检索结果-内蒙古大学图书馆

中华放射肿瘤学杂志 2022年第11期31卷 1039-1045页

作者：黎钰欣赵朝芬刘丽娜贺前勇徐歆宇周定安周建奖金风贵州医科大学附属医院肿瘤科贵阳550004 贵州医科大学附属肿瘤医院肿瘤科贵阳550008 贵州医科大学临床医学院肿瘤学教研室贵阳550004 贵州医科大学临床医学研究中心贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的探究BMAL1基因对耐放射鼻咽癌细胞株(5‐8FR)增殖、迁移和侵袭能力的影响及分子机制。方法小剂量分次照射构建鼻咽癌耐放射细胞5‐8FR,运用克隆形成实验结果拟合多靶单击模型并计算放疗增敏比。通过蛋白质印迹实验检测5‐8FR和对照... 详细信息

目的探究BMAL1基因对耐放射鼻咽癌细胞株(5‐8FR)增殖、迁移和侵袭能力的影响及分子机制。方法小剂量分次照射构建鼻咽癌耐放射细胞5‐8FR,运用克隆形成实验结果拟合多靶单击模型并计算放疗增敏比。通过蛋白质印迹实验检测5‐8FR和对照组5‐8F细胞株中PI3K/Akt/MMP‐2/9信号通路相关蛋白的表达。构建BMAL1基因的高表达及敲除载体,分别转染鼻咽癌细胞株5‐8F和耐放射细胞株5‐8FR,获得BMAL1基因过表达(pcDNA‐BMAL1)及其对照组(pcDNA)和干扰(BMAL1‐shRNA)及对照组(con‐shRNA)的稳转细胞株。蛋白质印迹法验证感染效率,检测两组细胞过表达或干扰BMAL1基因后PI3K/Akt/MMP‐2/9信号通路相关蛋白的改变情况。采用CCK‐8法、划痕实验、Transwell法检测过表达及干扰BMAL1基因后耐放疗细胞株5‐8FR增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果鼻咽癌耐放射细胞株中BMAL1基因表达下调,PI3K/Akt通路蛋白及下游相关分子MMP‐2、MMP‐9表达增加,TIMP‐2、TIMP‐1表达降低。过表达BMAL1基因可抑制PI3K/Akt通路蛋白及下游相关分子MMP‐2、MMP‐9表达,促进TIMP‐2、TIMP‐1表达,抑制耐放射鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,干扰BMAL1基因则结果相反。结论BMAL1基因可以逆转耐放射鼻咽癌细胞株PI3K/Akt/MMP‐2/9信号通路相关蛋白的表达,并抑制耐放射鼻咽癌细胞株的增殖、迁移和侵袭能力。

关键词：生物钟基因鼻咽肿瘤耐放射细胞株增殖迁移侵袭

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MicroRNA-29b重组慢病毒表达载体的构建及其抑制胃癌细胞系的迁移和增殖

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基础医学与临床 2011年第6期31卷 609-614页

作者：蒋崇亮汪晓艳龚佳男王芳余佳冯涛重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心生物化学与分子生物学教研室重庆400016 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建has-miR-29b重组慢病毒的表达载体,并观察其对胃癌细胞系迁移和增殖能力的影响。方法将PCR扩增的miR-29b前体序列和pMIR载体经双酶切后连接产生pMIR-miR-29b慢病毒表达载体。pMIR-miR-29b、Packaging Plasmid(s)和pVSV-G质粒共... 详细信息

目的构建has-miR-29b重组慢病毒的表达载体,并观察其对胃癌细胞系迁移和增殖能力的影响。方法将PCR扩增的miR-29b前体序列和pMIR载体经双酶切后连接产生pMIR-miR-29b慢病毒表达载体。pMIR-miR-29b、Packaging Plasmid(s)和pVSV-G质粒共转染包装细胞系293TN,包装产生慢病毒。使用收获的慢病毒颗粒感染胃癌细胞系HGC-27,72 h后利用real-time PCR检测miR-29b在HGC-27内的表达水平,Western blot检测其靶基因MCL-1的表达。划痕实验和细胞增殖实验分别观察在HGC-27细胞中过表达miR-29b后细胞迁移能力及增殖能力的变化。结果成功构建了miR-29b重组慢病毒的表达载体,感染胃癌细胞HGC-27后,能够成功过表达miR-29b。在HGC-27细胞中过表达miR-29b,其靶基因MCL-1的表达明显被抑制,并且Lenti-29b组与对照组Untreat组和Lenti-vector组相比,Lenti-29b组的迁移能力显著降低(P<0.01);Lenti-29b组与Lenti-vector组相比,Lenti-29b组在48、72及96 h 3个时间点的增殖能力均显著下降(P<0.01)。结论成功获得过表达miR-29b的重组慢病毒颗粒,miR-29b能够抑制其靶基因MCL-1的表达,并对HGC-27细胞的迁移和增殖有明显的抑制作用。

关键词： miR-29b 胃癌细胞慢病毒细胞迁移细胞增殖

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蛋白酶体激活因子REGγ的重组表达及其体外功能的初步探讨

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军事医学科学院院刊 2010年第1期34卷 5-7,11页

作者：吴敏聂晶张令强汪渊安徽医科大学分子生物学实验室和生物化学与分子生物学教研室合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京100850

目的蛋白酶体激活因子11S调节蛋白复合物γ亚单位(11S regulator complex gamma subunit,REGγ)的重组表达,初步探讨其与骨形成负调控分子酪蛋白激酶-2相互作用蛋白-1(caseinkinase-2interactingprotein-1,CK-IP-1)的相互作用。方法首先以质粒pCMV-Myc-REGγ为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出765bp的REGγcDNA片段,然后亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-2并转化入大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达,表达产物超声破碎后进行SDS-PAGE和Western印迹鉴定,进而通过GSTPull-down实验验证REGγ是否与CKIP-1存在相互作用。结果通过测序证实原核表达载体pGEX-4T-2-REGγ构建成功,进一步表达鉴定发现GST-REGγ蛋白主要以可溶性的形式存在于裂解上清中;GSTPull-down实验表明REGγ与CKIP-1存在明显的相互作用。结论REGγ与CKIP-1在体外存在相互作用,为进一步深入研究REGγ对CKIP-1的调控作用奠定了基础。

关键词：重组表达质粒蛋白酶体激活因子REGγ 酪蛋白激酶-2相互作用蛋白-1 聚合酶链反应

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从病毒细胞遗传进化的生物循环选育到新基因识别与验证

从病毒细胞遗传进化的生物循环选育到新基因识别与验证

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2003年中国科协“生物信息学与进化计算”青年科学家论坛

作者：张德礼李衍达黄高升方福德季梁朱关福北京大学医学部公共卫生学院营养与食品卫生学系，北京大学人类疾病基因研究中心，北京，100083 清华大学信息科学与技术国家实验室生物信息学研究部，清华大学生物信息学研究所生物信息学教育部重点实验室，清清华大学信息科学与技术国家实验室生物信息学研究部，清华大学生物信息学研究所生物信息学教育部重点实验室，清华大学信息科学技术学院自动化系智能技术与系统国家重点实验室，北京，100084 第四军医大学基础部病理学教研室，西京医院病理科，中国癌症研究基金会肿瘤研究所，西安，710032 中国医学科学院基础医学研究所，中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室，北京，710032

初步建立了病毒细胞遗传进化的优劣环境交替性生物循环选育作用的理论与技术体系并得到实际应用。发现细小病毒超高增殖的交替选育规律又在不同实验体系基因与染色体水平分别得到验证，从而发现了病毒细胞遗传进化的优劣环境交替性生物... 详细信息

初步建立了病毒细胞遗传进化的优劣环境交替性生物循环选育作用的理论与技术体系并得到实际应用。发现细小病毒超高增殖的交替选育规律又在不同实验体系基因与染色体水平分别得到验证，从而发现了病毒细胞遗传进化的优劣环境交替性生物循环的选育规律，提出了相关选育机制与方法，初步建立了这种选育作用的理论与技术体系并得到实际应用，它正是联系高效水貂细小病毒疫苗研制、痘苗病毒重组质粒转染技术创新、细胞系致癌毒理学安全性评价、异类肿瘤在体实验转化现象确立与横纹肌样瘤起源之谜初步揭示的纽带与桥梁，具有广泛的科学指导和实用意义。实际应用：(1)安全高效的水貂肠炎病毒细胞培养灭活疫苗的首次研制成功和长期广泛应用;(2)在对痘苗病毒重组质粒转染技术的探索性研究中首次简化了基因转染技术;(3)恶性横纹肌样瘤(MRT)在模型动物体内的首次发现和成功复制，为阐明其起源之谜提供了机会。从染色体遗传变异角度初步阐明了MRT的发生、发展规律，从比较医学角度揭示了MRT的组织细胞起源;(4)解了传代细胞(CCL)致癌毒理实验的难题，揭示了遗传变异率与致癌(瘤)的关系。在基因识别新方法与功能基因分离方面取得重要进展。建立了从计算机软件分析、人工干预分析及与实验生物学相结合角度来发现人类新基因的方法，并证明它是加速基因克隆和鉴定的一条有效途径。电子克隆百余人类新基因(还用合作开发的软件计算机识别800个人类新基因候选对象)，部分基因编码序列已被实验证实和引用，其中几个新克隆基因已在动物实验中显示出明显的生物学功能活性。发现了美国国家生物技术信息中心(NCBI)基因组注释项目公布的人类基因模式参考序列(REFSEQ)存在各种类型的多种/处错误，这一结果提示应慎重使用NCBI的REFSEQ数据库。

关键词：病毒细胞生物循环基因识别遗传进化

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血吸虫重组卡介苗-Sj26GST疫苗的构建及免疫原性的研究

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中华医学杂志 2000年第6期80卷 407-410页

作者：戴五星皇甫永穆郑波程继忠黄翠华黄海浪同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室武汉30030 武汉市白沙洲医院

目的　构建含日本血吸虫相对分子质量为 2 6 0 0 0的抗原 (Sj2 6GST)基因的重组卡介菌(rBCG)疫苗 ,观察其对BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法　采用分子生物学技术 ,将Sj2 6GSTcDNA克隆到人结核杆菌热休克蛋白 (HSP) 70启动子下游 ,构成... 详细信息

目的　构建含日本血吸虫相对分子质量为 2 6 0 0 0的抗原 (Sj2 6GST)基因的重组卡介菌(rBCG)疫苗 ,观察其对BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法　采用分子生物学技术 ,将Sj2 6GSTcDNA克隆到人结核杆菌热休克蛋白 (HSP) 70启动子下游 ,构成融合基因 ,再将此融合基因亚克隆到E .coli 分枝杆菌穿梭质粒pBCG 2 0 0 0中 ,构成重组质粒pBCG Sj2 6 ,然后转化卡介苗 (BCG) ,构成血吸虫重组BCG Sj2 6GST(rBCG Sj2 6GST)疫苗 ,经热诱导 ,在BCG中表达Sj2 6GST抗原。用rBCG Sj2 6GST疫苗皮下免疫BALB/c小鼠 ,以淋巴细胞刺激指数 (SI)反映细胞增殖能力 ,以NO释放量检测巨噬细胞吞噬活性 ,以ELISA试剂盒检测血清及脾淋巴细胞培养上清的白细胞介素 (IL) 2和干扰素 (IFN) γ的含量。结果　HSP70启动子与Sj2 6GSTcDNA融合基因已被克隆到pBCG 2 0 0 0穿梭表达质粒中 ,相对分子质量为 2 6 0 0 0处可见明显的表达蛋白带 ,其表达量占菌体总蛋白量的 15 %。rBCG Sj2 6GST疫苗以 10 6菌落形成单位 (CFU)经皮下免疫小鼠后 ,其脾SI为 2 .2 6± 0 .43,与对照组 (1.6 1± 0 .2 8) ,载体组(1.48± 0 .30 )和BCG组 (1.42± 0 .2 6 )比较 ,P <0 .0 5 ;巨噬细胞NO的含量为 35 7nmol/ml± 84nmol/ml,与对照组 (183nmol/ml± 33nmol/ml)和?

关键词：日本血吸虫疫苗合成基因表达免疫原性

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日本血吸虫32ku抗原基因的克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达

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同济医科大学学报 2000年第1期29卷 5-7页

作者：肖红郑波祁学忠皇甫永穆同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室武汉430030

日本血吸虫３２ｋｕ抗原（简称ｓｊ３２ｋｕ）是血吸虫的一种保护性抗原，为研究其重组疫苗的保护作用，将该抗原基因的全编码序列按正确的阅读框顺序插入到穿梭质粒ｐＢＣＧ２１００，受控于人结核杆菌热休克蛋白７０（Ｈｅａｔｓ... 详细信息

日本血吸虫３２ｋｕ抗原（简称ｓｊ３２ｋｕ）是血吸虫的一种保护性抗原，为研究其重组疫苗的保护作用，将该抗原基因的全编码序列按正确的阅读框顺序插入到穿梭质粒ｐＢＣＧ２１００，受控于人结核杆菌热休克蛋白７０（Ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏ－ｔｅｉｎ７０，简称ｈｓｐ７０）启动子，构建成重组表达质粒ｐＢＣＧ－ｓｊ３２，在大肠杆菌－分枝杆菌两个系统中能稳定复制。重组分枝杆菌于４２℃诱导２ｈ或４５℃诱导３０ｍｉｎ，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，在３２ｋｕ的位置能见到明显的蛋白条带，表明３２ｋｕ抗原能在分枝杆菌中高效表达。

关键词：分枝杆菌日本血吸虫疫苗基因表达

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日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠免疫应答的影响

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同济医科大学学报 2000年第1期29卷 1-3页

作者：戴五星郑波皇甫永穆同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室武汉430030

采用日本血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。免疫８周时，断头取血，取脾脏，取腹腔巨噬细胞。以淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）反映细胞增殖能力，以ＮＯ湫得检测巨噬细胞吞噬活性，以ＥＬＩＳＡ试剂盒检测血清及... 详细信息

采用日本血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。免疫８周时，断头取血，取脾脏，取腹腔巨噬细胞。以淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）反映细胞增殖能力，以ＮＯ湫得检测巨噬细胞吞噬活性，以ＥＬＩＳＡ试剂盒检测血清及脾淋巴细胞培养上清的白细胞介素２（ＩＬ－２＿和干扰素γ（ＩＦＮ－γ）的含量。结果表明，ｒＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗以１０＾－６ＣＦＵ剂量经皮下免疫小鼠后。

关键词：日本血吸虫重组BCG疫苗免疫应答疫苗

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电穿孔法对分枝杆菌进行高效基因转化

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北京医科大学学报 2000年第2期32卷 178-181页

作者：路艳艳皇甫永穆同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室武汉430030

目的 :探讨卡介苗 (BacilleCalmette Guerin ,BCG)分枝杆菌的电穿孔转化方法及其影响因素。方法 :在基因脉冲仪上用电穿孔法对快生长型耻垢分枝杆菌———M .Smegmatismc2 15 5和BCG电转化大肠杆菌分枝杆菌穿梭质粒ME 6 5。结果 :电... 详细信息

目的 :探讨卡介苗 (BacilleCalmette Guerin ,BCG)分枝杆菌的电穿孔转化方法及其影响因素。方法 :在基因脉冲仪上用电穿孔法对快生长型耻垢分枝杆菌———M .Smegmatismc2 15 5和BCG电转化大肠杆菌分枝杆菌穿梭质粒ME 6 5。结果 :电穿孔法可以成功地转化两种分枝杆菌 ,筛选出卡那霉素抗性菌株。通过对转化子提取质粒进行酶切鉴定和PCR扩增均证明为阳性重组体。转化效率达 10 4 / μgDNA。重组质粒可以在分枝杆菌中稳定复制。初步结果表明 ,质粒DNA的构象和浓度、初始培养物的浓度和活力、电转化参数包括电压、电阻以及转化前对菌体的冰浴时间等都对转化效率有一定的影响。结论 :BCG重组疫苗研制中分枝杆菌的基因转化问题的解决为研制能表达分枝杆菌及其它感染性疾病或肿瘤抗原的BCG多价重组疫苗提供了实验基础。

关键词：分枝杆菌卡介苗电穿孔基因转化

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己酮可可碱对呼吸道合胞病毒所致的TNF-α基因表达水平的影响

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同济医科大学学报 2000年第5期29卷 417-419页

作者：彭毅陶晓南杨业金付薇向敏张瑞祥同济医科大学附属协和医院呼吸病研究室武汉430022 同济医科大学实验医学研究中心分子生物学教研室武汉43003

观察己酮可可碱 (PTX)对呼吸道合胞病毒 (RSV)所诱导的巨噬细胞肿瘤坏死因子 (TNF-α)含量及 TNF-α m RNA表达水平的影响。收集 Balb/c小鼠腹腔巨噬细胞 ,随机分成三组 1对照组 (NOR组 ) ;2感染组 (RSV组 ) :培养基中含有 10 6pfu的 RS... 详细信息

观察己酮可可碱 (PTX)对呼吸道合胞病毒 (RSV)所诱导的巨噬细胞肿瘤坏死因子 (TNF-α)含量及 TNF-α m RNA表达水平的影响。收集 Balb/c小鼠腹腔巨噬细胞 ,随机分成三组 1对照组 (NOR组 ) ;2感染组 (RSV组 ) :培养基中含有 10 6pfu的 RSV;3己酮可可碱组 (PTX组 ) :用 RSV (10 6pfu)感染后 ,培养基中加入 PTX (1m g/ml) ;每组于 RSV感染巨噬细胞 2 0 h后 ,用 EL ISA法测定培养细胞上清中 TNF-α含量的变化 ,同时用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)测定各组巨噬细胞 TNF-α m RNA表达水平。结果表明 :感染组中 TNF-α m RNA表达水平与对照组相比明显增多。 PTX组 TNF-α m RNA的表达和感染组相比明显降低。 TNF-α的含量也有相应的变化 :与对照组比较 ,感染组明显升高 (P<0 .0 1) ;而 PTX组与感染组比较明显下降 (P<0 .0 1)。认为 PTX能抑制 RSV所诱导的巨噬细胞 TNF-α的基因表达 ,并减少

关键词：己酮可可碱呼吸道合胞病毒 TNF-α 基因表达

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1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-(3,4-二甲氧基苯乙氨基)丙烷盐酸盐对培养的乳鼠心肌细胞[Ca^(2+)]_i的影响

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同济医科大学学报 2000年第3期29卷 199-201页

作者：郑恒谢辉钱家庆杨业金同济医科大学附属同济医院药学部武汉430030 同济医科大学实验医学研究中心分子生物学开放实验室武汉430030 同济医科大学基础医学院药理学教研室武汉430030

采用 Fura- 2 / AM显微荧光测钙技术 ,检测培养新生大鼠单个心肌细胞内游离钙的浓度 ,并观察 1- (2 ,6 -二甲基苯氧基 ) - 2 - (3,4-二甲氧基苯乙氨基 )丙烷盐酸盐 (DDPH)对不同刺激〔去氧肾上腺素 ,高 K+ ,血管紧张素 (Ang II)〕所致... 详细信息

采用 Fura- 2 / AM显微荧光测钙技术 ,检测培养新生大鼠单个心肌细胞内游离钙的浓度 ,并观察 1- (2 ,6 -二甲基苯氧基 ) - 2 - (3,4-二甲氧基苯乙氨基 )丙烷盐酸盐 (DDPH)对不同刺激〔去氧肾上腺素 ,高 K+ ,血管紧张素 (Ang II)〕所致心肌细胞钙超载的影响。结果表明 :1在含钙、无钙标准台氏液 ,DDPH 10 - 4 m ol· L- 1 对去氧肾上腺素(Phe) 10 - 4 mol· L- 1 所致钙增高有显著抑制作用。 2 DDPH 10 - 4 m ol· L- 1 对高 K+ 5 0 m mol· L- 1 引起的 [Ca2 + ]i增高有一定抑制作用 ,对 Ang 10 - 4 mol· L- 1 引起的 [Ca2 + ]i增高有部分拮抗作用。提示 :DDPH可拮抗 α1 受体调控的 Ca2 +通道 ,对钙库钙释放也有抑制作用。

关键词：丙烷盐酸盐心肌细胞细胞培养

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