检索结果-内蒙古大学图书馆

应用与环境生物学报 2010年第3期16卷 390-393页

作者：梅嬛洪青李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从某化工厂的废水处理池污泥中分离到一株孔雀石绿降解菌,命名为K4-W.根据生理生化特征和16S rRNA基因序列相似性分析,将其初步鉴定为Raoultella sp.该菌在48h内对20mg/L的孔雀石绿降解率为82.5%,降解孔雀石绿的最适温度为30℃,外加碳源... 详细信息

从某化工厂的废水处理池污泥中分离到一株孔雀石绿降解菌,命名为K4-W.根据生理生化特征和16S rRNA基因序列相似性分析,将其初步鉴定为Raoultella sp.该菌在48h内对20mg/L的孔雀石绿降解率为82.5%,降解孔雀石绿的最适温度为30℃,外加碳源或Pb2+对其降解有明显的促进作用,增大接种量也有利于提高降解效率,较高浓度的孔雀石绿则对降解有抑制作用.该菌在降解过程中没有生成无色孔雀石绿,这不同于已报道的孔雀石绿降解途径,但该菌是否具有新的降解途径还需进一步研究.

关键词：孔雀石绿生物降解降解途径 Raoultella sp. 废水处理

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中华根瘤菌自体诱导物合成酶基因的筛选及其在大肠杆菌中的表达

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微生物学报 2007年第5期47卷 838-842页

作者：汪洋郑会明杨梦华钟增涛朱军南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过携带有mariner转座子的质粒pJZ290随机插入诱变中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)建立突变子文库,并从中筛选到自体诱导物(autoinducer,AI)部分缺失突变株YW1。Arbitrary PCR扩增、DNA测序得到YW1基因组DNA中mariner转座子两端侧... 详细信息

通过携带有mariner转座子的质粒pJZ290随机插入诱变中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)建立突变子文库,并从中筛选到自体诱导物(autoinducer,AI)部分缺失突变株YW1。Arbitrary PCR扩增、DNA测序得到YW1基因组DNA中mariner转座子两端侧翼序列,经DNA序列拼接在GenBank上进行同源性分析后获得一个621bp的完整的开放阅读框(ORF),该ORF编码的酶具有206个氨基酸,与草木樨中华根瘤菌(Sinorhizobium medicae)WSM419的LuxI类自体诱导物合成酶(autoinducer synthase)TraI的同源性高达99%。因此,也将该基因命名为traⅠ。将该基因克隆到广宿主范围表达载体pYC12并在大肠杆菌Escherichia coli DH5α中成功表达,C18反相薄层层析(TLC)在阳性重组子培养上清中检测到四种自体诱导物分子,其中的两种正是AI缺失突变株YW1所缺失的AI,这些结果表明该traⅠ基因在苜蓿中华根瘤菌负责合成两种自体诱导物分子,为进一步研究其群体感应系统奠定了理论基础。

关键词： Sinorhizobium meliloti 群体感应自体诱导物合成酶 mariner转座子

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乙酰羟酸合成酶同工酶基因ilvBN、ilvGM和ilvIH的表达及对除草剂抗性的比较

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生物工程学报 2009年第7期25卷 1007-1013页

作者：沈晶晶李永丰黄星俞欣妍何健李顺鹏南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

乙酰羟酸合成酶(AHAS)是磺酰脲类和咪唑啉酮类等AHAS抑制剂类除草剂的作用靶标。获得抗此类除草剂的AHAS突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值。本研究从抗甲磺隆菌株Klebsiella ***11和甲磺隆敏感菌株Klebsiella pneumoniae MGH 7... 详细信息

乙酰羟酸合成酶(AHAS)是磺酰脲类和咪唑啉酮类等AHAS抑制剂类除草剂的作用靶标。获得抗此类除草剂的AHAS突变基因资源具有非常重要的理论和应用价值。本研究从抗甲磺隆菌株Klebsiella ***11和甲磺隆敏感菌株Klebsiella pneumoniae MGH 78578中分别克隆到AHAS三种同工酶基因ilvBN、ilvGM和ilvIH。抗性菌株和敏感菌株AHAS三种同工酶基因在氨基酸水平上差异位点主要集中在ilvBN和ilvGM的大亚基上。将2株菌的ilvBN、ilvGM和ilvIH分别构建到表达载体pET29a(+)中,在Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达,测得只有含菌株HR11 ilvBN和ilvGM的转化子细胞破碎液AHAS对各类AHAS抑制剂类除草剂具有较强的抗性,而含菌株HR11 ilvIH和菌株MGH78578 ilvBN、ilvGM和ilvIH的转化子细胞破碎液AHAS对各类AHAS抑制剂类除草剂敏感。

关键词： AHAS抑制剂类除草剂乙酰羟酸合酶同工酶 ilvBN ilvGM ilvIH 除草剂抗性

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以四氢嘧啶为主要相容性溶质的中度嗜盐菌I15的分离和特性研究

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微生物学报 2005年第6期45卷 900-904页

作者：何健汪婷孙纪全顾立锋李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从草地土壤中分离到一株中度嗜盐菌I15,经过16SrDNA(GenBank登录号为DQ010162)序列分析、形态学和生理生化特征分析,该菌株初步鉴定为Virgibacillusmarismortui。I15能在0%～25%NaCl的培养基中生长,最适生长NaCl浓度为10%,最适生长温度... 详细信息

从草地土壤中分离到一株中度嗜盐菌I15,经过16SrDNA(GenBank登录号为DQ010162)序列分析、形态学和生理生化特征分析,该菌株初步鉴定为Virgibacillusmarismortui。I15能在0%～25%NaCl的培养基中生长,最适生长NaCl浓度为10%,最适生长温度为30℃,最适pH为7.5～8.0。在高盐条件下,I15细胞内主要的相容性溶质为四氢嘧啶,在15%NaCl培养基中其含量达到1.608mmol(g·cdw),占到相容性溶质总摩尔含量的89.6%。渗透冲击试验表明I15细胞内四氢嘧啶在低渗冲击时能够快速分泌到细胞外,在高渗冲击冲剂时能够较快地重新合成。

关键词：中度嗜盐菌相容性溶质四氢嘧啶细菌泌乳工艺

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重金属铜抗性菌株的筛选及其生物学特性的研究

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生态学杂志 2005年第1期24卷 6-8,96页

作者：江春玉盛下放夏娟娟南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过在培养基中加入一定浓度的Cu(CuSO4·5H2 O ,Cu 2 0 0mg·L-1) ,从 4 2份土壤样品中筛选得到 2株具有很强Cu抗性的细菌B和G ,经初步鉴定它们分别属于无色细菌属和芽胞杆菌属。将菌株B和G接种到添加Cu(15 0mg·L-1)的培... 详细信息

通过在培养基中加入一定浓度的Cu(CuSO4·5H2 O ,Cu 2 0 0mg·L-1) ,从 4 2份土壤样品中筛选得到 2株具有很强Cu抗性的细菌B和G ,经初步鉴定它们分别属于无色细菌属和芽胞杆菌属。将菌株B和G接种到添加Cu(15 0mg·L-1)的培养液中进行沉淀态铜的活化试验 ,结果表明 ,与不接菌对照相比 ,B和G菌株分别使培养液中有效铜含量增加 4 75 5 %和 2 4 9 5 % ,培养液pH由 6 5分别降低到 4 2和 5 0 ,菌株B和G的活化效能与其代谢产酸有关。B菌株和G菌株最适生长温度为 2 8℃ ,最适 pH分别为 6～ 7和 8,G菌株在 5 %NaCl下生长良好。除抗Cu外 ,两株菌对重金属Pb(40 0mg·L-1)、Cd(10 0mg·L-1)也具抗性。

关键词：重金属污染铜菌株筛选生物学持性

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利用短短小芽孢杆菌启动子和信号肽编码序列构建穿梭分泌表达载体

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微生物学报 2006年第4期46卷 526-530页

作者：张晓舟闫新崔中利李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

以短短小芽孢杆菌B15的总DNA为模板,利用PCR技术克隆到其细胞壁蛋白基因串联启动子和信号肽编码序列,测序分析后提交GenBank,登录号为AY956423。重新设计引物扩增该片段并在PCR产物两侧引入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点,将PCR产物双酶切后克... 详细信息

以短短小芽孢杆菌B15的总DNA为模板,利用PCR技术克隆到其细胞壁蛋白基因串联启动子和信号肽编码序列,测序分析后提交GenBank,登录号为AY956423。重新设计引物扩增该片段并在PCR产物两侧引入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点,将PCR产物双酶切后克隆至穿梭载体pP43NMK的相应位点构建分泌表达载体pP15MK,插入片段置于该载体中mpd基因的上游,并使信号肽编码序列与去除了自身信号肽编码序列的mpd基因阅读框恰好融合。将pP15MK导入枯草杆菌构建表达菌株1A751(pP15MK),在短短小芽孢杆菌启动子和信号肽元件的带动下,mpd基因能够在表达菌株的对数生长期和稳定期持续性高效分泌表达,表达产物结合在细胞膜上;发酵液在48h酶活达到最高值7.79U/mL,是出发菌株邻单胞菌M6表达量的8.1倍。

关键词：短短小芽孢杆菌启动子信号肽分泌表达枯草芽孢杆菌

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呋喃丹降解菌CDS-1的双标记菌株的构建

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微生物学报 2006年第4期46卷 613-617页

作者：徐剑宏武俊洪青张志琳李顺鹏王云端南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

用Sau3AI消化呋喃丹降解菌***-1的基因组DNA,将所得DNA片段与BamHⅠ酶切的启动子探针载体pRobe-GFP酶连后转化***5α感受态细胞,在选择性平板上培养,从大约1×104个菌落中筛选到50个含启动子片段的阳性克隆。挑选其中一个发光强度... 详细信息

用Sau3AI消化呋喃丹降解菌***-1的基因组DNA,将所得DNA片段与BamHⅠ酶切的启动子探针载体pRobe-GFP酶连后转化***5α感受态细胞,在选择性平板上培养,从大约1×104个菌落中筛选到50个含启动子片段的阳性克隆。挑选其中一个发光强度最强的阳性克隆F7,将它的重组质粒pF7用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后得到包含***-1启动子和gfp基因的DNA片段,将该片段克隆到广宿主载体pPZP201上,得到pPZP201-gfp质粒。将pPZP201-gfp通过三亲接合转移至***-1中得到GFP标记菌株CDS-gfp,经荧光显微镜观察,gfp基因在CDS-gfp中表达量很高。对标记菌株进行连续传代10次(48h/次),发现pPZP201-gfp依然存在,而且发光明显。通过NotⅠ酶切位点把linA基因连接到pUT/mini-Tn5上构建新的转座子载体pUT/mini-Tn5-linA。以pRK600为辅助质粒将pUT/mini-Tn5-linA引入到CDS-1中,linA基因通过转座作用,插入到CDS-gfp的染色体中,得到双标记菌株CDS-GFP-LinA。该菌株是一株能同时降解γ-六六六和呋喃丹的基因工程菌,本研究的结果为研究***-1的生态学行为奠定了基础。

关键词： Sphingomonas sp.CDS-1 呋喃丹降解双标记基因工程菌

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一株高效菲降解菌的筛选及降解条件研究

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应用生态学报 2005年第12期16卷 2399-2402页

作者：周乐盛下放张士晋刘静南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从南京某石化厂排污口附近采集土样,以菲为碳源的选择性培养基分离筛选到一株菲高效降解菌F10a,根据形态和生理生化特性初步鉴定为芽孢杆菌属,并对其降解菲的特性及各种影响因素进行了研究.结果表明,F10a在50mg.L-1的条件下,28℃振荡培... 详细信息

从南京某石化厂排污口附近采集土样,以菲为碳源的选择性培养基分离筛选到一株菲高效降解菌F10a,根据形态和生理生化特性初步鉴定为芽孢杆菌属,并对其降解菲的特性及各种影响因素进行了研究.结果表明,F10a在50mg.L-1的条件下,28℃振荡培养27h,菲的降解率达到98.12%;静置培养84h,菲的降解率达到98.47%.pH值分别为4、6、8时,F10a对菲具有良好的降解效能;pH值为10时F10a不生长.Zn2+与Pb2+的存在不影响F10a的降解效能,Cu2+可以延缓菲的降解,Cr2+对F10a有毒性.F10a在菲浓度为200mg.L-1时,28℃振荡培养84h,降解率为99.6%.菲的降解程度与细菌数量的增长呈正相关关系.

关键词：降解菲多环芳烃芽孢杆菌

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沼气发酵残余物应用于金丝小枣栽培的初步研究

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应用生态学报 2006年第2期17卷 345-347页

作者：虞方伯管晓进赵子如张明星郭鹏潘继杰李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过田间试验比较了沼气发酵残余物(沼渣和沼液)和化肥对金丝小枣部分形态特征、土壤肥力和果实品质等的影响.结果表明,施用沼渣和沼液能显著增强植株和枣果抗病、抗逆能力;改良土壤肥力状况,有机碳、总氮和矿质氮分别比化肥组对照高42.... 详细信息

通过田间试验比较了沼气发酵残余物(沼渣和沼液)和化肥对金丝小枣部分形态特征、土壤肥力和果实品质等的影响.结果表明,施用沼渣和沼液能显著增强植株和枣果抗病、抗逆能力;改良土壤肥力状况,有机碳、总氮和矿质氮分别比化肥组对照高42.65%、37.61%和35.26%;降低土壤碱度,土壤pH值由8.75下降到8.21;增加土壤微生物量,微生物碳和氮量分别比对照高59.44%和56.06%;提高果实品质,其中粗纤维、维生素C、总氨基酸、微量元素铁和磷的含量分别比对照高27.69%、24.85%、19.81%、10.89%和5.26%.表明将沼气发酵残余物应用于金丝小枣栽培能给枣农带来良好的经济收益和环境效益,为金丝小枣的无公害生产提供了新思路.

关键词：沼气发酵残余物金丝小枣土壤肥力果实品质无公害生产

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六六六(HCH)降解菌***-A的分离与降解特性的研究

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微生物学报 2005年第5期45卷 728-732页

作者：马爱芝武俊汪婷张国顺李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从长期受六六六污染的土壤中分离得到一株能以HCH为唯一碳源的高效降解菌株BHC-A。通过对其主要生理生化特征分析,以及16S rDNA序列的测定和同源性比较分析,将BHC-A鉴定为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonassp.)。BHC-A菌株在12h以内能够完全... 详细信息

从长期受六六六污染的土壤中分离得到一株能以HCH为唯一碳源的高效降解菌株BHC-A。通过对其主要生理生化特征分析,以及16S rDNA序列的测定和同源性比较分析,将BHC-A鉴定为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonassp.)。BHC-A菌株在12h以内能够完全矿化浓度分别为5mg/L的α-、β-、γ-、δ-HCH4种异构体,特别是对β-HCH的降解在国际上也属少例。而前人所报道的γ-HCH降解菌Sphingomonas paucimobilisUT26菌株对β-HCH和δ-HCH不产生降解作用,即使经过24h的培养,对5mg/L的α-HCH的降解率也只有12.6%。在黄瓜的盆钵试验中发现,15d后BHC-A在土壤中对α、β-、γ-、δ-HCH4种异构体的降解率为84.3%,能够有效地消除土壤中六六六的污染,缓解植株受药害症状。

关键词：六六六分离降解中间产物

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