检索结果-内蒙古大学图书馆

中华神经科杂志 2023年第8期56卷 902-908页

作者：孙明霞华颖王健彪周逸能周坚南京医科大学附属无锡儿童医院神经内科，无锡　214023 南京医科大学附属无锡儿童医院儿科实验室，无锡　214023

目的:探讨 IBA57基因突变导致的遗传性痉挛性截瘫74型患儿的临床、影像学特征及基因变异特点。方法:回顾性分析2例于2010年、2021年就诊于南京医科大学附属无锡儿童医院神经内科，经基因检测确定 IBA57基因存在致病突变... 详细信息

目的:探讨 IBA57基因突变导致的遗传性痉挛性截瘫74型患儿的临床、影像学特征及基因变异特点。方法:回顾性分析2例于2010年、2021年就诊于南京医科大学附属无锡儿童医院神经内科，经基因检测确定 IBA57基因存在致病突变的常染色体隐性痉挛性截瘫患儿的临床资料并进行总结分析。结果:2例患儿为同胞兄妹，起病年龄分别为4岁7个月和1岁3个月，具有相同的 IBA57基因复合杂合突变c.473G>C（p.R158P）和c.697C>T（p.R233X）。2例患儿临床诊断为痉挛性截瘫74型，有轻到中度的步态异常、视神经萎缩、视力下降及脑室周围白质改变的脑白质营养不良表现，无明显发育和智力落后。结论:IBA57基因复合杂合突变所致的痉挛性截瘫74型患儿以儿童期发病的缓慢进行性下肢无力为主要表现，无明显认知功能损害，影像学检查可见明显的脑白质营养不良表现。

关键词： IBA57基因痉挛性截瘫突变全外显子组测序

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粉尘螨诱导结膜上皮细胞损伤促进中性粒细胞迁移与中性粒细胞胞外陷阱形成

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中国血吸虫病防治杂志 2023年第3期35卷 271-278页

作者：吴美丽闫茹赵文君南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心江苏无锡214023 江南大学附属儿童医院儿科实验室南京医科大学附属无锡人民医院检验科江苏无锡214023

目的探讨粉尘螨粗提浸液刺激人结膜上皮细胞损伤及诱导中性粒细胞迁移和中性粒细胞胞外陷阱(neutro⁃phil extracellular traps,NETs)形成,从而引起过敏性结膜炎的发病机制。方法采用500、1000、2000、4000 ng/mL粉尘螨粗提浸液刺激人结... 详细信息

目的探讨粉尘螨粗提浸液刺激人结膜上皮细胞损伤及诱导中性粒细胞迁移和中性粒细胞胞外陷阱(neutro⁃phil extracellular traps,NETs)形成,从而引起过敏性结膜炎的发病机制。方法采用500、1000、2000、4000 ng/mL粉尘螨粗提浸液刺激人结膜上皮细胞,采用实时荧光定量PCR(quantitative real⁃time PCR,qPCR)和酶联免疫吸附试验(en⁃zyme⁃linked immunosorbent assay,ELISA)检测人结膜上皮细胞中白细胞介素6(interleukin⁃6,IL⁃6)、肿瘤坏死因子α(tu⁃mor necrosis factor⁃α,TNF⁃α)、γ干扰素(interferon⁃γ,IFN⁃γ)和IL⁃8表达水平。收集人结膜上皮细胞培养上清液,与中性粒细胞共培养,采用Transwell细胞迁移实验检测中性粒细胞迁移数量,采用免疫荧光染色检测NETs标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和瓜氨酸化组蛋白H3(citrullinated histone H3,CitH3)表达。采用佛波酯(phorbol 12⁃myristate 13⁃acetate,PMA)刺激中性粒细胞并收集NETs,应用NETs处理人结膜上皮细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用ELISA法检测细胞培养上清中IL⁃6、TNF⁃α、IFN⁃γ和IL⁃8水平。结果2000、4000 ng/mL粉尘螨粗提浸液处理上调人结膜上皮细胞中IL⁃6、TNF⁃α、IFN⁃γ和IL⁃8表达水平;经2000、4000 ng/mL粉尘螨粗提浸液处理后,人结膜上皮细胞培养上清可促进中性粒细胞迁移,诱导MPO和CitH3染色丝状物增加;增加的NETs进一步诱导人结膜上皮细胞凋亡和IL⁃6、TNF⁃α、IFN⁃γ和IL⁃8释放。结论粉尘螨粗提浸液诱导人结膜上皮细胞损伤,从而促进中性粒细胞迁移与NETs形成,而NETs释放进一步加剧人结膜上皮细胞损伤。

关键词：粉尘螨过敏性结膜炎人结膜上皮细胞中性粒细胞中性粒细胞胞外陷阱

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粉尘螨谷氧还蛋白-1样蛋白基因原核表达质粒的构建及结构分析

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中国病原生物学杂志 2023年第6期18卷 672-676,682页

作者：任雅宁周鹰袁存银周冬梅廖媛芬强士豪罗金丹崔玉宝南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心江苏无锡214023 南京医科大学附属儿童医院儿科实验室

目的获得粉尘螨谷氧还蛋白-1样蛋白(Glutaredoxin-1,Grx1)的编码基因并构建表达质粒,对该基因及其编码蛋白质进行结构预测。方法以粉尘螨总RNA为模板,RT-PCR扩增获得编码基因后插入原核表达载体pET28a(+),构建的重组质粒转化入*** BL21(... 详细信息

目的获得粉尘螨谷氧还蛋白-1样蛋白(Glutaredoxin-1,Grx1)的编码基因并构建表达质粒,对该基因及其编码蛋白质进行结构预测。方法以粉尘螨总RNA为模板,RT-PCR扩增获得编码基因后插入原核表达载体pET28a(+),构建的重组质粒转化入*** BL21(DE3)感受态细胞中,用异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-Dthiogalactoside,IPTG)诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物。采用生物信息学软件分析该基因及其编码蛋白的结构等生物学特征。结果获得的粉尘螨Grx1编码基因全长315bp,构建的原核表达质粒pET28a(+)-Grx1转化入大肠埃希菌感受态细胞后经IPTG诱导,表达相对分子质量为25.9×10^(3)的重组蛋白。生物信息学分析该基因编码的蛋白质由104个氨基酸组成,主要分布于细胞核(占87.0%)。该蛋白含有11个潜在磷酸化位点(4个苏氨酸,6个丝氨酸和1个酪氨酸),二级结构为α-螺旋(45.19%)、无规则卷曲(31.73%)、延伸链(14.42%)和β-转角(8.65%)。将该基因推导出的编码氨基酸序列进行Blast获得同源基因与屋尘螨谷胱甘肽样C8样蛋白(Dermatophagoides pteronyssinus glutaredoxin-C8-like)同源性最高(83.52%)。结论获得了粉尘螨Grx1的编码基因及其原核表达质粒,生物信息学分析该蛋白含有潜在的磷酸化位点且主要分布于细胞核,可为该基因的生理功能研究及粉尘螨的防制提供参考。

关键词：粉尘螨谷氧还蛋白-1样蛋白生物信息学基因克隆

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多发性线粒体功能障碍综合征3型1例

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中华新生儿科杂志（中英文） 2023年第1期38卷 45-47页

作者：孙明霞金未来周坚南京医科大学附属无锡儿童医院神经内科无锡214000 南京医科大学附属无锡儿童医院新生儿科无锡214000 南京医科大学附属无锡儿童医院儿科实验室无锡214000

本文报道1例新生儿期起病、经基因检测确诊为多发性线粒体功能障碍综合征3型的男性患儿。患儿生后12 min出现呼吸急促,机械通气下自主呼吸微弱,颅脑彩超显示胼胝体体部回声不清,沟回模糊,基因检测结果为IBA57基因c.188G>A、c.697C&g... 详细信息

本文报道1例新生儿期起病、经基因检测确诊为多发性线粒体功能障碍综合征3型的男性患儿。患儿生后12 min出现呼吸急促,机械通气下自主呼吸微弱,颅脑彩超显示胼胝体体部回声不清,沟回模糊,基因检测结果为IBA57基因c.188G>A、c.697C>T复合杂合致病变异。

关键词： IBA57基因多发性线粒体功能障碍综合征胼胝体新生儿

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尘螨过敏原Der p 1、Der p 2特异性IgE化学发光免疫检测方法的建立及其性能评估

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中华核医学与分子影像杂志 2022年第3期42卷 160-164页

作者：韩菲菲周鹰张建殷皓吴美丽陈茜崔玉宝南京医科大学附属无锡人民医院医学检验科无锡214023 南京医科大学附属无锡儿童医院儿科实验室无锡214023 南京医科大学附属无锡儿童医院医学检验科无锡214023

目的采用纳米磁微粒化学发光免疫技术建立尘螨过敏原第1、2组分(Der p 1、Der p 2)特异性免疫球蛋白E(sIgE)的定量检测方法。方法通过优化试剂组份和反应模式,评估纳米磁微粒化学发光免疫技术检测Der p 1、Der p 2 sIgE的各项性能指标... 详细信息

目的采用纳米磁微粒化学发光免疫技术建立尘螨过敏原第1、2组分(Der p 1、Der p 2)特异性免疫球蛋白E(sIgE)的定量检测方法。方法通过优化试剂组份和反应模式,评估纳米磁微粒化学发光免疫技术检测Der p 1、Der p 2 sIgE的各项性能指标。同时检测50例疑似尘螨过敏患者血清Der p 1、Der p 2 sIgE水平,与Phadia系统测定结果为标准进行比较,其一致性的比较采用Kappa检验。结果最佳实验体系为:磁微粒用量25μg,反应缓冲液(pH值7.4)含0.1 mol/L Tris-HCl、质量分数0.25%酪蛋白,包被液含20 mmol/L磷酸缓冲液(PB)、质量分数1%牛血清白蛋白(BSA),发光增强液含体积分数0.05%Triton X-100,采用两步法免疫反应,样本量为20μl,反应温度为37℃。检测体系最低检出限小于0.01 kU/L,线性范围0.2~100.0 kU/L,批内、批间精密度分别小于5%、7%,Der p 1和Der p 2交叉污染率分别为0.19%、0.21%。与Phadia系统测定结果比较,Der p 1阳性、阴性符合率分别为78.0%(32/41)、9/9,一致性较好(Kappa=0.65,P=0.008);Der p 2阳性、阴性符合率分别为93.3%(28/30)、85.0%(17/20),一致性也较好(Kappa=0.79,P=0.003)。结论成功建立了尘螨过敏原Der p 1、Der p 2 sIgE纳米磁微粒化学发光免疫检测方法,其各项性能指标良好,与Phadia系统有较好的一致性。

关键词：免疫球蛋白E 抗原,尘螨属欧洲屋尘螨化学发光测定法纳米粒子

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酶联免疫法检测司库奇尤单抗血药浓度及在银屑病患者中的应用

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中国临床药理学与治疗学 2024年第11期29卷 1267-1271页

作者：戴友爱朱扣柱王燕卢周丁肖梁王磊南京医科大学附属无锡人民医院器官移植实验室江苏无锡214023 江南大学附属儿童医院(无锡市儿童医院)药学部江苏无锡214023 南京医科大学附属无锡人民医院皮肤科江苏无锡214023 苏州大学附属第一医院药学部江苏苏州215006

目的:建立并验证测定人血浆司库奇尤单抗(SEC)的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,并将其应用于临床治疗药物监测。方法:以抗司库奇尤单抗抗体为捕获抗体,以生物素标记抗司库奇尤单抗抗体为检测抗体建立双抗体夹心酶联免疫吸附法,从标准曲... 详细信息

目的:建立并验证测定人血浆司库奇尤单抗(SEC)的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,并将其应用于临床治疗药物监测。方法:以抗司库奇尤单抗抗体为捕获抗体,以生物素标记抗司库奇尤单抗抗体为检测抗体建立双抗体夹心酶联免疫吸附法,从标准曲线与定量范围、精密度与准确度和稳定性等进行方法学系统验证。19例经SEC标准剂量治疗的银屑病患者,采集治疗24周后稳态谷浓度血样,测定药物浓度。采用银屑病皮损面积与严重程度指数评估疾病状态。结果:SEC浓度在1.25~80.00μg/mL范围内具有较好的浓度-响应关系,批内、批间精密度和准确度均≤15.0%,在1.25~1 000μg/mL范围内无钩状效应。19例患者维持期SEC中位谷浓度为33.56μg/mL[4分位范围(IQR):32.55~45.98μg/mL],经体重校正后个体间变异为52.00%。银屑病缓解期患者SEC中位谷浓度水平与活动期患者比较,差异无统计学意义(P=0.92)。结论:本研究建立并验证了一种SEC血药浓度检测的分析方法,可用于临床样本的检测。SEC治疗稳态谷浓度个体间变异较大,SEC浓度与疗效的相关性仍需进一步研究。

关键词：司库奇尤单抗治疗药物监测 ELISA 银屑病

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乳清蛋白及其水解物对马铃薯淀粉体外消化性和理化性质的影响

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食品工业科技 2023年第5期44卷 74-81页

作者：刘佳松刘青杨月月徐露莲焦爱权金征宇江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122 江南大学食品学院江苏无锡214122 南京医科大学附属无锡儿童医院儿内分泌科江苏无锡214023

本文通过构建乳清蛋白及乳清蛋白水解物与马铃薯淀粉的共糊化体系来探究乳清蛋白及其水解物对马铃薯淀粉体外消化性和理化性质的影响。结果表明,经过胃蛋白酶和胰酶水解处理的乳清蛋白水解物对淀粉的消化率抑制效果最为明显。其中,天然... 详细信息

本文通过构建乳清蛋白及乳清蛋白水解物与马铃薯淀粉的共糊化体系来探究乳清蛋白及其水解物对马铃薯淀粉体外消化性和理化性质的影响。结果表明,经过胃蛋白酶和胰酶水解处理的乳清蛋白水解物对淀粉的消化率抑制效果最为明显。其中,天然马铃薯淀粉中快消化淀粉(RDS)含量最高(94.54%),抗性淀粉(RS)含量最低(3.10%)。而经过胃蛋白酶处理后经胰酶处理120 min的样品中的RDS含量最低(67.51%),RS含量最高(12.69%)。乳清蛋白水解物对马铃薯淀粉的溶胀和糊化的抑制作用均强于乳清蛋白。这说明乳清蛋白水解物的分子量对马铃薯淀粉的理化特性和消化性均有较大影响。此外,乳清蛋白及其水解物增强了体系中的氢键作用并提高了淀粉结构的有序程度,表明乳清蛋白及其水解物与马铃薯淀粉之间的相互作用会降低淀粉的消化性。

关键词：马铃薯淀粉乳清蛋白蛋白水解物理化性质消化性

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屋尘螨过敏原Der p 1基因逆转录环介导等温扩增可视化检测方法的建立

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中国病原生物学杂志 2022年第5期17卷 542-545,558页

作者：周鹰俞黎黎杨李李启松崔玉宝南京医科大学附属无锡儿童医院儿科实验室江苏无锡214023 江苏医药职业学院医学技术学院南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心

目的建立一种能快速、准确检测环境中屋尘螨过敏原Der p 1基因的逆转录环介导等温扩增可视化(RT-LAMP)技术。方法用Primer Explore 4.0对Der p 1基因进行RT-LAMP引物设计与筛选,提取屋尘螨、粉尘螨、热带无爪螨、腐食酪螨总RNA,利用... 详细信息

目的建立一种能快速、准确检测环境中屋尘螨过敏原Der p 1基因的逆转录环介导等温扩增可视化(RT-LAMP)技术。方法用Primer Explore 4.0对Der p 1基因进行RT-LAMP引物设计与筛选,提取屋尘螨、粉尘螨、热带无爪螨、腐食酪螨总RNA,利用优化的RT-LAMP反应体系分别扩增4个螨种的Der p 1基因,评价方法的特异度和灵敏度。采集74份哮喘患儿的床尘样品,提取总RNA进行Der p 1基因RT-PCR和RT-LAMP检测。结果利用优化的RT-LAMP方法检测4种螨的Der p 1基因,只有屋尘螨阳性,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物呈现特征性梯形条带,肉眼和紫外灯下均观察到绿色荧光。建立的RT-LAMP对Der p 1基因的最小检测量为1.0×10^(-6 )μg,敏感性比常规RT-PCR高10倍;检测74份床尘样品,阳性率85.1%,与RT-PCR阳性率70.3%比较差异具有统计学意义(χ^(2)=4.72,P<0.05)。结论建立的屋尘螨过敏原Der p 1基因RT-LAMP较常规RT-PCR灵敏度和特异性更高,可用于屋尘螨过敏原污染的快速检测。

关键词：逆转录环介导等温扩增可视化屋尘螨过敏原Der p 1 尘螨过敏原

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肺炎支原体IgM和IgG抗体的时间分辨荧光免疫层析法的建立及初步应用

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中华核医学与分子影像杂志 2022年第4期42卷 226-230页

作者：张艺周彬张珏杨雪刘洁胡志刚国家卫生健康委员会核医学重点实验室、江苏省分子核医学重点实验室、江苏省原子医学研究所无锡214063 南京医科大学附属无锡儿童医院检验科无锡214023 南京医科大学附属无锡人民医院呼吸内科无锡214023

目的构建可快速、灵敏、定量检测肺炎支原体(MP)免疫球蛋白(Ig)M和IgG抗体的时间分辨荧光免疫层析法(TFICA)。方法基于毛细管作用,应用铕微球示踪,通过对抗原/抗体微球偶联比、微球稀释度、划膜浓度和血清稀释度进行优化,建立检测MP-IgM... 详细信息

目的构建可快速、灵敏、定量检测肺炎支原体(MP)免疫球蛋白(Ig)M和IgG抗体的时间分辨荧光免疫层析法(TFICA)。方法基于毛细管作用,应用铕微球示踪,通过对抗原/抗体微球偶联比、微球稀释度、划膜浓度和血清稀释度进行优化,建立检测MP-IgM和IgG抗体的TFICA,并考核其方法学性能(如灵敏度、特异性、稳定性)。通过对55名健康体格检查者进行检测获得TFICA的正常参考值;采用TFICA与市售化学发光法试剂盒分别检测88名受试者(33例患者,55名健康体格检查者)的血清样本,计算结果一致性(Kappa检验)。结果反应条件为:鼠抗人IgG抗体和MP抗原与微球分别按质量比1∶20和1∶100反应,微球工作稀释度分别为1∶200和1∶100;MP抗原和羊抗人IgM的划膜浓度分别为0.5和1.0 g/L;血清稀释度均为1∶300。建立的MP-IgM和IgG TFICA测量范围分别为(0.78~70.00)×10^(3)相对单位(RU)/L和(0.17~200.00)×10^(3) RU/L,检测灵敏度分别为0.78×10^(3)和0.17×10^(3) RU/L,与甲状腺过氧化物酶抗体、心磷脂酶抗体、甲状腺球蛋白抗体均无交叉反应;相对标准偏差分别为3.7%~14.8%和2.9%~14.0%。经37℃5 d快速老化,MP-IgM和IgG TFICA试剂的平均信号降低率分别为13.7%和14.2%,提示热稳定性好。该法正常参考值分别为3.33×10^(3)和2.61×10^(3) RU/L;与市售化学发光试剂盒检测结果的Kappa值分别为0.79和0.76。结论TFICA检测MP-IgM和IgG抗体具有操作简捷、灵敏度高、特异性好、可定量的优点,具备一定的临床应用价值。

关键词：免疫球蛋白M 免疫球蛋白G 肺炎支原体荧光免疫测定微球体

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粉尘螨聚泛素样蛋白基因克隆、表达与生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2021年第8期16卷 922-926页

作者：李青青潘瑞琳周鹰袁存银崔玉宝南京医科大学附属无锡人民医院医学检验科江苏无锡214023 南京医科大学附属无锡儿童医院儿科实验室

目的克隆、表达粉尘螨聚泛素样蛋白(polyubiquitin, poly-u)的编码基因全长并制备表达质粒,对表达产物进行生物学预测和分析。方法根据转录组测序及其功能注释结果,以粉尘螨Total RNA为模板,RT-PCR和RACE技术获得全长基因后构建原核表... 详细信息

目的克隆、表达粉尘螨聚泛素样蛋白(polyubiquitin, poly-u)的编码基因全长并制备表达质粒,对表达产物进行生物学预测和分析。方法根据转录组测序及其功能注释结果,以粉尘螨Total RNA为模板,RT-PCR和RACE技术获得全长基因后构建原核表达质粒,转化*** BL21(DE3)T1R感受态细胞中,利用异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。采用生物信息学软件分析该基因及其编码蛋白的生物学特征。结果获得了粉尘螨聚泛素样蛋白的编码基因,全长1 644 bp,构建的原核表达质粒pET28a(+)-poly-u转化BL21后经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定均可见目的蛋白条带。生物信息学分析该基因编码的蛋白质由547个氨基酸组成,相对分子质量为61.3×10^(3)。预测二级结构包括α-螺旋(占32.54%)、延伸主链(占15.36%)和无规卷曲(占52.10%),优势表位可能为TGGQQMGR、LEDRRTL、IQDKEQIPPDQ。结论成功获得粉尘螨聚泛素样蛋白的编码基因全长及其原核表达质粒,,并对其生物学特征进行了分析,为进一步针对该基因开发尘螨防制措施奠定了基础。

关键词：粉尘螨尘螨生物信息学基因克隆泛素多聚泛素

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