目的探讨泛素样含PHD和环指域蛋白2(ubiquitin-like with PHD and RING finger domains 2,UHRF2)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)增殖和转移中的作用及其机制。方法检索TCGA数据库中HCC的基因表达谱数据和患者的临床数据,分析...
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目的探讨泛素样含PHD和环指域蛋白2(ubiquitin-like with PHD and RING finger domains 2,UHRF2)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)增殖和转移中的作用及其机制。方法检索TCGA数据库中HCC的基因表达谱数据和患者的临床数据,分析UHRF2的表达差异与HCC患者的预后情况,采用Cox比例风险模型探索UHRF2对HCC患者预后的独立作用;收集2018年7月至2019年12月在重庆医科大学附属第一医院确诊的20例肝癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组化检测UHRF2蛋白的表达,分析蛋白的表达与患者临床病理参数的关系;构建UHRF2表达质粒,通过RT-qPCR和Western blot检测转染效率,在HCC细胞系中过表达UHRF2进行划痕及平板克隆实验检测肝细胞癌细胞的迁移和增殖情况;基因富集分析探讨UHRF2与PI3K/Akt通路活化的关系,Western blot检测Akt、PI3K、p-Akt、p-PI3K的表达。结果 TCGA数据库分析显示UHRF2 mRNA在HCC组织中表达明显升高并提示预后不良;Cox多因素回归分析发现UHRF2的表达是影响患者预后的独立危险因素。免疫组化检测结果显示UHRF2蛋白在HCC中的表达明显高于癌旁组织。UHRF2的高表达与肿瘤大小(P=0.002)、肿瘤转移(P=0.002)密切相关。在迁移实验和平板克隆实验中,UHRF2过表达组的划痕愈合能力及增殖能力较对照组显著增强(P<0.01);PI3K/Akt通路在UHRF2高表达HCC患者中显著富集;Western blot检测结果显示,UHRF2过表达组的p-Akt、p-PI3K的表达水平明显上调(P<0.05)。结论 UHRF2的表达水平与HCC的预后密切相关,是影响患者预后的独立危险因素;过表达UHRF2通过PI3K/Akt信号通路促进HCC细胞的增殖和转移。
目的:探讨颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)缺陷型小鼠与野生(wild type,WT)型小鼠在咪喹莫特(Imiquimod,IMQ)诱导皮肤炎症模型中炎症及自噬的差异性。方法:运用IMQ涂抹WT(44只)和PGRN-/-(16只)小鼠背部皮肤构建银屑样皮肤炎症模型,并通过蛋白质印迹(Western blot)、定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色等方法检测小鼠组织结构、炎性因子[白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、一氧化氮合酶2(nitric oxide synthase 2,NOS2)、环氧化酶2(cyclo-oxygen-ase 2,COX2)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)]、凋亡相关蛋白[半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase 3)]以及自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、泛素结合蛋白(ubiquitin binding protein,P62)、自噬相关蛋白5(autophagy related protein 5,ATG5)、自噬相关蛋白7(autophagy related protein 7,ATG7)、自噬相关蛋白5和12的复合物(complex of autophagy related protein 5 and 12,ATG5-ATG12)]的变化。结果:成功建立了小鼠皮肤炎症模型,在WT小鼠模型中观察到上皮组织明显增厚,炎性细胞浸润增多,血管生成增加,炎性因子IL-6、IL-10、TNF-α、NOS2、COX2在第6天表达最高(P<0.05),自噬随着时间的增加而增加;此外,第6天脾脏比重明显增加(P<0.05),炎性因子IL-6、IL-10、TNF-α、NOS2、COX2、IL-1β表达最高(P<0.05)。与WT模型小鼠相比,PGRN-/-模型小鼠背部皮肤加厚更加明显,炎性因子IL-6、NOS2表达更高(P<0.05),组织自噬与凋亡水平明显降低(P<0.05)。结论:WT小鼠和PGRN-/-小鼠都能够在第6天成功建立小鼠皮肤炎症模型;与WT小鼠皮肤炎症模型相比,PGRN-/-小鼠加重了皮肤炎症模型症状,这一过程可能与PGRN缺陷阻碍了自噬的产生有关。
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