检索结果-内蒙古大学图书馆

卵母细胞特异表达ФC31整合酶载体pZP3－INT的构建及其在小鼠卵母细胞中的表达

遗传 2009年第6期31卷 595-599页

作者：徐焕宇龚秀丽郭歆冰马睛雯曾溢滔上海交通大学医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖_T程重点实验室上海200040

链霉菌噬菌体ФC31整合酶是一种位点特异性重组酶(Site—specific recombinase,SSR),可介导链霉菌噬菌体attP位点(Phage attachment site)和链霉菌基因组attB位点(Bacterial attachment site)闻的单向重组。为探讨它能否应用于卵母细胞... 详细信息

链霉菌噬菌体ФC31整合酶是一种位点特异性重组酶(Site—specific recombinase,SSR),可介导链霉菌噬菌体attP位点(Phage attachment site)和链霉菌基因组attB位点(Bacterial attachment site)闻的单向重组。为探讨它能否应用于卵母细胞特定基因的重组,文章采用卵巢针刺取卵法呆集生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,将卵透明带糖蛋白3(ZP3)启动子驱动的ФC31整合酶表达载体pZP3-INT和检测qbC31整合酶位点特异性重组功能的重组质粒载体pBCPB^+,通过显微注射导入到小鼠卵母细胞中。培养48h后,RT-PCR检测ФC31整合酶mRNA表达以及PCR检测pBCPB^+载体发生重组的情况。结果表明:载体pZP3-INT在卵母细胞中表达ФC31整合酶mRNA;并且pBCPB^+载体发生了位点特异性重组,提示ФC31整合酶在卵母细胞中可以介导位点特异性重组反应。

关键词： RNA 信使/遗传学链霉菌属卵母细胞卵子敏感性与特异性细菌噬菌体整合酶类重组遗传动物女(雌)性小鼠

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应用接头PCR克隆慢病毒介导的转基因小鼠整合位点旁侧序列

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医学分子生物学杂志 2009年第4期6卷 292-296页

作者：孟坡任兆瑞曾凡一上海医学遗传研究所上海交通大学附属儿童医院上海市200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖重点实验室上海市200040 上海交通大学医学院医学科学院上海市200025

目的为鉴定慢病毒介导的转基因小鼠中外源基因的整合位点信息，应用接头PCR克隆整合位点旁侧序列。方法小鼠基因组总DNA酶解后与设计的接头片段连接，根据慢病毒的LTR序列设计巢式PCR引物，克隆转基因小鼠整合位点旁侧序列。结果成功克... 详细信息

目的为鉴定慢病毒介导的转基因小鼠中外源基因的整合位点信息，应用接头PCR克隆整合位点旁侧序列。方法小鼠基因组总DNA酶解后与设计的接头片段连接，根据慢病毒的LTR序列设计巢式PCR引物，克隆转基因小鼠整合位点旁侧序列。结果成功克隆到转基因小鼠整合位点的旁侧序列，经过测序定位于小鼠染色体上。结论作为反向PCR的改进，本方法可用于转基因小鼠整合位点旁侧序列的克隆，为分析整合位点与外源基因表达之间的关系等提供了科学依据。

关键词：接头PCR 慢病毒转基因小鼠整合位点旁侧序列克隆

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超声引导下宫内移植制备人／山羊干细胞嵌合体的方法建立

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实验动物与比较医学 2009年第4期29卷 211-214页

作者：许淼黄文英胡伟熊灿盛敏曾凡一黄淑帧上海交通大学医学遗传研究所、上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040 上海滔滔转基因工程股份有限公司上海201604 上海交通大学医学院医学科学研究院上海200025

目的建立超声引导下的干细胞山羊宫内移植的方法。方法首先获得胎羊腹部横断面的超声图像，然后在超声引导下将7号穿刺针快速刺入妊娠45～55d的胎羊腹腔内，将外源干细胞注射入胎羊腹腔中，并定期观察受体胎羊在移植后的生长发育和流产... 详细信息

目的建立超声引导下的干细胞山羊宫内移植的方法。方法首先获得胎羊腹部横断面的超声图像，然后在超声引导下将7号穿刺针快速刺入妊娠45～55d的胎羊腹腔内，将外源干细胞注射入胎羊腹腔中，并定期观察受体胎羊在移植后的生长发育和流产情况以及出生后外源细胞的嵌合比例。结果通过超声引导能准确安全地进行外源干细胞的宫内移植，在移植的49头胎羊中，有36头胎羊顺利出生，其余13头流产（流产率26．5％，13／49），与非移植组流产率相当，明显低与剖腹手术移植组（流产率6％）。结论超声引导下的干细胞宫内移植是一种简便和安全的方法，能有效避免剖腹手术方法带来的高流产率，非常适用于宫内移植嵌合体模型的制备，从而为研究干细胞在体内生物学特征和干细胞宫内移植的临床应用提供了技术手段。

关键词：非手术宫内移植超声引导干细胞人/山羊嵌合体

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应用生物信息学寻找山羊新的microRNA分子及其实验验证

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遗传 2008年第10期30卷 1326-1332页

作者：陈海漩严忠海龙健儿颜景斌黄英上海交通大学医学遗传研究所上海200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040

microRNA(miRNA)是一类长约22个碱基的非编码RNA分子,在转录后水平调节基因的表达及其在细胞的增殖、分化、凋亡等过程中起着重要的调控作用。根据miRNA分子具有一定的保守性,文章将人、小鼠、牛、猪和狗5种哺乳动物已知的miRNA分子与N... 详细信息

microRNA(miRNA)是一类长约22个碱基的非编码RNA分子,在转录后水平调节基因的表达及其在细胞的增殖、分化、凋亡等过程中起着重要的调控作用。根据miRNA分子具有一定的保守性,文章将人、小鼠、牛、猪和狗5种哺乳动物已知的miRNA分子与NCBI公布的与山羊具有极高同源性的绵羊基因组序列对比,获得11条miRNA候选分子,然后通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证,发现在山羊脑组织中这11条分子均有表达,肝脏组织中有5条分子表达,初步确定为山羊新的miRNA分子,为寻找山羊miRNA提供了新的思路。

关键词： miRNA 山羊生物信息学

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MLPA-微阵列技术在Y染色体异常检测中的初步应用

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遗传 2008年第12期30卷 1629-1634页

作者：周大文管翌华许淼颜景斌黄英张敬之任兆瑞上海交通大学医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040 上海交通大学附属儿童医院中心实验室上海200040

为了探讨MLPA-微阵列技术用于检测性染色体异常的可行性和精确性,针对Y染色体上的3个基因TSPY(p11.2)、PRY(q11)和RBMY(q11.2)设计MLPA探针,应用MLPA-微阵列技术对15例已知染色体核型的样品进行检测,将检测结果与各样品核型分析和PCR的... 详细信息

为了探讨MLPA-微阵列技术用于检测性染色体异常的可行性和精确性,针对Y染色体上的3个基因TSPY(p11.2)、PRY(q11)和RBMY(q11.2)设计MLPA探针,应用MLPA-微阵列技术对15例已知染色体核型的样品进行检测,将检测结果与各样品核型分析和PCR的检测结果进行对照和比较。结果表明,MLPA-微阵列技术对上述各基因位点的检测结果与样品染色体核型基本吻合,特别是对二例核型分析没有获得染色体结构异常信息的样品,MLPA-微阵列技术检测出Y染色体微小的缺失或指示某些未知染色体片段的信息,并与PCR检测结果完全相符。表明文章报道的MLPA-微阵列技术能够检测核型分析无法分辨的微小变化和异常,显示MLPA-微阵列技术在染色体异常分析中具有很高的检测效率和准确性,相对于染色体核型分析具有明显的优势,在临床染色体病诊断中具有较大的应用前景。

关键词： MLPA 微阵列染色体异常

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人转铁蛋白重组载体的构建及其表达调控的研究

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中国生物工程杂志 2008年第S1期28卷 50-55页

作者：潘树标颜景斌任兆瑞上海交通大学医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040

转铁蛋白(TF)是一种具有重要生理功能的糖蛋白,对它的开发利用具有重要的经济和社会效益。为探讨高效表达人转铁蛋白(hTF)的可行性及可能的调控机理,本文克隆得到了兔转铁蛋白启动子(RP promoter),并构建了以pcDNA3.1(-)为骨架的由RP启... 详细信息

转铁蛋白(TF)是一种具有重要生理功能的糖蛋白,对它的开发利用具有重要的经济和社会效益。为探讨高效表达人转铁蛋白(hTF)的可行性及可能的调控机理,本文克隆得到了兔转铁蛋白启动子(RP promoter),并构建了以pcDNA3.1(-)为骨架的由RP启动hTF表达的重组载体,转染大鼠肝脏细胞株BRL-3A和小鼠乳腺上皮细胞株HC-11细胞分析了hTF表达情况,并进一步筛选得到了两个稳定表达hTF的细胞克隆。在细胞培养液中加入不同剂量的5-杂氮胞苷(5-azadC),分析甲基化修饰对基因表达的影响。结果显示,兔转铁蛋白启动子能成功启动hTF的表达;而且5-aza-dC能进一步提高了hTF表达水平,且提高的程度和5-aza-dC的剂量成正相关,但是不同克隆hTF表达升高程度不一样。结果说明hTF的表达受到甲基化修饰影响。

关键词：转铁蛋白甲基化 5-杂氮胞苷

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应用反向PCR克隆慢病毒介导的转基因小鼠整合位点序列

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生物技术通讯 2008年第6期19卷 882-884页

作者：张俊龚秀丽郭歆冰任兆瑞上海交通大学医学遗传研究所上海200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040

目的:为分析慢病毒介导的转基因小鼠中外源基因整合位点的信息,应用反向PCR克隆整合位点序列。方法:小鼠基因组总DNA酶解和自连接后,针对慢病毒载体的特点在LTR附近设计一组特异的PCR引物,优化半巢式PCR的各种参数,提高整合位点序列克... 详细信息

目的:为分析慢病毒介导的转基因小鼠中外源基因整合位点的信息,应用反向PCR克隆整合位点序列。方法:小鼠基因组总DNA酶解和自连接后,针对慢病毒载体的特点在LTR附近设计一组特异的PCR引物,优化半巢式PCR的各种参数,提高整合位点序列克隆的效率。结果:克隆了分别携带绿色荧光蛋白(GFP)和转铁蛋白(TF)基因的慢病毒介导的转基因小鼠家系7只小鼠中10个外源基因整合位点序列。结论:本方法可用于慢病毒介导的转基因小鼠整合位点序列的克隆,为分析整合位点与外源基因表达之间的关系等提供了科学依据。

关键词：反向PCR 慢病毒载体整合位点

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