检索结果-内蒙古大学图书馆

中国药学杂志 2022年第15期57卷 1283-1286页

作者：王敏力王弢李炎邵泓李镭范加金马力李宝泉罗清徐苗侯继锋中国食品药品检定研究院 WHO生物制品标准化和评价合作中心卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京100050 兰州生物制品研究所有限责任公司兰州730046 四川省食品药品检验检测院成都611731 上海市食品药品检验研究院上海201203 浙江博锐生物制药有限公司浙江台州318000 山东泰邦生物制品有限公司山东泰安271000 华兰生物工程股份有限公司河南新乡453003 信达生物制药(苏州)有限公司江苏苏州215123 三生国健药业(上海)股份有限公司上海201203

目的研制一种重组人血白蛋白蛋白质含量RS2国家标准品,用于重组人血白蛋白等产品的蛋白质含量测定。方法选取重组人血白蛋白产品作为原料,经质量浓度9 g·LNaCl溶液稀释后除菌过滤分装。在8家实验室按经确认和验证的方法进行协作标... 详细信息

目的研制一种重组人血白蛋白蛋白质含量RS2国家标准品,用于重组人血白蛋白等产品的蛋白质含量测定。方法选取重组人血白蛋白产品作为原料,经质量浓度9 g·LNaCl溶液稀释后除菌过滤分装。在8家实验室按经确认和验证的方法进行协作标定并开展稳定性监测。结果8家实验室采用包括高效液相色谱法(HPLC)、福林酚法(Lowry)、紫外测定法(UV)、2,2′-联喹啉-4,4′-二羧酸法(BCA)等测定本批标准品,蛋白质含量实验室间均值为1961(Min 1904,Max 2063)μg·mL^(-1),95%置信区间(1917,2016)μg·mL^(-1);实验室间标定结果均值标准差52.89,标准误18.70,相对标准偏差(RSD)为2.70%。2~8℃持续对该标准品进行稳定性监测19个月,蛋白质含量未发生趋势性变化,建议本品按2~8℃保存和运输。结论重组人血白蛋白蛋白质含量RS2国家标准品符合相关规定,可以发放用于重组人血白蛋白相关的质量控制。

关键词：重组人血白蛋白蛋白质含量测定国家标准品重组生物药物

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不同条件对RiboGreen法检测mRNA疫苗中mRNA含量的影响

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国际生物制品学杂志 2022年第6期45卷 330-333页

作者：刘晶晶李淼彭沁桦李玉华中国食品药品检定研究院虫媒病毒疫苗室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的探讨RiboGreen法检测mRNA疫苗中mRNA含量可能的影响因素。方法在不同裂解液浓度、裂解时间、样品稀释浓度和参比品条件下,使用RiboGreen荧光染料法对不同生产工艺的mRNA疫苗的mRNA含量进行检测。结果在裂解液为0.1%~2.5%Triton X-10... 详细信息

目的探讨RiboGreen法检测mRNA疫苗中mRNA含量可能的影响因素。方法在不同裂解液浓度、裂解时间、样品稀释浓度和参比品条件下,使用RiboGreen荧光染料法对不同生产工艺的mRNA疫苗的mRNA含量进行检测。结果在裂解液为0.1%~2.5%Triton X-100、裂解5~30 min、样品稀释至mRNA含量0.5~1.5μg/ml时,mRNA含量检测结果的差异无统计学意义;不同参比品序列下样品mRNA含量检测结果差异有统计学意义。结论根据检测样品的mRNA含量的回收率,初步确定了mRNA疫苗中mRNA含量检测的最适条件。

关键词： mRNA含量 RiboGreen法 mRNA疫苗

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以组分百白破疫苗为基础的联合疫苗中气管细胞毒素定量分析液相色谱串联质谱联用方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2020年第12期33卷 1421-1425,1430页

作者：卫辰吴燕龙珍黄元礼王丽婵马霄中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 岛津企业管理(中国)有限公司北京100020

目的建立定量分析以组分百白破疫苗为基础的联合疫苗中百日咳鲍特氏菌气管细胞毒素(tracheal cytotoxin,TCT)的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)方法,并进行验证及初步应用。方法HPLC条件:... 详细信息

目的建立定量分析以组分百白破疫苗为基础的联合疫苗中百日咳鲍特氏菌气管细胞毒素(tracheal cytotoxin,TCT)的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)方法,并进行验证及初步应用。方法HPLC条件:色谱柱BioC18,流动相A为0.1%甲酸水溶液(V/V),流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液(V/V),进样量为5μL,柱温为30℃,流速为0.3 mL/min;MS条件:电喷雾离子源正电子模式,电压为3.0 KV,离子源温度为300℃,脱溶剂管温度为250℃,雾化器流速为3 L/min,干燥气流速为10 L/min,采用多反应监测模式(multi reaction monitoring mode,MRM)检测TCT。验证方法的线性范围、灵敏度、精密度及准确度。采用该方法对国内外公司生产的组分百白破联合疫苗33批成品、63批原液、80批纯化蛋白进行TCT筛查及定量分析。结果TCT标准溶液在20.66~661 ng/L范围内,与TCT的定量高子通道922.3>719.3峰面积线性良好,线性方程为Y=3555.9 X-3368,R2=0.996;检出限为2.58 ng/L,定量限为10.33 ng/L;20.65、82.625及330.5 ng/L TCT标准溶液重复检测5次TCT峰面积的RSD分别为2.23%、4.61%和4.40%;66.1及33.05 ng/L的加标样品回收率分别为104.1%和94.4%。所有组分百日咳联合疫苗成品及原液样品均无TCT检出,纯化蛋白样品仅有一家公司的1批黏附素(pertactin,PRN)蛋白的裂解菌体浓缩液检出65.5 ng/L TCT,其后序工艺样品均未检出。结论成功建立了定量分析组分百白破联合疫苗中TCT的LC-MS/MS方法,该方法灵敏度高,准确度、精密度及线性良好,可用于我国组分百白破联合疫苗的TCT定量定性检测。

关键词：组分百白破疫苗气管细胞毒素液相色谱串联质谱定量分析

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液质联用鉴定重组人1型单纯疱疹病毒载体的蛋白种类

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药物分析杂志 2020年第1期40卷 13-19页

作者：陶磊赵颖华于雷韩春梅李永红饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 爱博才思分析仪器贸易有限公司上海200335

目的:采用液质联用技术鉴定重组人1型单纯疱疹病毒载体中的蛋白种类。方法:用Triton X-100裂解病毒,用丙酮提取病毒蛋白;将病毒蛋白还原烷基化后用胰蛋白酶酶切,酶切肽段进行液质联用分析。色谱柱为C18(2.1 mm×150 mm,1.7μm),以含... 详细信息

目的:采用液质联用技术鉴定重组人1型单纯疱疹病毒载体中的蛋白种类。方法:用Triton X-100裂解病毒,用丙酮提取病毒蛋白;将病毒蛋白还原烷基化后用胰蛋白酶酶切,酶切肽段进行液质联用分析。色谱柱为C18(2.1 mm×150 mm,1.7μm),以含0.1%甲酸的水溶液(A)-含0.1%甲酸的乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1。质谱仪采用正离子、高灵敏度、IDA模式采集数据,喷雾电压5.5kV,离子源温度550℃,扫描范围m/z 200~2000;将采集的质谱数据导入到ProteinPilot软件中进行搜库检索,肽段与蛋白的可能性大于95%时可认为鉴定,人工对匹配的串联图谱进行确证,肽段及蛋白可接受的假阳性率(FDR)不高于1%。结果:在人单纯疱疹病毒蛋白数据库中检索,鉴定到29种人单纯疱疹病毒蛋白,大多为衣壳蛋白及包膜蛋白;在绿猴(Chlorocebus)属蛋白数据库中检索,鉴定到2种宿主细胞蛋白;在全病毒蛋白数据库中检索,鉴定到1种猫肉瘤病毒蛋白。结论:液质联用技术具有高灵敏度、高分辨率的特点,可用于基因治疗产品的质量研究。

关键词：液质联用人单纯疱疹病毒病毒载体鉴别宿主细胞蛋白外源病毒因子

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多糖蛋白结合疫苗中残留ADH和EDAC同时定量检测的液相色谱串联质谱法的建立

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中国生物制品学杂志 2020年第9期33卷 1054-1060页

作者：李茂光龙珍李亚南王春娥李月琪毛琦琦叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 岛津企业管理(中国)有限公司北京100020

目的建立同时定量检测己二酰肼(adipic acid dihydrazide,ADH)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺[N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodimide,EDAC]的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)法,实现多糖蛋白结合物(肺炎球菌结合物、脑膜炎球菌结合物和b型流感嗜血杆菌结合物)中残留ADH和EDAC的定量研究。方法通过检测EDAC在纯水、中性水溶液[(50 mmol/L磷酸缓冲溶液(pH 6.8)、200 mmol/L氯化钠水溶液和疫苗培养基)]及0.1%甲酸(formic acid,FA)水溶液中的稳定性,确定实现EDAC完全转换为EDU的前处理条件。优化了色谱柱种类对ADH、EDU和EDAC的保留,以及质谱条件如产物离子、碰撞电压、Q1和Q3电压等对ADH和EDU定量灵敏度的影响,建立以C18WCX(2.1 mm×150 mm,5μm)为固定相,pH 2~3的0.1%FA-水和0.1%FA-乙腈为流动相的LC-MS/MS方法,实现ADH和EDAC(实际检测对象为EDAC的转换产物EDU)的高灵敏度定量分析。对建立方法的精密度、准确度、线性范围、检出限(LOD)和定量限(LOQ)进行验证。结果ADH在水溶液中较稳定,EDAC自溶解开始即水解为EDU,且难以完全转换,导致EDAC测定困难;在样品和标准品溶液中加入FA,可实现EDAC完全且快速的转换为EDU。ADH、EDU和EDAC在C18色谱柱上保留弱,在色谱柱的死时间附近出峰,无法实现这些化合物与样品基质的分离,而本文所选C18WCX固定相可实现目标化合物的保留且峰形较好。通过前体离子扫描、产物离子扫描,选择目标化合物的前体离子和响应强度较好的产物离子作为MRM的离子对,并用MRM自动优化程序获得目标化合物的最佳Q1、CE和Q3电压值。建立的方法检测的ADH和EDAC含量与峰面积线性关系良好,R2均大于0.999;ADH的LOD为3.96μg/L、LOQ为15.63μg/L,EDAC的LOD为0.58μg/L、LOQ为1.17μg/L,灵敏度较高;精密度(峰面积RSD<2%)及准确度(回收率为90%~105%)较高。结论建立的LC-MS/MS方法实现了多糖蛋白结合疫苗中残留ADH和EDAC(通过测定EDU定量EDAC)的高灵敏度检测,与《中国药典》三部(2015版)方法相比,该方法预处理更简单,自动化程度更高且灵敏度更好,适合于多种多糖蛋白结合物中ADH和EDAC残留的检测。

关键词：液相色谱串联质谱 ADH EDAC 肺炎球菌结合疫苗脑膜炎球菌结合疫苗 b型流感嗜血杆菌结合疫苗

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折光率对微流成像法检测蛋白制剂不溶性微粒的影响

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中国药事 2023年第8期37卷 944-953页

作者：郭莎李萌贾哲梅玉婷贺鹏飞田向斌吴昊王兰中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 沈阳药科大学制药工程学院沈阳110016 烟台大学药学院烟台264005 甘肃省药品检验研究院兰州730070

目的:蛋白制剂中不溶性微粒的含量是衡量样品质量的重要指标之一,为了更为准确地检测不溶性微粒的含量和粒径,本研究探讨了溶液折光率对于微流成像系统检测不溶性微粒的影响。方法:本研究以牛血清白蛋白(BSA)为例,通过常见的外界刺激条... 详细信息

目的:蛋白制剂中不溶性微粒的含量是衡量样品质量的重要指标之一,为了更为准确地检测不溶性微粒的含量和粒径,本研究探讨了溶液折光率对于微流成像系统检测不溶性微粒的影响。方法:本研究以牛血清白蛋白(BSA)为例,通过常见的外界刺激条件(冷冻-解冻)制备高浓度的蛋白质不溶性微粒,并将此微粒稀释至不同折光率的溶液(由PEG1000、海藻糖制备)中,利用微流成像系统检测不溶性微粒的含量。结果:当溶液的折光率接近蛋白质不溶性微粒折光率时,利用微流成像技术检测的不溶性微粒含量低于实际的微粒含量。此外,随着溶液折光率的增加,采用微流成像技术检测出的不溶性微粒的粒径也随之减小。结论:蛋白质溶液的折光率发生改变,会影响利用微流成像技术检测不溶性微粒的准确性。因此,利用微流成像技术检测蛋白制剂中不溶性微粒时,需要考虑到制剂处方的折光率对于检测不溶性微粒的影响,必要时可以采用稀释的方法降低折光率对蛋白质颗粒的屏蔽作用。

关键词：不溶性微粒折光率微流成像技术制剂处方牛血清白蛋白

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兔抗新型冠状病毒血清制备中佐剂对抗体效价的影响

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国际生物制品学杂志 2023年第3期46卷 146-150页

作者：胡云光英志芳张玉平殷安国李亚东常亚军段男易力宋杰中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所昆明650031 国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量控制与评价重点实验室成都611731 中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的制备高效价兔抗新型冠状病毒血清并研究佐剂对抗体效价的影响.方法将9只新西兰兔随机分为a、b、c组,分别皮下注射新型冠状病毒混合弗氏佐剂、氢氧化铝佐剂或单磷酰脂A佐剂进行免疫,0、28、42 d各免疫1次.每次免疫前及初次免疫后14 ... 详细信息

目的制备高效价兔抗新型冠状病毒血清并研究佐剂对抗体效价的影响.方法将9只新西兰兔随机分为a、b、c组,分别皮下注射新型冠状病毒混合弗氏佐剂、氢氧化铝佐剂或单磷酰脂A佐剂进行免疫,0、28、42 d各免疫1次.每次免疫前及初次免疫后14 d于耳中央动脉采血,初次免疫后49 d经颈动脉采血,分离血清,进行中和抗体效价检测以及中和试验.结果经过整个免疫程序后,a、b、c组均能产生高效价抗血清,且a组(6144.00)最终产生的血清中和抗体效价高于b组(4437.33)和c组(3754.67);3组血清均可在中和试验中有效中和KMS2株新型冠状病毒,中和后培养细胞均未发生病变.结论3种不同佐剂疫苗在新西兰兔体内均可产生高水平的免疫应答.

关键词：新型冠状病毒抗血清佐剂抗体效价

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第二批人血白蛋白国家对照品的研制标定

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中国药学杂志 2022年第24期57卷 2051-2060页

作者：王敏力王箐舟吴利红梁蔚阳李炎余进马力陈家啡丁亚凌曹大伟何永兵张宝献王弢徐苗侯继锋中国食品药品检定研究院 WHO生物制品标准化和评价合作中心卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京100050 上海市食品药品检验研究院上海201203 广东省药品检验所广州510180 四川省食品药品检验检测院成都611731 上海莱士血液制品股份有限公司上海200245 华兰生物工程股份有限公司河南新乡453003 博雅生物集团股份有限公司江西抚州344000 成都蓉生药业有限责任公司成都610041 山东泰邦生物制品有限公司山东泰安271000 四川远大蜀阳药业有限责任公司成都610214 华兰生物工程重庆有限公司重庆404100 兰州生物制品研究所有限责任公司兰州730046

目的研制第二批人血白蛋白国家对照品,用于人血白蛋白等相关产品的质量活动。方法选择批签发检验合格的人血白蛋白产品作为原料进行合并、除菌、分装。制备后按照2020年版《中国药典》三部人血白蛋白各论要求,选择蛋白质含量、辛酸钠含... 详细信息

目的研制第二批人血白蛋白国家对照品,用于人血白蛋白等相关产品的质量活动。方法选择批签发检验合格的人血白蛋白产品作为原料进行合并、除菌、分装。制备后按照2020年版《中国药典》三部人血白蛋白各论要求,选择蛋白质含量、辛酸钠含量、乙酰色氨酸含量、多聚体含量、钠离子含量、pH、吸光度共7个检验项目进行多实验室协作标定。除乙酰色氨酸由5家实验室协作标定外,其余项目均由11家实验室完成协作标定。在LAB01开展对照品的稳定性监测。结果依据各实验室协作标定结果,该批国家对照品确立的参考范围分别为:蛋白质含量均值204.03 g·L^(-1),95%可信区间(203.05,205.00)g·L^(-1),参考范围(204.03±2.90)g·L^(-1);辛酸钠含量均值16.21 mmol·L^(-1),95%可信区间(15.98,16.44)mmol·L^(-1),参考范围(16.21±0.70)mmol·L^(-1);乙酰色氨酸含量均值16.28 mmol·L^(-1),95%可信区间(15.82,16.74)mmol·L^(-1),参考范围(16.28±0.74)mmol·L^(-1);多聚体峰面积百分比均值7.43%,95%可信区间(7.30,7.56)%,参考范围(7.43±0.38)%(HPLC-SEC);pH值均值6.95,95%可信区间(6.92,6.98),参考范围(6.95±0.08)[测定温度(22±5)℃];吸光度均值0.06,95%可信区间(0.06,0.06),参考范围(0.06±0.01);钠离子含量均值135.2 mmol·L^(-1),95%可信区间(131.2,139.2)mmol·L^(-1),参考范围(135±12)mmol·L^(-1)。所有检测项目结果在考察期内量值没有发生趋势性变化。结论该批人血白蛋白国家对照品符合相关要求,可以发放使用。

关键词：人血白蛋白国家对照品蛋白质含量辛酸钠多聚体钠离子含量乙酰色氨酸含量

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重组蛋白质制品注射液渗透压摩尔浓度值测定的能力验证

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中国新药杂志 2019年第20期28卷 2482-2485页

作者：秦玺丁有学张河战赵萌刘兰史新昌饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:评价国内实验室重组蛋白制品注射液渗透压检验检测能力。方法:模拟重组蛋白制品设计并制备渗透压摩尔浓度参考品,组织来自不同省(市)、自治区的34家实验室进行协作检测,以2015年版《中华人民共和国药典》四部通则0632方法为检测方... 详细信息

目的:评价国内实验室重组蛋白制品注射液渗透压检验检测能力。方法:模拟重组蛋白制品设计并制备渗透压摩尔浓度参考品,组织来自不同省(市)、自治区的34家实验室进行协作检测,以2015年版《中华人民共和国药典》四部通则0632方法为检测方法,汇总结果后进行技术分析和统计分析,评估结果用基于Robust统计量的Z比分数对结果进行评价和报告。结果:各实验室检测均值|Z|分数值> 3的实验室有1家(占2. 9%,n=34);各实验室全部检测值|Z|分数值> 3的有1家。总体上讲,多数实验室(33/34)检测结果良好,但有1家实验室(1/34,编号444)检测结果偏离较大。结论:多数实验室的能力验证结果令人满意,可以准确地给出检测值,并且与其他实验室的数据基本保持一致,本次能力验证为重组蛋白制品检验能力普及奠定基础。

关键词：能力验证渗透压统计分析技术评价

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基于实验设计的抗PD-1/PD-L1单抗报告基因抗体依赖细胞介导的细胞毒效应生物学活性优化及验证方法的建立

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中国药学杂志 2019年第24期54卷 2010-2017页

作者：刘春雨于传飞崔永霏肖启东黄璟王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室

目的利用实验设计(design of experiment,DOE)建立抗程序性死亡因子1(programmed cell death 1,PD-1)及其配体(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)单抗基于报告基因的抗体依赖细胞介导的细胞毒效应(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性优化及验证方法。方法利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,分别以293FT-PD-1细胞系和CHO-PD-L1细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(Bright GloTM Luciferase Assay system)建立抗PD-1/PD-L1单抗的ADCC生物学活性检测方法,并运用DOE方法进行试验优化和方法学验证。结果抗PD-1/PD-L1单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D,方法经优化后确定抗体量效范围分别为10 000~4. 833 ng·m L^-1和2 000~0. 488 ng·m L^-1,效靶比(effect target ratio,E∶T)为分别为6∶1和3∶1,诱导时间均为20 h。该方法具有良好的专属性;抗PD-1单抗4个不同稀释组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(51. 74±2. 22)%、(77. 12±3. 14)%、(118. 71±2. 83)%和(156. 20±12. 99)%;对应的回收率分别为(103. 49±4. 44)%、(102. 83±4. 19)%、(94. 96±2. 26)%和(104. 14±8. 66)%,抗PD-L1单抗4个不同稀释组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(54. 32±4. 75)%、(75. 24±4. 25)%、(127. 40±2. 43)%和(156. 82±3. 27)%;对应的回收率分别为(108. 64±9. 51)%、(100. 33±5. 67)%、(101. 92±1. 94)%和(104. 55±2. 18)%,上述结果的RSD均小于10%。结论本实验利用DOE设计成功建立基于报告基因的抗PD-1/PD-L1单抗ADCC生物学活性的优化及验证方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗PD-1/PD-L1单抗ADCC生物学活性的评价方法。

关键词：实验设计抗PD-1/PD-L1单抗单克隆抗体抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用生物学活性报告基因优化验证

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