nm处的反射率对叶片受害程度的诊断效果最好。在卷叶率恒定的条件下,卷叶的分布位置对光谱反射率影响较小;而卷叶率对光谱反射率的影响较大,表现为随卷叶率的增大,450—500nm和610—700nm处的反射率增大,530—570nm和700—1050nm处反射率降低。差值植被指数(Rnir-Rred)、黄边面积(SDy)及红边面积与蓝边面积的差值(SDr-SDb)等指标均能将6个不同等级的卷叶率(0、10%、30%、50%、70%和90%)区分开,并且利用黄边面积(SDy)指标诊断卷叶率的准确率达86%。【结论】水稻受稻纵卷叶螟为害后,在叶片光谱反射率上有明显的表现,可以利用光谱特征来监测稻叶的受害程度及卷叶率大小。

关键词：水稻稻纵卷叶螟受害程度卷叶率卷叶格局光谱反射率诊断模型

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