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中国男科学杂志 2008年第10期22卷 9-12页

作者：刘艳波赵丽娟郭亚雄韩向北李德龙董妍赵雪俭吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021 北华大学基础医学院病理生理学教研室美国杜兰大学Roswell Park癌化学防治教研室

目的观察人参二醇组皂苷(panoxadiol saponin PDS)体外对DU145前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法采用MTT比色法检测不同浓度PDS对DU145细胞增殖活力的影响。吖啶橙染色观察PDS诱导细胞凋亡情况;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡,并计算... 详细信息

目的观察人参二醇组皂苷(panoxadiol saponin PDS)体外对DU145前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法采用MTT比色法检测不同浓度PDS对DU145细胞增殖活力的影响。吖啶橙染色观察PDS诱导细胞凋亡情况;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡,并计算细胞平均凋亡率;细胞免疫化学和Western blot技术观察细胞内激活的caspase3的表达。结果经中(100mg/L)、高(200mg/L)剂量的PDS处理后,DU145细胞生长受到不同程度抑制,且呈现剂量依赖性;吖啶橙荧光染色可见经中、高剂量PDS处理后的细胞呈明显凋亡形态,并随药物剂量增加,凋亡细胞数增多;流式细胞术结果显示,PDS可明显提高细胞的凋亡率,呈剂量依赖关系;免疫细胞化学染色和Western blot结果,随着PDS剂量增加,细胞内激活的caspase3的表达上调。结论 PDS体外对DU145细胞增殖具有明显的抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。

关键词：细胞凋亡人参二醇皂苷前列腺肿瘤细胞周期

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Poly I∶C对人前列腺癌细胞PC-3M的生长抑制作用

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吉林大学学报（医学版） 2007年第1期33卷 64-66,F0003页

作者：赵燕颖潘玉琢李扬刘亚男高丽芳赵雪俭吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021

目的:观察聚肌胞(PolyI∶C)对体外培养的人前列腺癌细胞PC-3M生长的抑制作用。方法:前列腺癌PC-3M细胞经不同剂量PolyI∶C(100、200和400μg.L-1)作用后,相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞... 详细信息

目的:观察聚肌胞(PolyI∶C)对体外培养的人前列腺癌细胞PC-3M生长的抑制作用。方法:前列腺癌PC-3M细胞经不同剂量PolyI∶C(100、200和400μg.L-1)作用后,相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期变化。结果:对照组细胞呈梭形贴壁生长,细胞数目多,PolyI∶C组细胞变圆贴壁不佳,细胞数目变少。PolyI∶C 400μg.L-1组的生长抑制率最高,200μg.L-1组次之,100μg.L-1组最低,三组间比较差异有显著性(P<0.05);Poly I∶C同一剂量组生长抑制率72 h最高,48 h次之,24 h时最低,三组间比较差异有显著性(P<0.05)。流式细胞检测结果显示:PolyI∶C可诱导PC-3M凋亡,凋亡率呈剂量依赖性,分别为3.9%、27.1%和42.9%,三组间比较差异有显著性(P<0.05)。PolyI∶C组细胞处于G1期的百分率(61.4%)明显高于对照组(33.9%)(P<0.05)。结论:PolyI∶C能抑制体外培养的PC-3M细胞生长,对PC-3细胞有显著的增殖抑制作用,呈剂量依赖性和时间依赖性,其机制可能与细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡有关。

关键词：聚肌胞前列腺肿瘤凋亡细胞周期

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人参单体皂苷Rh_2诱导小鼠前列腺癌RM-1细胞凋亡

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吉林大学学报（医学版） 2007年第4期33卷 655-657,777,F0002页

作者：何静春孟艳赵洪艳赵丽娟赵雪俭吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021

目的：探讨人参单体皂苷Rh2抗小鼠前列腺癌细胞RM-1的作用机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法检测不同浓度Rh2与RM-1细胞株存活率的关系;吖啶橙染色观察Rh2诱导细胞凋亡情况;流式细胞仪分析细胞凋亡周期,计算细胞平均凋亡指... 详细信息

目的：探讨人参单体皂苷Rh2抗小鼠前列腺癌细胞RM-1的作用机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法检测不同浓度Rh2与RM-1细胞株存活率的关系;吖啶橙染色观察Rh2诱导细胞凋亡情况;流式细胞仪分析细胞凋亡周期,计算细胞平均凋亡指数。结果：RM-1细胞经Rh2处理后,细胞生长明显受抑制,当Rh2浓度为5、15、25和30mg·L^-1时,其生长抑制率分别为12.0%、36.1%、51.2%和69.3%,呈明显的浓度依赖性;吖啶橙荧光染色可见经药物处理的细胞呈现明显的凋亡形态;细胞周期G1期前出现凋亡峰,Rh2浓度为15和25mg·L^-1时,细胞凋亡率分别为41.9%和48.9%。结论：5-30mg·L^-1Rh2可诱导RM-1细胞凋亡,其具有明显的抗肿瘤作用。

关键词：细胞凋亡人参单体皂苷Rh2 前列腺肿瘤细胞周期

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人前列腺癌多药耐药细胞系的建立

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吉林大学学报（医学版） 2007年第4期33卷 651-654,F0002页

作者：潘玉琢赵燕颖赵雪俭李扬吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021

目的:建立人前列腺癌多药耐药细胞系。方法:以顺铂为诱导药物,人前列腺癌细胞PC3M为诱导对象,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人前列腺癌多药耐药细胞系PC3M/CDDP;MTT法检测药物敏感性,免疫细胞化学法检测P-糖蛋白(P... 详细信息

目的:建立人前列腺癌多药耐药细胞系。方法:以顺铂为诱导药物,人前列腺癌细胞PC3M为诱导对象,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人前列腺癌多药耐药细胞系PC3M/CDDP;MTT法检测药物敏感性,免疫细胞化学法检测P-糖蛋白(P-gP)、多药耐药相关蛋白(MRP)的表达。结果:经顺铂诱导建立的人前列腺癌细胞系PC3M/CDDP对顺铂、丝裂霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、长春新碱等药物的50%抑制浓度(IC50)分别为(0.603±0.102)、(0.201±0.056)、(0.267±0.067)、(1.676±0.321)和(0.657±0.227)mg·L-1,与PC3M细胞系比较差异有显著性(P<0.05);免疫细胞化学染色结果显示,PC3M/CDDP细胞系MRP、P-gP表达强度明显大于PC3M细胞系(P<0.05);PC3M/CDDP细胞系的细胞倍增时间为40.5h,与PC3M细胞系(48.6h)比较差异无显著性(P>0.05)。结论:成功建立稳定的人前列腺癌PC3M/CDDP细胞系,该细胞系具有对多种抗癌药耐药及细胞增殖未受影响的特点,可应用于下游实验。

关键词：人前列腺癌细胞多药耐药相关蛋白质类 P-糖蛋白抗肿瘤药

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前列腺癌患者血清中铜、锌与铜/锌比值的变化及意义

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中国男科学杂志 2007年第5期21卷 9-10,14页

作者：汲坤张灵邵月婷田勇梁作文刘亚男李晓萌李扬赵雪俭吉林大学基础医学院病理生理教研室暨吉林大学前列腺疾病防治研究中心长春130021

目的探讨血清铜、锌含量与前列腺癌之间的关系,并将其与血清前列腺特异性抗原(PSA)比较,探讨其在前列腺癌诊断中价值比较。方法采用原子吸收分光光度法测定76例前列腺癌患者、125例前列腺增生患者和191例健康男性的血清铜、锌含量。结... 详细信息

目的探讨血清铜、锌含量与前列腺癌之间的关系,并将其与血清前列腺特异性抗原(PSA)比较,探讨其在前列腺癌诊断中价值比较。方法采用原子吸收分光光度法测定76例前列腺癌患者、125例前列腺增生患者和191例健康男性的血清铜、锌含量。结果前列腺癌组血清锌明显低于健康对照组,血清铜和铜/锌比值明显高于健康对照组(P<0.05)。前列腺癌组血清铜及铜/锌比值与前列腺增生组比较未见显著性差异;前列腺癌组血清锌低于前列腺增生组(P<0.05)。前列腺增生组血清锌与健康对照组比较未见显著性差异;前列腺增生组血清铜和铜/锌比值高于健康对照组(P<0.05)。PSA在4.0-10.0ng/ml灰色区域的前列腺癌组,血清锌ROC-AUC(receiver operator characteristic curve-area under curve)为66%,高于PSA的ROC-AUC。结论血清铜、铜/锌比值升高及血清锌降低可能是前列腺癌发生的危险因素,血清锌在PSA(4.0～10.0)ng/ml灰色区域的前列腺癌诊断效率高于PSA,其可能为前列腺癌的诊断提供有价值的指标。

关键词：前列腺肿瘤铜锌前列腺特异性抗原

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2mol/L尿素溶血试验在UT-B基因敲除小鼠核型鉴定中的应用

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中国实验诊断学 2007年第11期11卷 1425-1428页

作者：赵华山李志满吕斌郭丽荣梁爽陈燕孟艳杨宝学赵雪俭吉林大学基础医学院病理生理学教研室暨吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021 吉林大学实验动物中心吉林大学第一临床医院肾病科

目的探讨2 mol/L尿素溶血试验在UT-B基因敲除小鼠核型鉴定中的作用。方法(1)按SP级动物饲养标准进行饲养和繁殖;以UT-B基因敲除纯合子(UT-B-/-)成年雄鼠与C57/bl雌鼠合笼,繁殖出UT-B基因敲除杂合型小鼠(UT-B+/-,F1代),F1代UT-B+/-雄、... 详细信息

目的探讨2 mol/L尿素溶血试验在UT-B基因敲除小鼠核型鉴定中的作用。方法(1)按SP级动物饲养标准进行饲养和繁殖;以UT-B基因敲除纯合子(UT-B-/-)成年雄鼠与C57/bl雌鼠合笼,繁殖出UT-B基因敲除杂合型小鼠(UT-B+/-,F1代),F1代UT-B+/-雄、雌鼠交配获F2代小鼠。(2)取F2代小鼠剪尾提取基因组DNA进行核型鉴定筛选纯合子小鼠(UT-B-/-)和野生型小鼠(UT-B+/+);(3)应用2 mol/L尿素溶血试验和肾脏RT-PCR进行UT-B-/-(JKnull)表型鉴定。结果(1)在SP级饲养和繁殖的条件下,已获得足够的UT-B-/-和UT-B+/+小鼠;(2)2 mol/L尿素溶血试验证明,UT-B+/+小鼠和UT-B+/-小鼠的红细胞加入到2 mol/L尿素中立刻溶血,UT-B-/-小鼠的红细胞10 min内不溶显示溶血抵抗。结论2 mol/L尿素溶血试验可准确地鉴定出UT-B-/-小鼠,与基因组DNA的PCR鉴定方法联合应用,可以使引进的UT-B-/-小鼠稳定繁殖、传代。

关键词： UT-B 基因敲除小鼠尿素溶血试验

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DIM对人激素非依赖性前列腺癌细胞PC3M的生长抑制作用

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吉林大学学报（医学版） 2006年第6期32卷 1034-1036页

作者：潘玉琢李扬赵燕颍赵丹禹彬赵雪俭吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021

目的:探讨3,3-二吲哚基甲烷(3,3-Diindolylmethane,DIM)对人激素非依赖性前列腺癌细胞PC3M的生长抑制作用。方法:应用MTT生长抑制实验观察不同浓度DIM对PC3M细胞增殖活性的影响,流式细胞术观察不同浓度DIM对PC3M细胞的细胞周期及细胞凋... 详细信息

目的:探讨3,3-二吲哚基甲烷(3,3-Diindolylmethane,DIM)对人激素非依赖性前列腺癌细胞PC3M的生长抑制作用。方法:应用MTT生长抑制实验观察不同浓度DIM对PC3M细胞增殖活性的影响,流式细胞术观察不同浓度DIM对PC3M细胞的细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:不同浓度的DIM对PC3M细胞有显著的增殖抑制作用(P<0.05),药物浓度为10、30、60和120μmol.L-1时,抑制率分别为35.6%、58.8%、76.6%和90.5%。当药物浓度为60μmol.L-1时,细胞周期停滞在G1期,并诱导22.6%的PC3M细胞发生凋亡。结论:DIM可抑制PC3M细胞增殖,并诱导其凋亡,为DIM用于激素非依赖性前列腺癌的治疗提供了实验依据。

关键词：前列腺肿瘤 3,3-二吲哚基甲烷细胞凋亡激素非依赖性

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锌对前列腺癌细胞PC-3M凋亡的影响

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吉林大学学报（医学版） 2006年第5期32卷 808-811页

作者：刘瑾张灵李晓萌许莉汲坤赵雪俭李扬吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021

目的:探讨锌对前列腺癌细胞PC-3M凋亡的影响。方法:分别选用不同浓度ZnSO4·7H2O(终浓度分别为6·25、15、25、50、100、150、200、250及300μmol·L-1)作用于PC-3M细胞24h,用MTT法筛选对PC-3M细胞增殖抑制的有效浓度,利用... 详细信息

目的:探讨锌对前列腺癌细胞PC-3M凋亡的影响。方法:分别选用不同浓度ZnSO4·7H2O(终浓度分别为6·25、15、25、50、100、150、200、250及300μmol·L-1)作用于PC-3M细胞24h,用MTT法筛选对PC-3M细胞增殖抑制的有效浓度,利用吖啶橙/溴化乙锭染色、DNAladder及流式细胞术检测PC-3M细胞凋亡情况。结果:MTT显示,锌的浓度在250μmol·L-1时,PC-3M细胞存活率显著低于对照组(P<0·01)。Zn2+浓度达250μmol·L-1时,相差显微镜下细胞形态变化明显,细胞变长,并伸出较长的突起,细胞分裂相明显减少,细胞数量较对照组明显减少。吖啶橙/溴化乙锭染色显示,对照组细胞形态为规则的圆形,细胞膜光滑无皱缩和发泡,呈现均匀的绿色,偶可见橙色细胞(自然凋亡细胞);Zn2+(250μmol·L-1)作用后,相差显微镜下可观察到较多早期凋亡细胞,细胞多为圆形,但细胞膜较对照组粗糙,细胞呈绿色,细胞核中有鲜绿色的斑点;也可观察到较多的晚期凋亡细胞,细胞形状不规则,细胞膜粗糙,有较多突起,被吖啶橙染成橙色,细胞中有鲜亮的橙色斑点。DNAladder可见梯形条带出现;流式细胞术显示亚二倍体峰的出现,细胞凋亡率为13·3%。上述各项指标均显示PC-3M细胞的凋亡水平明显高于对照组(P<0·05)。结论:高Zn2+可以抑制前列腺癌细胞生长并诱导前列腺癌细胞凋亡。

关键词：锌 PC-3M细胞细胞凋亡

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聚肌胞对小鼠前列腺癌的抑制作用

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吉林大学学报（医学版） 2006年第5期32卷 819-821页

作者：田原僮潘玉琢赵燕颖范文静赵丽娟赵雪俭吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021

目的:观察聚肌胞对小鼠前列腺癌的抑制作用。方法:将16只C57BL6/J纯系荷瘤小鼠按瘤重采用区组随机分组方法分为对照组和聚肌胞组,每组8只,每隔2日分别瘤内注射生理盐水和聚肌胞,第7次后切除瘤灶,称瘤重,计算瘤重抑制率,绘制前列腺癌生... 详细信息

目的:观察聚肌胞对小鼠前列腺癌的抑制作用。方法:将16只C57BL6/J纯系荷瘤小鼠按瘤重采用区组随机分组方法分为对照组和聚肌胞组,每组8只,每隔2日分别瘤内注射生理盐水和聚肌胞,第7次后切除瘤灶,称瘤重,计算瘤重抑制率,绘制前列腺癌生长曲线及荷瘤鼠生存曲线。前列腺癌组织HE染色观察形态学变化。结果:对照组和聚肌胞组瘤重分别为(4·14±1·56)和(1·58±0·67)g,两组瘤重比较差异具有显著性(P<0·05);聚肌胞组瘤重抑制率为67·85%;前列腺癌生长曲线显示,聚肌胞组小鼠前列腺癌生长较慢;聚肌胞组荷瘤小鼠的生存时间较对照组长(P<0·05);病理显示对照组较聚肌胞组前列腺癌细胞增殖活跃。结论:聚肌胞可以减慢小鼠前列腺癌的生长,延长荷瘤小鼠生存时间。

关键词：前列腺肿瘤聚肌胞苷酸死亡率

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hERβ全长基因真核表达载体pEGFP-C1-hERβ的构建及其在PC-3M细胞中的表达

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吉林大学学报（医学版） 2006年第2期32卷 189-193页

作者：李峰邵月婷何静春秦宣锋陈超王驭良孙连坤李扬赵雪俭吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林大学前列腺疾病防治研究中心吉林长春130021 吉林大学临床医学一系

目的:构建人雌激素受体β(hERβ)全长基因的真核表达载体pEGFP-C1-hERβ,并转染激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3M。方法:采用RT-PCR法从卵巢囊肿患者切除的部分正常卵巢组织中钓取hERβ全长基因(1 593 bp),与pMD18-T载体连接做全自动序... 详细信息

目的:构建人雌激素受体β(hERβ)全长基因的真核表达载体pEGFP-C1-hERβ,并转染激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3M。方法:采用RT-PCR法从卵巢囊肿患者切除的部分正常卵巢组织中钓取hERβ全长基因(1 593 bp),与pMD18-T载体连接做全自动序列测定。将测序正确的克隆质粒pMD18-T-hERβ和表达载体pEGFP-C1分别用HindⅢ和BamHⅠ进行双酶切,应用基因重组技术构建hERβ全长基因真核表达载体pEGFP-C1-hERβ。质粒经HindⅢ和BamHⅠ双酶切和PCR电泳鉴定后,采用脂质体转染法转染PC-3M细胞。结果:重组质粒经限制性酶切鉴定得到与hERβ全长基因长度一致(1 612 bp)的酶切产物;测序分析证实,PCR产物与GenBank上登录的hERβ基因(NM_001437)序列完全一致,表明成功地完成了hERβ的扩增和表达载体的构建;荧光显微镜下可见转染的PC-3M细胞有绿色荧光蛋白的表达;PCR测定分析,转染细胞hERβ的表达增加。结论:构建完成真核表达载体pEGFP-C1-hER,βhERβ基因在PC-3M细胞内成功表达。

关键词：受体,雌激素激素非依赖性前列腺癌细胞前列腺肿瘤真核表达遗传载体转染

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