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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议

作者：刘怀然张雯郝权刘恒贵张宏民中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室香港大学李嘉诚医学院生理系

B7家族是免疫系统中一类免疫调控分子,它们在各种免疫应答中发挥重要的免疫调节功能.B7-H3是最近发现的B7家族新成员,研究表明它在T细胞免疫应答中发挥着重要的调节功能.猪源B7-H3分子在猪体内有两种同型异构体,分别是2Ig和4Ig-B7-H3.... 详细信息

B7家族是免疫系统中一类免疫调控分子,它们在各种免疫应答中发挥重要的免疫调节功能.B7-H3是最近发现的B7家族新成员,研究表明它在T细胞免疫应答中发挥着重要的调节功能.猪源B7-H3分子在猪体内有两种同型异构体,分别是2Ig和4Ig-B7-H3.尽管猪B7-H3分子的免疫学功能已有报道,但是该分子发挥免疫学功能的结构基础还没有解析.本研究利用昆虫细胞-杆状病毒的Bac-to-Bac表达系统,将猪2Ig-B7-H3的第26～238位氨基酸和4Ig-B7-H3的第26～456位氨基酸的编码基因连接于分泌性表达载体pFastBac,在Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒后,在HF昆虫细胞中大量分泌表达猪B7-H3胞外区.表达蛋白经过Ni-NTA亲和层析和离子交换层析纯化后进行晶体和X-射线衍射分析.研究结果表明昆虫细胞表达的2Ig和4Ig-B7-H3胞外区大小分别约为35kD和55kD,可被B7-H3的单克隆抗体及抗His单抗特异性识别.对2Ig-B7-H3胞外区蛋白尝试近1000个晶体筛选条件后,成功得到了该蛋白的单晶,并在上海光源收到了分辨率为3.1埃的衍射数据.这些研究结果为解析猪B7-H3的结构基础提供了可能,为我们今后从结构方面解释B7-H3的免疫学功能奠定了基础.

关键词： B7-H3 CD276 猪晶体解析

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猪圆环病毒2型Rep′蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位分析

猪圆环病毒2型Rep′蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位分析

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2013国际猪繁殖与呼吸综合征学术研讨会

作者：刘丹刘建波吴洪丽王一平危艳武唐青海李胜斌魏萍刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

背景猪圆环病毒2型(PCV2)基因组由单股负链闭合环状DNA构成,包含2个大的反义开放阅读框架(ORF1和ORF2),其中ORF1编码Rep蛋白,参与病毒的复制,是病毒的非结构蛋白;ORF2编码的Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白.PCV2-Rep蛋白编码基因全长945 ...

背景猪圆环病毒2型(PCV2)基因组由单股负链闭合环状DNA构成,包含2个大的反义开放阅读框架(ORF1和ORF2),其中ORF1编码Rep蛋白,参与病毒的复制,是病毒的非结构蛋白;ORF2编码的Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白.PCV2-Rep蛋白编码基因全长945 nt,含有314个氨基酸(aa),分子量为36ku,预测有3个潜在糖基化位点.在病毒复制过程中PCV2-ORF1转录本mRNA第417～799 nt处含有剪接位点,经剪接后产生一个截断的Rep′蛋白,其共编码178个aa,预测分子量为20.4 ku.由于剪接过程中Rep′蛋白C-末端阅读框发生移位,导致了Rep′与Rep蛋白第140位后C末端氨基酸序列完全不同.目前对Rep蛋白抗原表位分析报道较少.

关键词：

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mIgY,一种新型的抗体及抗体药物研发平台

mIgY,一种新型的抗体及抗体药物研发平台

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：张小莺陈红秀江雪梅仇华吉西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

目的：通过构建猪IFN-γ的噬菌体展示禽源scFv抗体文库,制备高特异性的scFv抗体.方法：1、构建猪IFN-γ的禽源噬菌体展示抗体文库.免疫SPF鸡4次后,提取SPF鸡脾脏mRNA,反转录为cDNA后,以cDNA为模板扩增抗体重链可变区和轻链可变区基因,... 详细信息

目的：通过构建猪IFN-γ的噬菌体展示禽源scFv抗体文库,制备高特异性的scFv抗体.方法：1、构建猪IFN-γ的禽源噬菌体展示抗体文库.免疫SPF鸡4次后,提取SPF鸡脾脏mRNA,反转录为cDNA后,以cDNA为模板扩增抗体重链可变区和轻链可变区基因,并进一步经融合PCR扩增单链抗体(scFv)基因.scFv与pCATAB5E均通过SfiI/NotI酶切后,scFv克隆至pCATAB5E噬菌粒载体,构建噬菌体展示抗体文库,随机挑取的10个克隆;2、抗体基因的大量表达.将随机挑取的10个克隆的抗体基因克隆至原核表达载体pET30a,优化诱导表达条件,并用Ni+柱进行纯化.结果：在噬菌体展示抗体文库中随机挑取的10个克隆,反应性均很高;诱导表达结果显示20℃,0.4mM IPTG,10h为最佳表达条件;可溶性scFv抗体的终浓度为5mg/mL,经ELISA、Western blot和间接免疫荧光检测反应性良好,与鼠源单抗平行比较发现,鸡scFv反应性较鼠源单抗高.结论：本研究构建了猪IFN-γ的噬菌体展示鸡源scFv抗体文库,并制备高特异性的scFv抗体;同时与鼠源单抗进行比较,初步确认了禽源单抗的特殊优势;这些研究结果支持了构建禽源单克隆抗体研发平台的设想,不失为一种有效的抗体研发替代途径.

关键词：禽源单克隆IgY抗体药物开发猪干扰素-γ 噬菌体展示技术

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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在脱氨酶作用下变异的证据

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在脱氨酶作用下变异的证据

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2013国际猪繁殖与呼吸综合征学术研讨会

作者：冷超粮汤艳东董建国侯艳霞常丹蔡雪辉周建华张桂红田志军童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 华南农业大学兽医学院广东广州510642 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 华南农业大学兽医学院广东广州510642 华南农业大学兽医学院广东广州510642 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)俗称"蓝耳病",是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种重要传染病.该病在世界范围内广泛存在,给养猪业造成了巨大的经济损失.2006年,我国出现了能导致"非典型蓝耳病"和"高热病&...

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)俗称"蓝耳病",是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种重要传染病.该病在世界范围内广泛存在,给养猪业造成了巨大的经济损失.2006年,我国出现了能导致"非典型蓝耳病"和"高热病"的高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV),给该病的防控提出了更为严峻的挑战.PRRSV的进化机理,特别是PRRSV由低致病性变异为高致病性的原因,一直是研究的热点领域.在本研究中,我们分别将6对PRRSV弱毒疫苗株与其相应母源强毒株(CH-la/CH-1R、HuN4/HuN4-F112、JXAl/JXAl-R、VR-2332/respPRRS MLV和JA 142/Ingelvac ATP)的全基因组序列进行了比对.有趣的是,这6株PRRSV母源强毒株在Marc-145细胞连续传代过程中都有倾向性的高突变.

关键词：

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副猪嗜血杆菌单克隆抗体的制备及其B细胞抗原表位的初步鉴定

副猪嗜血杆菌单克隆抗体的制备及其B细胞抗原表位的初步鉴定

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中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会

作者：郑楠符芳柴政姜福成王香玲张雪云王卓李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319 哈尔滨师范大学黑龙江哈尔滨150080

为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌(***)单克隆抗体(MAb),本研究采用***5型强毒株(HPS-5)免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株。Western blot结果表明该MAb能够特异性识别所有***标准菌株;免疫... 详细信息

为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌(***)单克隆抗体(MAb),本研究采用***5型强毒株(HPS-5)免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株。Western blot结果表明该MAb能够特异性识别所有***标准菌株;免疫沉淀技术与蛋白质谱分析显示该MAb所识别蛋白为ATP结合盒转运蛋白(ABCT)家族的寡肽透过酶(OppA);利用MAb对噬菌体12肽库进行淘选,8个阳性噬菌体克隆展示有“KTPAE-R”保守序列,对应于*** SH29755株和SH0165株的469位～475位的氨基酸残基。对OppA氨基酸序列比对结果表明***与其它10种猪常见细菌病病原序列一致性为9.1％～74.5％,本研究结果为进一步研究***感染的病原学诊断建立了良好的基础。

关键词：副猪嗜血杆菌单克隆抗体抗原表位鉴别诊断

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高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究

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中国农业科学 2012年第18期45卷 3859-3872页

作者：范培虎危艳武郭龙军吴洪丽黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

【目的】为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。【方法】选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、H... 详细信息

【目的】为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。【方法】选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组、HP-PRRSV+PCV2同时共感染组、HP-PRRSV感染组、PCV2感染组、未接种对照组。感染后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重、采血。用流式细胞仪检测血液中的CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、γδT、NK细胞及粒细胞和单核细胞变化;免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测这两种病毒抗体变化;用ELISA法检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-2、GM-CSF细胞因子变化;用荧光定量PCR法检测血清和组织中病毒载量。对各组试验猪进行组织病理学观察。【结果】HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组临床症状最严重,死亡率达60%;组织和血清中病毒载量显著高于其它组,抗体滴度明显低于其它组;淋巴细胞亚群及细胞因子(尤以TNF-α)变化也最为明显。【结论】HP-PRRSV和PCV2之间存在协同致病作用,且猪群先感染HP-PRRSV后感染PCV2可明显提高猪群发病率和死亡率。本研究对临床HP-PRRSV和PCV2的综合防制提供科学依据。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型共感染协同致病性

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猪圆环病毒2型疫苗的研究进展

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畜牧兽医学报 2012年第9期43卷 1337-1345页

作者：王一平郭龙军唐青海刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大经济损失。PCV2感染可以破坏动物机体的免疫系统,造成严重的免疫抑制,容易诱发多种细菌及病毒的混合感染与继发感染,给疾病的诊断和治疗带... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大经济损失。PCV2感染可以破坏动物机体的免疫系统,造成严重的免疫抑制,容易诱发多种细菌及病毒的混合感染与继发感染,给疾病的诊断和治疗带来巨大的困难。疫苗免疫接种是防控PCV2感染的有效手段,有关PCV2疫苗的研究已成为国内外学者的关注热点。迄今为止,欧美几家跨国公司已先后推出商品化的PCV2灭活疫苗、亚单位疫苗及嵌合病毒疫苗,国内也已研制出PCV2灭活疫苗,这些疫苗的推广应用为有效防控猪圆环病毒病发挥了重要作用。鉴于这些疫苗尚不能完全阻断PCV2传播,无法彻底清除体内感染的病毒,因此,开发高效、价廉的新型活载体疫苗、核酸疫苗及标记疫苗是今后研究的趋势。笔者在本文中概括地介绍了目前商品化的PCV2疫苗的特性和免疫效力,并对近年来有关PCV2活载体疫苗、核酸疫苗及标记疫苗等新型疫苗的研究进展进行综述,以期为猪圆环病毒病的防制提供参考。

关键词：猪圆环病毒2型疫苗研究

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一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗株HuN4-F112N蛋白单克隆抗体不识别其强毒株HuN4-F5与其氨基酸序列无关

一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗株HuN4-F112N蛋白单克隆抗体...

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2013国际猪繁殖与呼吸综合征学术研讨会

作者：王倩安同庆彭金美陈家锃冷超粮孙艳田志军杨汉春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验/室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人畜共患病重点实验室北京100193 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验/室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人畜共患病重点实验室北京100193

2006年,以Nsp2编码区30-aa缺失为特征的高致病性PRRSV (HP-PRRSV)的出现和流行给我国养猪业造成巨大的经济损失.本实验室通过将HP-PRRSV HuN4株在Marc-145细胞上传了112代得到一个致弱毒株HuN4-F112.序列分析显示HuN4-F112与其强毒株HuN...

2006年,以Nsp2编码区30-aa缺失为特征的高致病性PRRSV (HP-PRRSV)的出现和流行给我国养猪业造成巨大的经济损失.本实验室通过将HP-PRRSV HuN4株在Marc-145细胞上传了112代得到一个致弱毒株HuN4-F112.序列分析显示HuN4-F112与其强毒株HuN4-F5之间存在数目不多、散在的氨基酸突变,然而它的生物学特性已经发生了很大的改变.如何找出它们之间的抗原性差异对于研究它致弱的分子机制具有重要意义.

关键词：

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表达O型口蹄疫病毒VP1中和表位的重组猪圆环病毒2型毒株的构建及其生物学特性

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中国兽医科学 2012年第5期42卷 448-453页

作者：张飞雁唐青海黄立平危艳武吴洪丽郭龙军付玉洁刘长明中国农业科学院、哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室、猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建以猪圆环病毒2型(PCV2)为载体,表达O型口蹄疫病毒(FMDV)中和表位的重组病毒,将FMDV-VP1蛋白中和抗原表位(第141～160位氨基酸)插入PCV2-ORF2编码的Cap蛋白C-末端,利用感染性克隆技术拯救出1株表达FMDV-VP1的中和抗原表位PCV2重组... 详细信息

为构建以猪圆环病毒2型(PCV2)为载体,表达O型口蹄疫病毒(FMDV)中和表位的重组病毒,将FMDV-VP1蛋白中和抗原表位(第141～160位氨基酸)插入PCV2-ORF2编码的Cap蛋白C-末端,利用感染性克隆技术拯救出1株表达FMDV-VP1的中和抗原表位PCV2重组毒株(命名为recPCV2-CL-VP1);采用免疫过氧化物酶单层试验、捕获ELISA和免疫电镜技术鉴定该重组病毒。结果表明,在重组病毒感染细胞中检出PCV2特异性抗原及VP1表位抗原;重组病毒的形态学特征与亲本病毒相似,可采用PCR和ELISA法相鉴别;拯救毒株的繁殖能力较亲本毒差,经细胞连续传10代,体外培养增殖性能稳定。证实成功构建了1株表达FMDV-VP1中和抗原表位的PCV2重组病毒,为进一步研制基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型口蹄疫病毒 VP1蛋白中和表位重组病毒

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猪捷申病毒8型rVP1-ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2012年第3期42卷 258-263页

作者：胡峰刘杉杉蔺文成王晓玲张超范王朝刘朝霞胡泉博崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为建立猪捷申病毒(PTV)抗体的间接ELISA检测方法,将PTV-8VP1基因克隆至原核表达载体pET-30a中,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta表达重组的VP1蛋白。SDS-PAGE及Western-blot分析结果表明,表达的重组蛋白分子质量约为36.2ku,且能被PTV-8阳性... 详细信息

为建立猪捷申病毒(PTV)抗体的间接ELISA检测方法,将PTV-8VP1基因克隆至原核表达载体pET-30a中,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta表达重组的VP1蛋白。SDS-PAGE及Western-blot分析结果表明,表达的重组蛋白分子质量约为36.2ku,且能被PTV-8阳性血清特异性识别。以纯化的重组蛋白包被ELISA反应板,建立了检测PTV抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果表明,重组VP1蛋白与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型和猪瘟病毒阳性血清不发生反应。敏感性试验结果表明血清稀释至1∶800时仍检测为阳性。该方法的批内、批间变异系数均小于10%,表明具有较好的重复性。利用建立的方法对633份临床样品进行检测,阳性率是88.10%。选取58份临床样品与间接免疫荧光方法作比对试验,两者的符合率是94.80%。

关键词：猪捷申病毒重组VP1蛋白原核表达间接ELISA

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