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THP-1巨噬细胞热休克处理对单核细胞超化蛋白-1和白细胞介素表达的影响

心肺血管病杂志 2010年第3期29卷 220-224页

作者：冯耀光王双李方黎健湖南南华大学附属第一医院心胸血管外科 421001 湖南南华大学心血管病研究所/动脉硬化学湖南省重点实验室卫生部北京医院/卫生部北京老年医学研究所

目的:探讨热休克处理对THP-1巨噬细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-8(IL-8)的影响以及热休克蛋白70(HSP70)、TLR4/P38MAPK和TLR4/NF-κB在其中的作用。方法:实验前用佛波酯孵育THP-1细胞,使其诱导分化成巨噬细胞,换无血... 详细信息

目的:探讨热休克处理对THP-1巨噬细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-8(IL-8)的影响以及热休克蛋白70(HSP70)、TLR4/P38MAPK和TLR4/NF-κB在其中的作用。方法:实验前用佛波酯孵育THP-1细胞,使其诱导分化成巨噬细胞,换无血清培养基培养后加处理因素。实验分成A组:常温对照组;B组:热休克处理组。THP-1巨噬细胞在42℃水浴受热1h,37℃恢复6h;C组:热休克+抗TLR4抗体组,THP-1巨噬细胞加入anti-TLR42h后同B组;D组:热休克+P38MAPK抑制剂组,THP-1巨噬细胞加入P38MAPK特异性抑制剂SB20358030min后同B组;E组:热休克+NF-κB抑制剂组:THP-1巨噬细胞加入NF-κB特异性抑制剂PDTC30min后同B组;F组:热休克+抗HSP702h抗体组,THP-1巨噬细胞加入anti-HSP702h后同B组。用RT-PCR或westernblot或ELISA检测各组细胞HSP70、TLR4、MCP-1、IL-8mRNA或蛋白的表达。结果:热休克处理上调THP-1巨噬细胞HSP70、TLR4、MCP-1和IL-8的表达。SB203580、anti-TLR4可完全抑制热休克诱导的MCP-1和IL-8表达上调,而PDTC、anti-HSP70对上述效应起部分抑制作用。结论:THP-1细胞经热休克处理后通过HSP70、TLR4/P38MAPK、TLR4/NF-κB途径上调MCP-1和IL-8的表达。

关键词：热休克蛋白70 Toll样受体-4 单核细胞趋化蛋白-1 白细胞介素-8 动脉粥样硬化

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可降解组织工程血管支架材料的细胞相容性

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中国现代医生 2010年第22期48卷 83-85,F0003页

作者：孙平平张振亮郭光伟周建业山西医科大学第二临床医学院心胸外科山西太原030001 山东潍坊医学院山东潍坊261053 中国医学科学院阜外心血管病医院卫生部心血管再生医学重点实验室北京100037

目的对可降解材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚氨酯体外评价,初步探讨其作为血管支架材料的可行性。方法通过血红蛋白的释放对溶血进行评价;采用细胞增殖度法(MTT法)、细胞形态学观察方法研究聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚氨酯材料的细胞毒... 详细信息

目的对可降解材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚氨酯体外评价,初步探讨其作为血管支架材料的可行性。方法通过血红蛋白的释放对溶血进行评价;采用细胞增殖度法(MTT法)、细胞形态学观察方法研究聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚氨酯材料的细胞毒性。结果 PLGA和PU组的溶血率均小于ISO规定的5%,可认为这两种材料无溶血作用。MTT比色法结果显示细胞毒性为0～1级;细胞形态学观察显示L929细胞在聚氨酯材料浸提液中呈梭形或三角形,贴壁良好。结论这两种材料溶血低,细胞相容性良好,符合组织工程血管支架材料的应用要求。

关键词：聚乳酸-羟基乙酸共聚物聚氨酯细胞毒性溶血率

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雪旺细胞分泌VEGF浓度的实验研究

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中国分子心脏病学杂志 2009年第5期9卷 287-290页

作者：邸金胡盛寿周建业郭光伟李君沈雅中国医学科学院中国协和医科大学阜外心血管病医院卫生部心血管再生医学重点实验室 100037 山西医科大学第二临床医学院心胸外科 030001

目的研究体外培养的雪旺氏细胞VEGF分泌量与培养时间的关系,为今后雪旺氏细胞的应用提供实验依据。方法切取2周龄SD大鼠的坐骨神经,分离、纯化、培养雪旺细胞,第三代细胞分别于12小时,1天,3天,5天,7天,9天6个时间位点收集细胞以及细胞... 详细信息

目的研究体外培养的雪旺氏细胞VEGF分泌量与培养时间的关系,为今后雪旺氏细胞的应用提供实验依据。方法切取2周龄SD大鼠的坐骨神经,分离、纯化、培养雪旺细胞,第三代细胞分别于12小时,1天,3天,5天,7天,9天6个时间位点收集细胞以及细胞培养液,观察细胞形态变化,S-100鉴定雪旺细胞,同时,四氮唑溴盐(MTT)比色法测定雪旺细胞的生长增值情况;ELISA法测定细胞培养液中的VEGF浓度含量。结果雪旺细胞呈长梭形,S-100蛋白表达阳性率为90%,2～5天细胞生长迅速,7天以后生长较为缓慢,分泌的VEGF量在第5天达到最高(每个时间点均P<0.05),其后第7天,第9天缓慢降低(P>0.05)。结论第3代雪旺细胞在培养到第5-7天时达到较高的分泌浓度,这个时期的细胞在血管组织工程中有较好的应用价值。

关键词：雪旺细胞血管内皮生长因子 ELISA法浓度

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体外培养骨髓间充质干细胞经大鼠冠状动脉内移植的可行性研究

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华北国防医药 2009年第5期21卷 3-5,F0003页

作者：何庚戌要彤张浩张晓玲胡盛寿解放军251医院胸心血管外科河北张家口075000 河北北方学院第一附属医院心电图室河北张家口075000 中国协和医科大学阜外心血管病医院卫生部再生医学重点实验室北京100037

目的：探讨冠状动脉内移植骨髓间充质干细胞（MSCs）的可行性和安全性。方法：左侧开胸结扎sD大鼠左冠状动脉建立心肌梗死模型。①离体实验：取心肌梗死后2周大鼠5只，开胸取出心脏，常规建立Langendorff模型。将CM—DiI标记的MSCs悬液... 详细信息

目的：探讨冠状动脉内移植骨髓间充质干细胞（MSCs）的可行性和安全性。方法：左侧开胸结扎sD大鼠左冠状动脉建立心肌梗死模型。①离体实验：取心肌梗死后2周大鼠5只，开胸取出心脏，常规建立Langendorff模型。将CM—DiI标记的MSCs悬液注入主动脉根部，同时收集右心房回流的液体，离心后通过流式细胞仪计数细胞数量。观察是否有细胞经冠状静脉回流及数量比例，并在细胞移植前和移植后5、15和30min测左室收缩压（LVSP）、左室舒张压（LVDP）、左室压力变化率（±dp／dt）、心率，评价其安全性。②体内实验：取心肌梗死后2周的大鼠，经左心室-主动脉途径将细胞悬液注射到临时阻断的主动脉根部，分别在移植后1、24h和1、4周取材观察细胞在心脏内的位置及细胞的迁移情况。结果：离体实验发现经冠状动脉内注射MSCs（95±3）％的细胞在心肌组织内存留，移植后大鼠LVSP、LVDP、±dp／dt及心率没有明显变化（P〉0．05）。在体内实验中发现细胞移植后早期大部分细胞分布在心外膜下心肌组织内，在心内膜下组织内较少分布，而且大部分细胞在正常心肌组织内，只有少量在心肌梗死区域。移植后1～4周存活的细胞多在心肌梗死及交界区组织内，在正常组织内很少。结论：经冠状动脉内途径行MSCs移植是安全可行的。

关键词：细胞培养的间质干细胞移植模型动物心肌梗死大鼠

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心肌梗死后基质细胞衍生因子-1的表达及其意义

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心脏杂志 2009年第4期21卷 471-474,479页

作者：何庚戌要彤张浩胡盛寿张晓玲魏英杰解放军第251医院胸心血管外科河北张家口075000 张家口北方学院第一附属医院心脏内科河北张家口075000 中国协和医科大学阜外心血管病医院卫生部心血管疾病再生医学重点实验室北京100037

目的探讨大鼠心肌梗死(MI)后不同时间,梗死组织基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的表达以及与骨髓间充质干细胞(MSC)迁移的关系,为细胞移植提供可靠依据。方法在MI后不同时间,用PCR测定梗死组织中SDF-1表达的水平。提取梗死心肌组织提取液,在C... 详细信息

目的探讨大鼠心肌梗死(MI)后不同时间,梗死组织基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的表达以及与骨髓间充质干细胞(MSC)迁移的关系,为细胞移植提供可靠依据。方法在MI后不同时间,用PCR测定梗死组织中SDF-1表达的水平。提取梗死心肌组织提取液,在Costar Transwell双层细胞培养皿观察MI后不同时间梗死心肌组织对MSC迁移能力的影响。结果SDF-1在组织脏器内的表达存在差异,MI梗死心肌组织中SDF-1的表达呈现出时间变化的趋势,梗死后48h达到高峰水平。梗死后的心肌组织对MSC迁移的影响与SDF-1的表达呈相同的变化程序,梗死后48h对MSC的趋化作用最强。经SDF-1的受体CXCR4特异性阻滞剂处理后,MSC向梗死组织提取液迁移的能力受到明显抑制。结论MI后的早期,局部组织中SDF-1的表达明显升高,并可在MI后2周内维持在一个相对高的水平,其对于移植细胞向梗死区域迁移具有重要的作用。

关键词：基质细胞衍生因子-1 心肌梗死细胞移植骨髓间充质干细胞

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骨髓间充质干细胞经静脉移植到心肌梗死大鼠体内后的分布

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心脏杂志 2009年第2期21卷 201-205页

作者：何庚戌要彤张浩胡盛寿张晓玲魏英杰解放军第251医院胸心血管外科河北张家口075000 张家口北方学院第一附属医院心内科河北张家口075000 中国协和医科大学阜外心血管病医院卫生部心血管疾病再生医学重点实验室北京100037

目的探讨经静脉注射骨髓间充质干细胞(MSCs)于心肌梗死大鼠模型后在体内的分布及对心功能的影响。方法心肌梗死后1周将标记的MSCs注射到大鼠舌下静脉内,在细胞移植后不同时间点取心、肝、脾、肺、肾脏器,进行组织学检查观察移植细胞的... 详细信息

目的探讨经静脉注射骨髓间充质干细胞(MSCs)于心肌梗死大鼠模型后在体内的分布及对心功能的影响。方法心肌梗死后1周将标记的MSCs注射到大鼠舌下静脉内,在细胞移植后不同时间点取心、肝、脾、肺、肾脏器,进行组织学检查观察移植细胞的分布。通过心脏超声复查移植后3周、6周心功能改变情况。结果MSCs经静脉注射后各脏器的组织结构无明显异常改变。移植细胞在早期主要分布在正常心肌组织内,1周后主要分布在梗死及交界区内,正常心肌组织内很少见细胞存留。细胞移植后3周、6周实验组左心室没有进一步扩大,心功能没有进一步恶化。结论静脉注射移植MSCs后细胞可以分布到重要组织器官内,并不影响其组织结构;移植细胞有向梗死心肌组织内迁移的趋势,能明显延缓左心室重构而导致的心功能恶化。

关键词：骨髓间充质干细胞心肌梗死细胞移植

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体外循环前后血清的差异蛋白质组学研究

体外循环前后血清的差异蛋白质组学研究

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2009全国博士生学术会议——“灾难医学的现状与未来”研究生论坛

作者：吴益和刘建新李萃金龙玉中南大学湘雅三医院心胸外科长沙 410013 北京协和医学院中国医学科学院阜外心血管病医院心血管病研究所心外科卫生部心血管疾病再生医学重点实验室北京 100037 中南大学湘雅三医院心胸外科长沙 410013 中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室长沙 410008

目的:筛选出经历体外循环(CPB)过程的心脏手术病人CPB前后血清中的差异蛋白质。方法:采用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离心脏手术病人CPB开始前30min、CPB结束后1h、CPB结束后24h的血清蛋白质,PDQuest识别差异蛋白质点,再用基质辅助激... 详细信息

目的:筛选出经历体外循环(CPB)过程的心脏手术病人CPB前后血清中的差异蛋白质。方法:采用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离心脏手术病人CPB开始前30min、CPB结束后1h、CPB结束后24h的血清蛋白质,PDQuest识别差异蛋白质点,再用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱进行分析,数据库查询后对差异蛋白质点进行鉴定,然后应用Western Blot和ELISA检测差异表达蛋白质——SAA在健康人、心脏手术病人CPB前后血清中的表达情况。结果:采用2-DE联合质谱技术最终成功鉴定了7种差异蛋白质,即HPT、A2GL、SAA、HBB、P2R3C、TTHY、T11L2;Western Blot和ELISA分析结果显示:心脏手术病人在经历CPB后血清中SAA表达水平明显升高。结论:HPT、A2GL、SAA、HBB、P2R3C、TTHY、T11L2可能是CPB相关病理状态的分子标志物;机体在经历CPB后会发生强烈的急性期反应。

关键词：体外循环心脏外科手术蛋白质组学血清淀粉样蛋白A

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超顺磁性氧化铁作为细胞标记试剂的可行性研究

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华北国防医药 2009年第2期21卷 9-11,F0003页

作者：何庚戌要彤幺雯张浩胡盛寿张晓玲解放军251医院心胸外科河北张家口075000 河北北方学院第一附属医院心电图室河北张家口075000 中国协和医科大学阜外心血管病医院卫生部心血管疾病再生医学重点实验室北京100037

目的:评价目前临床使用的磁共振对比增强剂超顺磁性氧化铁颗粒(SPIO)进行骨髓间充质干细胞(MSCs)标记的安全性、有效性。方法:从中华小型猪髂骨处抽取骨髓,体外培养扩增MSCs。将SPIO和MSCs共同孵育培养36h。普鲁士蓝染色评价细胞的标记... 详细信息

目的:评价目前临床使用的磁共振对比增强剂超顺磁性氧化铁颗粒(SPIO)进行骨髓间充质干细胞(MSCs)标记的安全性、有效性。方法:从中华小型猪髂骨处抽取骨髓,体外培养扩增MSCs。将SPIO和MSCs共同孵育培养36h。普鲁士蓝染色评价细胞的标记效率;通过MTT比色实验评价SPIO对细胞生长能力的影响;台盼蓝染色检测标记后细胞的活性;使用Costar Transwell方法评价铁离子对细胞迁移能力的影响;用细胞分化诱导液培养标记后的细胞评价其向成脂肪细胞和成骨细胞的分化能力。结果:①MSCs经SPIO标记后普鲁士蓝染色阳性率在95%以上,电镜切片观察可见高密度铁颗粒位于细胞浆内。②MSCs经SPIO标记后,MTT比色实验发现随着培养液中SPIO浓度的增加细胞增殖能力没有明显改变;台盼蓝染色显示98%的细胞保持活性;仍可保持原有的细胞形态,可继续培养、传代;细胞迁移试验发现MSCs对SDF-1和VEGF诱导的迁移能力没有明显的减弱;细胞仍可向成脂肪细胞和成骨细胞分化。结论:SPIO可以安全、有效地标记MSCs。

关键词：细胞移植骨髓间质细胞亲和力标记物超顺磁性氧化铁磁共振成像心肌梗死

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法舒地尔对人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制作用研究

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中华实用诊断与治疗杂志 2011年第1期25卷 7-10页

作者：刘爱军王栋朱耀斌凌锋李晓峰史强刘迎龙北京协和医学院中国医学科学院阜外心血管病医院小儿心脏外科北京市100037 首都医科大学附属北京安贞医院小儿心脏外科北京市100029 北京协和医学院中国医学科学院阜外心血管病医院卫生部心血管疾病再生医学重点实验室北京市100037

目的:探讨法舒地尔对血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cell,HPASMC)增殖的抑制作用及机制。方法:以体外培养的HPASMC为研究对象,PDGF-BB诱导增殖,法舒地尔进行预处理,MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和p27kip1蛋白的表达。结果:细胞培养24 h后与空白组比较,PDGF组HPASMC细胞增殖比例,S期细胞比例和PCNA蛋白表达明显增加,p27kip1蛋白表达则明显降低;用法舒地尔预处理后,与PDGF组比较,细胞增殖比例,S期细胞比例和PCNA蛋白表达明显下降,p27kip1蛋白表达则明显增加。结论:法舒地尔可通过上调p27kip1蛋白表达来抑制PDGF诱导的HPASMC增殖和细胞周期进程。

关键词：人肺动脉平滑肌细胞法舒地尔细胞增殖血小板源性生长因子 Rho激酶

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经冠状动脉内移植骨髓间充质干细胞在体示踪及体内再分布的实验研究

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中国胸心血管外科临床杂志 2008年第3期15卷 195-199页

作者：何庚戌要彤张浩胡盛寿宋鹏张晓玲解放军第251医院胸心血管外科河北张家口075000 河北北方学院附属第一医院心外科河北张家口075000 中国医学科学院中国协和医科大学阜外心血管病医院卫生部心血管疾病再生医学重点实验室北京100037

目的探讨利用心脏磁共振成像(MRI)对经冠状动脉内注射的超顺磁性氧化铁颗粒(SPIO)标记的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)进行在体示踪的可行性,观察移植细胞在体内的再分布情况。方法从猪的髂骨处抽取骨髓... 详细信息

目的探讨利用心脏磁共振成像(MRI)对经冠状动脉内注射的超顺磁性氧化铁颗粒(SPIO)标记的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)进行在体示踪的可行性,观察移植细胞在体内的再分布情况。方法从猪的髂骨处抽取骨髓,分离、培养BMMSCs。用SPIO和CM-DiI(Cell TrackerTMC-7001,Molecular Probe)对细胞进行双重标记。通过导管将标记的细胞注射到冠状动脉左前降支内,分别在细胞移植后当天、移植后1周、3周通过MRI检查对移植细胞进行在体示踪;并分别取不同器官的组织标本进行组织病理学检查。结果冠状动脉内注射的SPIO标记的BMMSCs可在心脏MRI上显影,表现为散在分布的点状信号缺失或低密度影像,并可持续3周。病理检查发现移植细胞较为均匀的分布在移植冠状动脉相关的心肌组织内,在移植后1周可见细胞进入冠状静脉系统内。移植细胞在体内能分布至肺、脾和肾,而在肝组织中很少见。结论用MRI技术可对经冠状动脉内注射的SPIO标记的BMMSCs进行在体示踪;移植细胞在体内有向非靶器官再分布的情况,相关器官组织形态学未见明显的改变。

关键词：骨髓间充质干细胞细胞移植冠状动脉磁共振成像超顺磁性氧化铁颗粒

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