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香菇C_(91-3)转录组Unigene 28447基因的蛋白表达及其对细胞凋亡和周期的影响

大连医科大学学报 2015年第3期37卷 214-219页

作者：曹淑云刘奔钟民涛伦永志张伟王晓丽李星云曹靖宁安红黄敏大连医科大学基础医学院微生物教研室辽宁大连116044 大连大学医学院病原生物学教研室辽宁大连116622

目的克隆香菇C91-3转录组中Unigene 28447基因,对其进行生物信息学分析,并研究该基因结构域的生物学活性。方法提取香菇C91-3菌丝体中的总RNA,用3'-Full RACE、5'-Full RACE方法获得香菇菌丝体Unigene 28447基因全长;构建基因... 详细信息

目的克隆香菇C91-3转录组中Unigene 28447基因,对其进行生物信息学分析,并研究该基因结构域的生物学活性。方法提取香菇C91-3菌丝体中的总RNA,用3'-Full RACE、5'-Full RACE方法获得香菇菌丝体Unigene 28447基因全长;构建基因表达载体,进行原核诱导表达,将表达蛋白进行纯化、复性。运用MTT法、流式细胞仪法研究蛋白对肿瘤细胞生长、周期及凋亡的影响。结果成功构建重组质粒p ET32a(+)-Unigene,诱导重组蛋白表达,并进行纯化、复性。MTT法显示不同浓度蛋白对肿瘤细胞的生长抑制作用与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05),流式细胞仪显示此蛋白具有诱导肿瘤细胞改变周期和凋亡的作用(P<0.05)。结论初步鉴定Unigene 28447基因的结构域具有抗肿瘤活性。

关键词：香菇C91-3 克隆重组蛋白

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绿舒筋对实体型肝癌小鼠脾自然杀伤细胞活性的调节作用

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同济医科大学学报 1998年第2期27卷 113-115页

作者：叶嗣颖黄庆华廖芳蔡昌学同济医科大学基础医学院微生物学教研室武汉430030

用＾１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法研究实体型癌鼠脾自然杀伤细胞活性，以探讨绿舒筋注射液对肿瘤机体细胞免疫功能的调节作用，通过该药对害体型肝癌鼠的治疗及其生存期的影响和其自然杀伤细胞（ＮＫ）活性的测定，动态观察，发现一定剂量的... 详细信息

用＾１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法研究实体型癌鼠脾自然杀伤细胞活性，以探讨绿舒筋注射液对肿瘤机体细胞免疫功能的调节作用，通过该药对害体型肝癌鼠的治疗及其生存期的影响和其自然杀伤细胞（ＮＫ）活性的测定，动态观察，发现一定剂量的绿舒筋注射液对实体型肝癌鼠脾自然杀伤细胞活性有显著增强作用，并明显延长该鼠生存期，此结果提示ＮＫ活性的促进可能为绿舒筋抗肿瘤作用的机理之一。

关键词：肝肿瘤 NK活性绿舒筋药物疗法抗癌药

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防御素在抗结核分枝杆菌感染中的作用机制研究进展

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中国病原生物学杂志 2023年第1期18卷 121-125页

作者：高雪涵朱杰华刘利萍蒙祖迪亓凯卫麟娜秦欢罗军敏遵义医科大学基础医学院免疫学教研室贵州遵义563000 遵义医科大学附属医院医学检验科遵义医科大学基础医学院微生物学教研室

防御素是广泛分布于生物界的一类富含半胱氨酸的内源性阳离子抗菌肽,在抵抗病原微生物入侵及调节机体免疫功能等方面发挥重要作用。研究发现,防御素对细菌、真菌或病毒等均具有杀灭作用,其在抗结核分枝杆菌感染中也展现出突出优势。防... 详细信息

防御素是广泛分布于生物界的一类富含半胱氨酸的内源性阳离子抗菌肽,在抵抗病原微生物入侵及调节机体免疫功能等方面发挥重要作用。研究发现,防御素对细菌、真菌或病毒等均具有杀灭作用,其在抗结核分枝杆菌感染中也展现出突出优势。防御素独特的抗菌机理可以破坏结核分枝杆菌的细胞壁、细胞膜等生物学结构,从而抑制结核分枝杆菌。本文对防御素的分子结构、生物学作用、抗结核作用及机制予以综述。

关键词：防御素抗菌肽结核分枝杆菌机制免疫应答综述

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两种感受态细胞制备方法的比较

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同济医科大学学报 1997年第5期26卷 359-361页

作者：张卫东陈秀珠同济医科大学基础医学院微生物学教研室武汉430030

从方法学上对氯化钙与甘油-聚乙二醇法制备JM105感受态细胞进行了比较。常规氯化钙法制备的细胞感受态仅维持3d（4℃条件下），而甘油-聚乙二醇法制备细胞其感受态可维持180d以上（-30℃条件下）。且两种方法制备的感受态细胞存放16h时... 详细信息

从方法学上对氯化钙与甘油-聚乙二醇法制备JM105感受态细胞进行了比较。常规氯化钙法制备的细胞感受态仅维持3d（4℃条件下），而甘油-聚乙二醇法制备细胞其感受态可维持180d以上（-30℃条件下）。且两种方法制备的感受态细胞存放16h时其转化率分别为（6．42±0．06）×108和（1．73±0．03）×1010。

关键词：感受态细胞质粒 DNA 细胞学技术

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葡萄球菌肠毒素B突变体的构建

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上海医科大学学报 2000年第4期27卷 238-239,244页

作者：俞红钱利生李雪萍上海医科大学基础医学院微生物学教研室上海200032

目的　应用重组和克隆技术在大肠杆菌中表达葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体。方法　利用PCR和PCR致变技术从产SEB的标准株扩增SEB基因 ,与原核表达载体 pTrc99A重组后引入大肠杆菌JM1 0 9。通过序列测定鉴定突变基因 ;用聚丙烯酰胺凝胶电泳... 详细信息

目的　应用重组和克隆技术在大肠杆菌中表达葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体。方法　利用PCR和PCR致变技术从产SEB的标准株扩增SEB基因 ,与原核表达载体 pTrc99A重组后引入大肠杆菌JM1 0 9。通过序列测定鉴定突变基因 ;用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和单向免疫扩散试验分别检测表达产物和表达量。结果　获得了 3株重组菌NJM1 0 9、M2 3JM1 0 9、M1 5 0JM 1 0 9。测序表明 ,SEB N序列与已报道的天然seb完全一致 ;SEB M 2 3第 2 3位天冬酰胺密码子AAT发生定向突变 ,即由丝氨酸密码子AGT替代 (N2 3S) ;SEB M1 5 0第1 5 0位氨基酸发生非定向突变 ,由苏氨酸密码子ACT突变为丙氨酸密码子GCT(T1 5 0A)。表达SEB M1 5 0和SEB M2 3的重组细菌裂解液经SDS PAGE ,在 2 80 0 0处可见有表达条带 ,非重组菌则无。单向免疫扩散试验和蛋白浓度测定表明 ,重组菌表达目的蛋白量为 5 μg/ml培养液 ,表达量占菌体总蛋白量的 3.5 %。结论　获得了2株能表达SEB突变体的工程菌。

关键词：葡萄球菌肠毒素B 突变体克隆细菌超抗原

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乳链菌肽nisinZ的pH吸附法分离纯化技术研究

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同济医科大学学报 2000年第2期29卷 124-126页

作者：叶嗣颖谢昕黄庆华彭颖许迪胡国平田拥军同济医科大学基础医学院微生物学教研室武汉43003

通过 p H吸附法 ,利用乳酸链球菌亚种 N8(L actococcus lactis subsp. lactis N8)和乳酸链球菌亚种ATCC1145 4,研究了 nisin Z分子在不同 p H环境下的吸附作用及其分离纯化效率 ,并经麦黄酮 SDS- PAGE和 RP- HPL C纯度鉴定 ,证实用此技... 详细信息

通过 p H吸附法 ,利用乳酸链球菌亚种 N8(L actococcus lactis subsp. lactis N8)和乳酸链球菌亚种ATCC1145 4,研究了 nisin Z分子在不同 p H环境下的吸附作用及其分离纯化效率 ,并经麦黄酮 SDS- PAGE和 RP- HPL C纯度鉴定 ,证实用此技术分离 nisin Z具有高效高纯度、操作简便等良好特征。nisin在 p H6 .5吸附率达 10 0 % ,p H3以下完全释放。该技术可望开辟对 nisin等微生物分泌性蛋白的分离纯化新途径。

关键词：乳酸链球菌分离纯化 PH吸附法 nisinZ

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大鼠组织因子基因克隆及其在C6细胞系中的表达

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实用医学杂志 2012年第9期28卷 1422-1425页

作者：王金冬何俊明方文娟李玉军王宝英周淑如张凤民新乡医学院三全学院 453003 哈尔滨医科大学病原微生物教研室 150086

目的:克隆大鼠组织因子(tissue factor,TF)基因,构建真核表达载体pEGFP-N1-TF,转染C6大鼠神经胶质瘤细胞并检测转染细胞内TF表达水平。方法:采用RT-PCR法从Wistar大鼠肺组织中扩增TF基因,克隆到真核表达载体pEGFP-N1上。通过测序鉴定重... 详细信息

目的:克隆大鼠组织因子(tissue factor,TF)基因,构建真核表达载体pEGFP-N1-TF,转染C6大鼠神经胶质瘤细胞并检测转染细胞内TF表达水平。方法:采用RT-PCR法从Wistar大鼠肺组织中扩增TF基因,克隆到真核表达载体pEGFP-N1上。通过测序鉴定重组质粒中插入TF的完整性和可靠性。应用脂质体法将鉴定正确的重组质粒转入C6细胞中,荧光显微镜下观察EGFP报告基因的表达强度和转染效率,并对转染细胞的TF-eGFP融合蛋白进行Western blot检测。结果:成功构建pEGFP-N1-TF真核表达载体,转染C6细胞24h后,在荧光显微镜下可以观测到荧光,并通过Western blot技术检测到TF-eGFP融合蛋白的表达。结论:重组真核表达载体pEGFP-N1-TF构建成功,转染C6细胞后获得了良好的瞬时表达。

关键词：凝血致活酶基因克隆 pEGFP-N1 C6细胞

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腺病毒41型致缺乏腺病毒E_1区的A_(549)细胞产生病变的实验研究

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同济医科大学学报 1997年第1期26卷 26-28,36页

作者：张卫东陈秀珠张坚沈英张焰辉同济医科大学基础医学院微生物学教研室武汉430030

首次报道了腺病毒41型TaK株致缺乏腺病毒E1基因功能的A(549)细胞产生细胞病变。该病变与病毒感染的稀释度存在量一效关系。核酸杂交示1:10与1:20稀释度组病毒核酸含量相近，但明显高于1:50组。免疫荧光技术分析显示各稀释度组病毒蛋白... 详细信息

首次报道了腺病毒41型TaK株致缺乏腺病毒E1基因功能的A(549)细胞产生细胞病变。该病变与病毒感染的稀释度存在量一效关系。核酸杂交示1:10与1:20稀释度组病毒核酸含量相近，但明显高于1:50组。免疫荧光技术分析显示各稀释度组病毒蛋白表达起始时相均在病毒感染后的2～3d。

关键词：肠道腺病毒41型腺病毒.人 A_549细胞腹泻.婴儿

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穿孔素介导的细胞凋亡机制在抗流感病毒感染免疫防御中作用的研究

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中国免疫学杂志 2006年第5期22卷 480-483,486页

作者：刘北星吕昌龙木村吉延中国医科大学基础医学院免疫学教研室沈阳110001 福井大学医学部微生物学教研室

目的:穿孔素介导的细胞凋亡机制在流感病毒初次感染中作用的研究。方法:用流感病毒A/PR/8/34经鼻感染穿孔素基因敲除鼠和同源对照C57BL/6小鼠,采用PFU方法测定肺内流感病毒增殖状况;免疫组织化学染色方法观察小鼠病毒感染后感染细胞的... 详细信息

目的:穿孔素介导的细胞凋亡机制在流感病毒初次感染中作用的研究。方法:用流感病毒A/PR/8/34经鼻感染穿孔素基因敲除鼠和同源对照C57BL/6小鼠,采用PFU方法测定肺内流感病毒增殖状况;免疫组织化学染色方法观察小鼠病毒感染后感染细胞的凋亡情况;利用乳酸脱氢酶释放法检测感染鼠脾淋巴细胞NK活性及CTL杀伤活性。结果:穿孔素基因缺乏导致流感病毒在小鼠肺内大量增殖;小鼠清除感染病毒所需时间延长;病毒感染细胞发生凋亡的时间亦因穿孔素的缺乏而延迟;感染小鼠脾淋巴细胞NK活性及CTL杀伤活性均显著降低。结论:穿孔素依赖的细胞介导的细胞毒效应在控制流感病毒初次感染,快速清除感染病毒方面起重要作用。

关键词：穿孔素流感病毒细胞毒活性细胞凋亡

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不明原因早期自然流产患者蜕膜巨噬细胞及白细胞介素1活性的研究

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中华妇产科杂志 1999年第11期34卷 688-689页

作者：崔澂王慧贤杨彦忠王惠兰郝淑维解放军白求恩医学高等专科学校微生物及寄生虫学教研室石家庄050081 河北医科大学基础医学院微生物及免疫学教研室河北医科大学基础医学院第二医院河北医科大学基础医学院第四医院

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