目的建立针对PELP1基因启动子区CpG岛的甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)检测方法,分析乳腺癌细胞中PELP1基因表达与启动区CpG岛甲基化的相关性。方法设计针对PELP1基因启动子区的MSP引物组,以甲基化和非甲基化DNA为模板...
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目的建立针对PELP1基因启动子区CpG岛的甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)检测方法,分析乳腺癌细胞中PELP1基因表达与启动区CpG岛甲基化的相关性。方法设计针对PELP1基因启动子区的MSP引物组,以甲基化和非甲基化DNA为模板验证MSP引物的特异性,建立针对PELP1基因启动子区的MSP检测方法。以DNA甲基转移酶抑制剂5'-氮杂-脱氧胞苷磷酸(5'-Aza-d C)分别处理MCF-7乳腺癌细胞、MCF-10正常乳腺导管上皮细胞,采用MSP检测PELP1基因启动子区甲基化状态变化,采用Western blot检测蛋白表达。结果针对PELP1基因启动子区设计的MSP引物组特异性良好,甲基化特异性引物仅在甲基化DNA模板获得阳性扩增条带,非甲基化引物仅在非甲基化DNA模板获得阳性条带。MCF-7乳腺癌细胞中PELP1基因启动子区呈非甲基化状态,MCF-10正常乳腺导管上皮细胞中PELP1基因启动子区呈甲基化状态,MCF-10细胞中PELP1蛋白表达水平为MCF-7细胞的1/16(P<0.05)。采用5'-Aza-dC去除MCF-10细胞PELP1基因启动子区甲基化后,PELP1蛋白表达水平上升了9.7倍(P<0.05)。结论所建立的PELP1基因启动子区MSP检测方法特异性良好,去甲基化可能是导致乳腺癌细胞中PELP1基因过表达的重要机制。
目的:本研究旨在建立大鼠产后母子分离模型,观察母子分离对母鼠的母性行为的改变,并使用经鼻给予催产素方法,来确定催产素对母性行为的改善作用.方法:成年雌性受孕SD大鼠,在产后次日,将大鼠随机分为五组:对照组(正常喂养组)、间断分离组(母鼠与仔鼠每日相聚4小时)、间断分离+催产素组(母鼠与仔鼠每日相聚4小时,给予母鼠催产素10u mol/L,每日三次,每次20ul)、连续分离组(母鼠与仔鼠只在观察时间相聚)、连续分离+催产素组(母鼠与仔鼠只在观察时间相聚,给予母鼠催产素10 u mol/L,每日三次,每次20ul).在分离的第一日、第四日,以及重新授乳第一日进行母性行为的观察,包括:母鼠回收仔鼠潜伏期、舔仔潜伏期、舔仔次数、喂乳潜伏期、喂乳总时间,以及母鼠和仔鼠在观察时间内体重的改变.
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