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病毒学报 2019年第2期35卷 292-299页

作者：王致萍柳欣林王大宁夏宁邵李少伟厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院厦门361102 厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室公共卫生学院厦门361102

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的小DNA病毒,主要感染人皮肤上皮细胞和黏膜,持续感染HPV会引起良性和恶性肿瘤,如尖锐湿疣和宫颈癌等多种疾病。HPV早期蛋白E6是引起宿主细胞发生恶性转化的关键致癌蛋白,其参与调... 详细信息

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一类无包膜的小DNA病毒,主要感染人皮肤上皮细胞和黏膜,持续感染HPV会引起良性和恶性肿瘤,如尖锐湿疣和宫颈癌等多种疾病。HPV早期蛋白E6是引起宿主细胞发生恶性转化的关键致癌蛋白,其参与调节宿主细胞内多个关键的生理生化过程,如促使抑癌蛋白p53的降解、激活端粒酶和降解细胞凋亡相关蛋白Bak(Bcl-2 homologous antagonist/killer)等,进而干扰宿主细胞的生长因子依赖性、细胞凋亡、细胞转录、DNA损伤反应、细胞周期和宿主细胞分化等一系列生命活动。因此,分析阐述HPV致癌蛋白E6的结构与功能,有助于阐明HPV诱发宫颈癌等恶性肿瘤的分子机理,为今后设计治疗性HPV疫苗奠定理论基础。本文就HPV致癌蛋白E6的结构及其生物学功能进行综述。

关键词：人乳头瘤病毒(HPV) 致癌蛋白E6 宫颈癌 p53蛋白

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水痘-带状疱疹病毒糖蛋白gE在昆虫细胞中的表达鉴定及其晶体培养

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中国病原生物学杂志 2019年第5期14卷 505-510页

作者：姚巧缤李婷婷荣芮张玉云李泽凯薛文辉李瑾瑾朱瑞程通顾颖夏宁邵李少伟厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361102 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室

目的利用杆状病毒-昆虫表达系统建立纯化水痘带状疱疹病毒(VZV)包膜糖蛋白gE的方法,筛选gE蛋白的晶体培养条件,以期用于结构解析。方法将VZV糖蛋白gE基因序列克隆至杆状表达载体pAcgp67B载体中,利用High FiveTM昆虫细胞表达gE蛋白并进行... 详细信息

目的利用杆状病毒-昆虫表达系统建立纯化水痘带状疱疹病毒(VZV)包膜糖蛋白gE的方法,筛选gE蛋白的晶体培养条件,以期用于结构解析。方法将VZV糖蛋白gE基因序列克隆至杆状表达载体pAcgp67B载体中,利用High FiveTM昆虫细胞表达gE蛋白并进行TALON亲和层析纯化;利用WAVE生物波浪反应器建立含硒代甲硫氨酸的gE蛋白方法,以便在晶体结构解析中利用单波长或多波长异常散射进行相位解析;通过分子排阻色谱、分析超离,差示扫描量热法和酶联免疫吸附试验等分析gE蛋白的理化性质;利用结晶试剂盒对gE498和gE354蛋白的结晶条件进行初筛。结果获得的gE498和gE354蛋白纯度约为90%、产量为8~10 mg/L。理化分析显示两种gE蛋白在溶液中主要以均一稳定的单体形式存在,并呈现出良好的反应原性。在gE354晶体初筛中获得3个结晶条件:CrystalH3、PEGH12和IndexB10。结论建立了VZV糖蛋白gE表达和纯化方法,制备的蛋白纯度高,且具有反应原性,并筛选出CrystalH3、PEGH12和IndexB10这3个结晶条件,为gE糖蛋白的结构与功能研究及新型疫苗开发奠定了基础。

关键词：水痘-带状疱疹病毒糖蛋白gE 杆状病毒-昆虫表达系统晶体培养硒代甲硫氨酸

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新城疫病毒株F48E9对CT26小鼠结肠癌的溶瘤治疗作用

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中国人兽共患病学报 2019年第4期35卷 292-298,319页

作者：钟建平李睿王国松洪俊平付饶陈毅歆厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门361102 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室厦门361102

目的分析新城疫病毒株F48E9对CT26小鼠结肠癌的体内外肿瘤杀伤作用和F48E9静脉注射BLAB/c小鼠的安全性数据,评估新城疫强毒株F48E9用于溶瘤治疗的潜力,为后续基于强毒株F48E9进行基因组改造提供科学依据。方法利用CCK-8试剂盒分析F48E9... 详细信息

目的分析新城疫病毒株F48E9对CT26小鼠结肠癌的体内外肿瘤杀伤作用和F48E9静脉注射BLAB/c小鼠的安全性数据,评估新城疫强毒株F48E9用于溶瘤治疗的潜力,为后续基于强毒株F48E9进行基因组改造提供科学依据。方法利用CCK-8试剂盒分析F48E9对CT26肿瘤细胞的体外杀伤效果,通过瘤内注射病毒评价F48E9对CT26荷瘤小鼠的溶瘤治疗效果,以及通过尾静脉注射病毒评估F48E9对健康BALB/c小鼠的潜在毒副作用。结果 MOI为0.1的F48E9对CT26细胞生长可表现出明显的抑制作用,随着MOI的升高,F48E9对细胞生长的抑制作用明显增强;0.1 mL浓度为2×10~7pfu/mL的F48E9对BALB/c小鼠CT26皮下移植瘤的生长有显著抑制作用,治疗组的平均生存期为38.4 d,未治疗组的平均生存期为15.2 d;免疫组化分析显示F48E9对CT26小鼠移植瘤细胞的增殖有明显抑制作用;F48E9尾静脉注射正常BALB/c小鼠的安全性评估实验显示,该毒株对小鼠无明显副作用。结论新城疫强毒株F48E9对CT26小鼠结直肠癌有较好的溶瘤治疗潜力,可作为候选病毒株通过后续的反向遗传学改造建立更安全有效的溶瘤病毒株,为肿瘤研究与治疗提供新手段。

关键词：新城疫病毒(NDV) 结肠癌溶瘤治疗安全性评价

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小鼠抗人呼吸道合胞病毒磷蛋白(P蛋白)单克隆抗体的制备和鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2019年第11期35卷 1035-1041页

作者：司竣宇詹炉停依含赵敏张伟孙永鹏郑子峥夏宁邵厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室福建厦门361102 厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361102 厦门大学生命科学学院福建厦门361102 厦门大学公共卫生学院福建厦门361102

目的制备抗人类呼吸道合胞病毒(HRSV)磷蛋白(P蛋白)单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法以原核表达系统表达的HRSV P蛋白重叠肽段作为免疫原,采用杂交瘤技术筛选P蛋白单克隆抗体,Western blot法验证筛选获得的单克隆抗体与P蛋白的结合活性... 详细信息

目的制备抗人类呼吸道合胞病毒(HRSV)磷蛋白(P蛋白)单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法以原核表达系统表达的HRSV P蛋白重叠肽段作为免疫原,采用杂交瘤技术筛选P蛋白单克隆抗体,Western blot法验证筛选获得的单克隆抗体与P蛋白的结合活性,免疫荧光细胞化学染色确定获得的单克隆抗体能否用于RSV感染后HEp-2细胞中P蛋白的检测。结果筛选出反应性好、特异性识别HRSV P蛋白的单克隆抗体P181-15A3、P211-16D8。获得的单克隆抗体通过Western blot法验证可与P蛋白结合,并可用于RSV感染后HEp-2细胞中P蛋白的免疫细胞化学检测。结论成功制备了小鼠抗HRSV P蛋白的单克隆抗体。

关键词：人类呼吸道合胞病毒(HRSV) 磷蛋白(P蛋白) 单克隆抗体

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氧化锌纳米颗粒毒作用机制及抗癌相关研究进展

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毒理学杂志 2019年第2期33卷 157-161页

作者：张博雅殷晓辰林雅华王鑫赵勤俭厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门大学分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室厦门大学公共卫生学院福建厦门361102 厦门大学生命科学学院福建厦门361102

随着纳米技术迅速发展,纳米形式的金属氧化物被广泛应用于疾病诊断、药物递呈及生物成像等领域。氧化锌纳米颗粒(zinc oxide nanoparticles, ZnO NPs)是一种具备特殊理化性质(例如小尺寸效应、表面效应、量子尺寸效应和宏观量子隧道效应... 详细信息

随着纳米技术迅速发展,纳米形式的金属氧化物被广泛应用于疾病诊断、药物递呈及生物成像等领域。氧化锌纳米颗粒(zinc oxide nanoparticles, ZnO NPs)是一种具备特殊理化性质(例如小尺寸效应、表面效应、量子尺寸效应和宏观量子隧道效应等),应用前景广泛的多功能无机纳米材料[1]。与其他金属(Au、Ag等)或金属氧化物(TiO2、CuO和FeO)纳米粒子相比,ZnO NPs具有低成本、容易获得,可进行大量工业生产。

关键词：氧化锌纳米颗粒活性氧锌离子毒性作用抗癌潜力

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水痘-带状疱疹病毒主要衣壳蛋白ORF40单克隆抗体的制备及初步应用

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中国免疫学杂志 2019年第9期35卷 1095-1099页

作者：蔡琳俐王玮付文锟潘德全叶江辉朱桦程通夏宁邵厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门361102 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室厦门361102 美国罗格斯大学新泽西医学院微生物学与分子遗传学系纽瓦克070101

目的:制备抗水痘-带状疱疹病毒(VZV)主要衣壳蛋白ORF40的单克隆抗体,对该蛋白在VZV感染细胞内的表达、分布以及在VZV病毒颗粒中的包含情况进行初步探究。方法:设计并合成VZV ORF40多肽片段,偶联牛血清白蛋白后免疫小鼠,制备与筛选抗VZV ... 详细信息

目的:制备抗水痘-带状疱疹病毒(VZV)主要衣壳蛋白ORF40的单克隆抗体,对该蛋白在VZV感染细胞内的表达、分布以及在VZV病毒颗粒中的包含情况进行初步探究。方法:设计并合成VZV ORF40多肽片段,偶联牛血清白蛋白后免疫小鼠,制备与筛选抗VZV ORF40单克隆抗体,使用获得的抗体通过Western blot和免疫荧光法对VZV感染细胞进行检测,并通过Western blot对纯化的VZV病毒颗粒进行检测。结果:获得VZV ORF40单克隆抗体10F2,该抗体可特异性识别VZV感染细胞表达的以及VZV病毒颗粒包含的ORF40蛋白;本研究应用该抗体确定了ORF40蛋白在VZV感染细胞中的核定位,并且发现ORF40蛋白在核周有点状聚集现象,在细胞质区域偶尔也能检测到ORF40蛋白的分布。结论:本研究筛选获得抗VZV ORF40的特异性单克隆抗体,为后续开展该蛋白在VZV感染与病毒颗粒组装过程中的功能研究奠定基础。

关键词：水痘-带状疱疹病毒主要衣壳蛋白 ORF40 单克隆抗体

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抗体应答研究技术在非人灵长类感染与免疫模型中的应用

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病毒学报 2018年第3期34卷 448-456页

作者：王一文罗文新夏宁邵厦门大学分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院公共卫生学院

近年来,随着单个B细胞抗体筛选技术与深度测序（Deep Sequencing）的发展,相应技术被广泛应用于人体内抗体应答研究中。但该类技术在非人灵长类（Non-Human Primates,NHPs）抗体应答研究中的应用较为有限。而NHPs由于与人类具有较为相... 详细信息

近年来,随着单个B细胞抗体筛选技术与深度测序（Deep Sequencing）的发展,相应技术被广泛应用于人体内抗体应答研究中。但该类技术在非人灵长类（Non-Human Primates,NHPs）抗体应答研究中的应用较为有限。而NHPs由于与人类具有较为相似的免疫系统,二者在感染或免疫后可以激起相似的获得性免疫应答,尤其是对NHPs产生的针对病原体感染或疫苗的NHP抗体应答谱研究,可以为人类免疫学研究、疫苗设计及生物药物临床转化提供关键信息。本文对目前常用非人灵长类抗体筛选技术的研究进展与应用实例进行了综述,以期为生物大分子药物研究者提供较为完备的参考。

关键词：非人灵长类抗体应答单个B细胞重组技术

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HIV-1 CAP2NC蛋白的表达及体外自组装

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生物工程学报 2018年第4期34卷 586-593页

作者：白诗梦张芝晴乔佳明沈鸿霖黄芳高双全李少勇李少伟夏宁邵顾颖厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361102 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室福建厦门361102

构建并表达HIV-1 CAP2NC蛋白,探索其体外自组装条件。通过PCR技术扩增HIV-1(NL4-3毒株)CAP2NC基因片段,并将其连接到原核表达载体pTO-T7,获得重组质粒pTO-T7-CAP2NC,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经疏水层析纯化后获得重组蛋白CAP2N... 详细信息

构建并表达HIV-1 CAP2NC蛋白,探索其体外自组装条件。通过PCR技术扩增HIV-1(NL4-3毒株)CAP2NC基因片段,并将其连接到原核表达载体pTO-T7,获得重组质粒pTO-T7-CAP2NC,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经疏水层析纯化后获得重组蛋白CAP2NC。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白CAP2NC可在大肠杆菌可溶高效表达,经纯化后纯度约为95%。ELISA检测表明重组蛋白CAP2NC可被HIV-1衣壳蛋白特异性单克隆抗体识别,具有较好反应活性。重组蛋白透析后在非原性SDS-PAGE中呈现为多种聚体形式。分子筛排阻层析分析CAP2NC蛋白透析后可进行组装,负染电镜进一步观察显示CAP2NC蛋白在RNA存在条件下,可形成空心管状颗粒,其形态结构与HIV-1病毒衣壳体外自组装形成的类似。上述结果表明HIV-1 CAP2NC蛋白具有体外自组装的性质,为进一步在体外研究非成熟病毒样颗粒结构奠定基础。

关键词： HIV-1 CAP2NC蛋白自组装

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分子对接预测病毒表位的研究进展

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中国病毒病杂志 2019年第4期9卷 296-302页

作者：李子真黄洋俞海李少伟夏宁邵厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361102 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室福建厦门361102

分子对接技术是基于相互作用分子的结构特征,预测蛋白质或酶与配体相互作用细节和反应机制的方法。与一般的实验方法比较,其具有快捷、自动化、高通量、低成本和信息丰富等特点。至今,由于局限于有限的结构信息,特别是分子的相互作用,... 详细信息

分子对接技术是基于相互作用分子的结构特征,预测蛋白质或酶与配体相互作用细节和反应机制的方法。与一般的实验方法比较,其具有快捷、自动化、高通量、低成本和信息丰富等特点。至今,由于局限于有限的结构信息,特别是分子的相互作用,人们对诸多病毒被受体识别并感染细胞过程和产生免疫保护仍然缺乏详细的理论基础,同时许多病毒导致的疾病仍缺乏有效的疫苗或药物。另一方面利用实验方法进行病原体的研究需要消耗大量的资源和时间,如何加速病毒学相关的基因组学信息分析和新发突发病毒的药物开发等过程,分子对接技术起到了不可或缺的作用。本文主要概述了分子对接技术的理论、搜索算法、打分函数、准确性及其在病毒表位预测中的应用,为计算机模拟的病毒表位预测及疫苗或药物研发提供参考。

关键词：分子对接搜索算法打分函数表位预测肽疫苗病毒表位

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呼吸道合胞病毒核蛋白检测抗体的筛选与鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2018年第3期38卷 161-168页

作者：林雪张伟赵敏郑子峥夏宁邵厦门大学、分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室、国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心 361102 厦门大学公共卫生学院 361102 厦门大学生命科学学院 361102

目的筛选识别呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）核蛋白（N）的单克隆抗体，并对其性质进行鉴定。方法使用大肠杆菌表达系统原核表达重组N蛋白，蛋白质纯化后免疫BALB/c小鼠。通过脾脏免疫、融合获得杂交瘤细胞，结合... 详细信息

目的筛选识别呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）核蛋白（N）的单克隆抗体，并对其性质进行鉴定。方法使用大肠杆菌表达系统原核表达重组N蛋白，蛋白质纯化后免疫BALB/c小鼠。通过脾脏免疫、融合获得杂交瘤细胞，结合有限稀释法亚克隆细胞株，间接酶联免疫吸附试验（ELISA）对单克隆抗体株进行筛选，并通过蛋白质免疫印迹法（Western blot）、ELISA和间接免疫荧光技术对最终筛选的单克隆抗体进行性质鉴定，根据正交试验的结果挑选捕获能力和检测效果较好的抗体进行诊断试剂的初步调试。结果成功构建N-pTO-T7原核表达载体，并成功表达、纯化得到高纯度重组N蛋白用于小鼠免疫，最终筛选获得24株N蛋白的单克隆抗体，24株抗体均具有较好的ELISA反应性，5A2等8株抗体有较好的Western blot检测特性，11H8等13株抗体可用于间接免疫荧光检测，并获得能够实现在病毒上检测N蛋白的优选配对12F2/11H8-HRP和12F2/15A8-HRP。结论本研究成功筛选出可用于N蛋白特异性检测的单克隆抗体及抗体配对，为RSV感染机制的研究及诊断试剂的研发提供实验资料。

关键词：呼吸道合胞病毒 N蛋白单克隆抗体

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