检索结果-内蒙古大学图书馆

中国环境科学 2006年第1期26卷 91-95页

作者：刘爱民黄为一南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室安徽师范大学生命科学学院安徽芜湖241000

采用梯度浓度驯化的方法,筛选分离出一株能高度耐镉和富集镉的菌株,初步鉴定为假单胞菌属(Pseudomonassp.).该菌株在含Cd2+浓度4500mg/L的液体细菌培养基中能够生存,当cd2+浓度为100mg/L时,pH值为6-8有利于提高菌株耐镉能力,Cd2+为低浓... 详细信息

采用梯度浓度驯化的方法,筛选分离出一株能高度耐镉和富集镉的菌株,初步鉴定为假单胞菌属(Pseudomonassp.).该菌株在含Cd2+浓度4500mg/L的液体细菌培养基中能够生存,当cd2+浓度为100mg/L时,pH值为6-8有利于提高菌株耐镉能力,Cd2+为低浓度时菌株积累cd2+,菌体对Cd2+浓度为100mg/L的积累率达99.1%,冻干菌体对Cd2+的吸附量为8.786mg/g干菌体;当Cd2+浓度大于909mg/L时,菌体表现出外排Cd2+现象,红外分析和电镜观察表明,菌株细胞壁在吸附Cd2+中起重要作用,67.4%的Cd2+吸附在细胞壁上.

关键词：耐镉细菌富集吸附外排Cd^2+ 红外分析电镜观察

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利用枯草芽孢杆菌ytkA和ywoF基因启动子与信号肽重组分泌表达mpd基因

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生物工程学报 2006年第2期22卷 249-256页

作者：张晓舟闫新崔中利李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pNW33N和去除了信号肽编码序列的成熟mpd基因构建了穿梭启动子探针pNW33N-mpd。用该探针从质粒pMPDP3和pMPDP29上克隆来自于枯草芽孢杆菌ytkA和ywoF基因上游的启动子功能片段,构建了穿梭表达载体pNYTM和... 详细信息

用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pNW33N和去除了信号肽编码序列的成熟mpd基因构建了穿梭启动子探针pNW33N-mpd。用该探针从质粒pMPDP3和pMPDP29上克隆来自于枯草芽孢杆菌ytkA和ywoF基因上游的启动子功能片段,构建了穿梭表达载体pNYTM和pNYWM。将表达载体pNYTM和pNYWM转入枯草芽孢杆菌1A751获得表达菌株1A751(pNYTM)和1A751(pNYTM),mpd基因在ytkA和ywoF基因的启动子和信号肽的带动下实现了分泌表达且具有天然活性,结果表明ytkA基因的启动子强度强于ywoF基因的启动子。利用ytkA基因的强启动子和nprB基因的分泌型信号肽编码序列构建了新的穿梭分泌表达载体pYNMK,并使mpd基因在枯草芽孢杆菌WB800中得到了更高水平的分泌表达,表达菌株WB800(pYNMK)在培养到第84h时甲基对硫磷水解酶酶活达到最高值为10.40u/mL,是出发菌株邻单胞菌M6表达量的10.8倍,重组表达产物有91.4%分泌在培养基中。

关键词：枯草芽孢杆菌 ytkA基因 ywoF基因启动子信号肽 mpd基因分泌表达

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中度嗜盐菌Halomonas ***-1耐盐相关DNA片段的克隆

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应用与环境生物学报 2006年第3期12卷 375-378页

作者：洪青徐剑宏王云端武俊张晓舟李顺鹏南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

通过固体亚硝基胍诱变获得了Halom ***-1的盐敏感突变株BYS-1M.以pBBR1MCS-2为载体在***5α中构建了BYS-1的基因文库.以文库菌***5α(pBBR-X)为供体菌、***803(pRK2013)为辅助菌、BYS-1M为受体菌进行三亲接合,筛选到了恢复耐盐性能的接... 详细信息

通过固体亚硝基胍诱变获得了Halom ***-1的盐敏感突变株BYS-1M.以pBBR1MCS-2为载体在***5α中构建了BYS-1的基因文库.以文库菌***5α(pBBR-X)为供体菌、***803(pRK2013)为辅助菌、BYS-1M为受体菌进行三亲接合,筛选到了恢复耐盐性能的接合子HR-23,提取接合子HR-23的重组质粒pHR23,酶切确定其插入的耐盐相关DNA片段大小分为5.4 kb.该片段为Halom ***-1耐盐相关基因的克隆奠定了基础.

关键词：中度嗜盐菌耐盐相关DNA片段克隆

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生物膜中水平基因转移及其促成的生物强化作用

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应用与环境生物学报 2006年第3期12卷 441-444页

作者：李蒙英沈标李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物重点开放实验室

阐述了生物膜系统中与降解基因有关的水平基因转移的研究进展,表明生物膜中致密的群落结构增加了细菌间水平基因转移的效率.近年发展起来的研究策略和新的分子生物学方法使人们能对自然和人工模拟状态下的水平基因转移进行更精细的分析... 详细信息

阐述了生物膜系统中与降解基因有关的水平基因转移的研究进展,表明生物膜中致密的群落结构增加了细菌间水平基因转移的效率.近年发展起来的研究策略和新的分子生物学方法使人们能对自然和人工模拟状态下的水平基因转移进行更精细的分析,降解基因在环境中的水平传播促进了难降解有机物的生物降解,尤其是携带降解基因的接合质粒向原位细菌种群中的转移在生物强化中具有巨大的潜力.

关键词：生物膜水平基因转移生物强化

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农药杀螟硫磷酶促降解的研究

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应用与环境生物学报 2006年第3期12卷 395-398页

作者：张忠辉洪青武俊汪婷李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从长期受农药杀螟硫磷污染的土壤中分离到一株高效降解菌株,研究了其最适产酶条件:培养温度为30℃,培养液起始pH为7.0,培养时间为30 h.从该降解菌中提取的粗酶液在pH 7.5和30℃时显示最大的降解活性,其米氏常数Km为2.92×10-4mol/L... 详细信息

从长期受农药杀螟硫磷污染的土壤中分离到一株高效降解菌株,研究了其最适产酶条件:培养温度为30℃,培养液起始pH为7.0,培养时间为30 h.从该降解菌中提取的粗酶液在pH 7.5和30℃时显示最大的降解活性,其米氏常数Km为2.92×10-4mol/L,最大降解速率为2 422.79 nmolm in-1mg-1.

关键词：杀螟硫磷酶促降解产酶条件酶的性质

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百脉根根瘤菌群体感应相关基因的克隆与表达

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微生物学报 2006年第6期46卷 1007-1010页

作者：杨梦华钟增涛朱军南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

在实验室的纯培养条件下,检测不到百脉根根瘤菌自体诱导物的产生,但是通过基因序列同源性比对分析发现,百脉根根瘤菌基因组中至少含有4种自体诱导物合成酶基因;将其中一个自体诱导物合成酶基因ml4543克隆到大肠杆菌表达载体pET30a,构建... 详细信息

在实验室的纯培养条件下,检测不到百脉根根瘤菌自体诱导物的产生,但是通过基因序列同源性比对分析发现,百脉根根瘤菌基因组中至少含有4种自体诱导物合成酶基因;将其中一个自体诱导物合成酶基因ml4543克隆到大肠杆菌表达载体pET30a,构建得到能异源表达该基因的大肠杆菌重组菌株;对该大肠杆菌重组菌株进行自体诱导物检测发现,该合成酶基因在大肠杆菌中能合成至少3种自体诱导物因子。

关键词：群体感应自体诱导物合成酶百脉根根瘤菌大肠杆菌重组表达

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利用短短小芽孢杆菌启动子和信号肽编码序列构建穿梭分泌表达载体

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微生物学报 2006年第4期46卷 526-530页

作者：张晓舟闫新崔中利李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

以短短小芽孢杆菌B15的总DNA为模板,利用PCR技术克隆到其细胞壁蛋白基因串联启动子和信号肽编码序列,测序分析后提交GenBank,登录号为AY956423。重新设计引物扩增该片段并在PCR产物两侧引入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点,将PCR产物双酶切后克... 详细信息

以短短小芽孢杆菌B15的总DNA为模板,利用PCR技术克隆到其细胞壁蛋白基因串联启动子和信号肽编码序列,测序分析后提交GenBank,登录号为AY956423。重新设计引物扩增该片段并在PCR产物两侧引入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点,将PCR产物双酶切后克隆至穿梭载体pP43NMK的相应位点构建分泌表达载体pP15MK,插入片段置于该载体中mpd基因的上游,并使信号肽编码序列与去除了自身信号肽编码序列的mpd基因阅读框恰好融合。将pP15MK导入枯草杆菌构建表达菌株1A751(pP15MK),在短短小芽孢杆菌启动子和信号肽元件的带动下,mpd基因能够在表达菌株的对数生长期和稳定期持续性高效分泌表达,表达产物结合在细胞膜上;发酵液在48h酶活达到最高值7.79U/mL,是出发菌株邻单胞菌M6表达量的8.1倍。

关键词：短短小芽孢杆菌启动子信号肽分泌表达枯草芽孢杆菌

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呋喃丹降解菌CDS-1的双标记菌株的构建

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微生物学报 2006年第4期46卷 613-617页

作者：徐剑宏武俊洪青张志琳李顺鹏王云端南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

用Sau3AI消化呋喃丹降解菌***-1的基因组DNA,将所得DNA片段与BamHⅠ酶切的启动子探针载体pRobe-GFP酶连后转化***5α感受态细胞,在选择性平板上培养,从大约1×104个菌落中筛选到50个含启动子片段的阳性克隆。挑选其中一个发光强度... 详细信息

用Sau3AI消化呋喃丹降解菌***-1的基因组DNA,将所得DNA片段与BamHⅠ酶切的启动子探针载体pRobe-GFP酶连后转化***5α感受态细胞,在选择性平板上培养,从大约1×104个菌落中筛选到50个含启动子片段的阳性克隆。挑选其中一个发光强度最强的阳性克隆F7,将它的重组质粒pF7用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后得到包含***-1启动子和gfp基因的DNA片段,将该片段克隆到广宿主载体pPZP201上,得到pPZP201-gfp质粒。将pPZP201-gfp通过三亲接合转移至***-1中得到GFP标记菌株CDS-gfp,经荧光显微镜观察,gfp基因在CDS-gfp中表达量很高。对标记菌株进行连续传代10次(48h/次),发现pPZP201-gfp依然存在,而且发光明显。通过NotⅠ酶切位点把linA基因连接到pUT/mini-Tn5上构建新的转座子载体pUT/mini-Tn5-linA。以pRK600为辅助质粒将pUT/mini-Tn5-linA引入到CDS-1中,linA基因通过转座作用,插入到CDS-gfp的染色体中,得到双标记菌株CDS-GFP-LinA。该菌株是一株能同时降解γ-六六六和呋喃丹的基因工程菌,本研究的结果为研究***-1的生态学行为奠定了基础。

关键词： Sphingomonas sp.CDS-1 呋喃丹降解双标记基因工程菌

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沼气发酵残余物应用于金丝小枣栽培的初步研究

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应用生态学报 2006年第2期17卷 345-347页

作者：虞方伯管晓进赵子如张明星郭鹏潘继杰李顺鹏南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

通过田间试验比较了沼气发酵残余物(沼渣和沼液)和化肥对金丝小枣部分形态特征、土壤肥力和果实品质等的影响.结果表明,施用沼渣和沼液能显著增强植株和枣果抗病、抗逆能力;改良土壤肥力状况,有机碳、总氮和矿质氮分别比化肥组对照高42.... 详细信息

通过田间试验比较了沼气发酵残余物(沼渣和沼液)和化肥对金丝小枣部分形态特征、土壤肥力和果实品质等的影响.结果表明,施用沼渣和沼液能显著增强植株和枣果抗病、抗逆能力;改良土壤肥力状况,有机碳、总氮和矿质氮分别比化肥组对照高42.65%、37.61%和35.26%;降低土壤碱度,土壤pH值由8.75下降到8.21;增加土壤微生物量,微生物碳和氮量分别比对照高59.44%和56.06%;提高果实品质,其中粗纤维、维生素C、总氨基酸、微量元素铁和磷的含量分别比对照高27.69%、24.85%、19.81%、10.89%和5.26%.表明将沼气发酵残余物应用于金丝小枣栽培能给枣农带来良好的经济收益和环境效益,为金丝小枣的无公害生产提供了新思路.

关键词：沼气发酵残余物金丝小枣土壤肥力果实品质无公害生产

来源：评论

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人工接种堆肥和自然堆肥微生物区系与分子多态性的变化

引用

生态与农村环境学报 2006年第1期22卷 29-33页

作者：徐大勇黄为一南京农业大学生命科学学院微生物学系/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

采用传统培养方法和PCR-DGGE技术研究了人工接种堆肥和自然堆肥微生物群落的演变过程。结果表明:(1)传统培养方法显示,两种堆肥堆制过程中微生物数量均呈“升高—降低—升高—降低”变化趋势,整个堆肥过程中细菌数量占优势。(2)DGGE图... 详细信息

采用传统培养方法和PCR-DGGE技术研究了人工接种堆肥和自然堆肥微生物群落的演变过程。结果表明:(1)传统培养方法显示,两种堆肥堆制过程中微生物数量均呈“升高—降低—升高—降低”变化趋势,整个堆肥过程中细菌数量占优势。(2)DGGE图谱显示,两种堆肥不同时期存在不同的细菌种群,其条带数量亦呈“升高—降低—升高—降低”变化趋势。堆肥升温期条带丰富但优势条带不明显;堆肥高温期条带数量减少但出现优势条带,表明高温阶段以嗜热菌或耐高温菌为主;堆肥降温期条带数量再次增多;堆肥腐熟期条带数量少且无优势条带,表明腐熟阶段微生物种群数量少且代谢强度趋于平缓。(3)DGGE图谱表明,人工接种菌株成为堆肥高温期优势菌株。人工接种增加了堆肥中微生物总量,提高了堆肥微生物种群多样性,并且促进了堆肥菌群演替,从而缩短堆肥腐熟时间。

关键词：堆肥微生物群落分子多态性变性梯度凝胶电泳(DGGE)

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