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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议

作者：杨复娇刘晔芦凤亮宗卫娇梁媛高翔金艾顺 150081 哈尔滨医科大学基础医学院免疫教研室

目的探讨本研究组制备的全人源抗人TRAIL-R1单克隆抗体TRAILR1-422 (TR1-422)诱导肿瘤细胞凋亡的作用.方法利用竞争ELISA法鉴定TR1-422与TRAIL-R1结合特异性;流式细胞分析检测与Jurkat细胞表面TRAIL-R1的结合能力;细胞计数法计算TR1-... 详细信息

目的探讨本研究组制备的全人源抗人TRAIL-R1单克隆抗体TRAILR1-422 (TR1-422)诱导肿瘤细胞凋亡的作用.方法利用竞争ELISA法鉴定TR1-422与TRAIL-R1结合特异性;流式细胞分析检测与Jurkat细胞表面TRAIL-R1的结合能力;细胞计数法计算TR1-422在不同时间点对Jurkat细胞生存和细胞增殖的影响;镜下观察TR1-422对肿瘤细胞的作用;Annexin V/PI双染色评价TR 1-422诱导Jurkat细胞凋亡的作用.结果 TR1-422与Jurkat细胞表面TRAIL-R1高度特异结合;与无相关IgG抗体组比较表达率变化72.3％. 1 μg/ml TR1-422与10μg/ml抗人IgG交联作用于Jurkat细胞在不同时间点(24h和48h)的生存率分别为72.57％,64.08％,对照组分别为96.14％,95.69％(t=2.534,P＜0.05;t=3.147,P＜0.05);镜下观察,1μg/ml TR 1-422与10μg/ml抗体交联作用72h后,Jurkat细胞出现大量死亡;1μg/ml TR1-422与10μg/ml抗体交联作用24h,Annexin V阳性率达30％,而1μg/ml TR1-422单独作用为12.8％(t=2.355,P＜0.05);各组未检测到PI阳性细胞.结论本研究证实我组制备的抗TRAIL-R1全人源单抗与抗体交联作用可促进肿瘤细胞凋亡,提高抗肿瘤治疗效果.

关键词： TRAIL TRAIL-R1 单抗细胞凋亡

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体外诱导外周血B淋巴细胞分化浆细胞方法的建立及评价

体外诱导外周血B淋巴细胞分化浆细胞方法的建立及评价

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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议

作者：梁嫒芦凤亮宗卫娇刘晔高翔金艾顺 150081 哈尔滨医科大学基础医学院免疫教研室

目的建立体外活化外周血单个核细胞(PBMCs)中B淋巴细胞扩增和分化浆细胞的方法,为高亲和力治疗性人源单克隆抗体的研发提供研究基础.方法从3名接种过流感疫苗健康志愿者(＞10个月)的末梢血中分离PBMCs,加入TLR9激动剂CpG DNA 2006和... 详细信息

目的建立体外活化外周血单个核细胞(PBMCs)中B淋巴细胞扩增和分化浆细胞的方法,为高亲和力治疗性人源单克隆抗体的研发提供研究基础.方法从3名接种过流感疫苗健康志愿者(＞10个月)的末梢血中分离PBMCs,加入TLR9激动剂CpG DNA 2006和细胞因子等培养;流式细胞分析、酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)、细胞计数法评价B淋巴细胞体外活化效果.结果与对照组相比,刺激组中CD19阳性细胞和CD138阳性细胞的比率明显增高(t=2.625,P＜0.05;t=3.571,P＜0.05),培养上清中总IgG和抗原特异性IgG含量增加,且分泌IgG和抗原特异性IgG的浆细胞数量明显增加(t=2.942,P＜0.05;t=3.196,P＜0.05),刺激组比未刺激组细胞生存率提高(t=2.182,P＜0.05).通过体外活化方法,只需约10 ml外周血即可检测到足量的抗原特异性抗体分泌细胞.结论本试验所建立的体外活化方法能够有效地诱导外周血B淋巴细胞扩增和分化浆细胞.

关键词： B淋巴细胞浆细胞体外活化外周血单个核细胞

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法医临床鉴定中护理依赖问题的探讨

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中国法医学杂志 2013年第S1期28卷 82-83页

作者：邢扬邓世雄重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016

在交通事故人身损害的案件中,常常遇到护理依赖赔偿的问题。本文通过问卷调查,对法医临床鉴定中护理依赖鉴定存在的问题进行探讨。1资料与方法 1.1资料2012年8月至2013年5月重庆法医验伤所法医临床鉴定的500名伤者数据资料,且满足只做... 详细信息

在交通事故人身损害的案件中,常常遇到护理依赖赔偿的问题。本文通过问卷调查,对法医临床鉴定中护理依赖鉴定存在的问题进行探讨。1资料与方法 1.1资料2012年8月至2013年5月重庆法医验伤所法医临床鉴定的500名伤者数据资料,且满足只做过伤残等级鉴定而没有做护理依赖程度、期限鉴定。1.2方法用调查问卷的方式统计被鉴定人的资料,问卷内容包括:①根据《人身损害护理依赖程度评定》(GA/

关键词：法医临床学护理依赖法律依据

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小鼠胚胎第一次细胞命运决定的分子调控机制

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生命科学 2013年第7期25卷 730-734页

作者：吴稀白光宇孙瑞珍李彤雷蕾哈尔滨医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室

着床前小鼠的发育过程中,随着囊胚的形成,胚胎建立了两个不同的细胞系:滋养外胚层(TE)和内细胞团(ICM),且发生两次重要的命运选择。主要回顾了两个经典发育模式,即内外模式(inside-outsidemodel)和极性模式(polarity model),总结了TE和... 详细信息

着床前小鼠的发育过程中,随着囊胚的形成,胚胎建立了两个不同的细胞系:滋养外胚层(TE)和内细胞团(ICM),且发生两次重要的命运选择。主要回顾了两个经典发育模式,即内外模式(inside-outsidemodel)和极性模式(polarity model),总结了TE和ICM第一次谱系分离过程中起关键作用的分子调控机制,并探讨了存在于卵裂球间的分子差异,对细胞极性、细胞命运和分子调节之间存在的复杂联系也进行了讨论。

关键词：滋养外胚层内细胞团 Cdx2 Oct4 Hippo

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多巴胺受体(DR2)激活对乳鼠心肌细胞缺氧/再灌注损伤的保护作用及其机制

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中国应用生理学杂志 2013年第4期29卷 289-293页

作者：魏璨高君陈爱东白淑芝李宏霞柳磊邵洪江彭雪李梅秀徐长庆李鸿珠哈尔滨医科大学基础医学院病理生理学教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨市第一医院骨一科黑龙江哈尔滨150010 牡丹江医学院红旗医院黑龙江牡丹江157011

目的:观察多巴胺受体(DR2)激活对乳鼠心肌细胞缺氧/再灌注损伤的影响,并探讨其机制。方法:复制原代培养乳鼠心肌细胞缺氧/再灌注损伤模型,细胞随机分为正常组(Control)、缺氧/再灌注组(H/R)、DR2激动剂组(溴麦角环肽,Bro)、抑制剂组(氟... 详细信息

目的:观察多巴胺受体(DR2)激活对乳鼠心肌细胞缺氧/再灌注损伤的影响,并探讨其机制。方法:复制原代培养乳鼠心肌细胞缺氧/再灌注损伤模型,细胞随机分为正常组(Control)、缺氧/再灌注组(H/R)、DR2激动剂组(溴麦角环肽,Bro)、抑制剂组(氟哌啶醇,Hal)。倒置显微镜、透射电镜、流式细胞仪检测细胞凋亡情况;检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;RT-PCR和Western blot方法检测心肌细胞促凋亡因子(Cyt C、caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas及Fas-L)及抑凋亡因子(Bc-l 2)mRNA和蛋白表达。结果:与正常组相比,H/R组细胞凋亡率、LDH活性、MDA含量、促凋亡因子及抑凋亡因子表达均增加,唯有SOD活性降低;与H/R组比较,Bro组可减轻或逆转上述指标的变化;Hal组上述指标变化不明显。结论:DR2激活可抑制缺氧/再灌注所致的乳鼠心肌细胞损伤和凋亡,机制与减少氧自由基有关。

关键词：多巴胺受体(DR2) 乳鼠心肌细胞凋亡缺氧再灌注

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阿托伐他汀预处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用机制研究

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中国急救医学 2013年第9期33卷 844-846页

作者：高凤敏安锦丹李雪峰徐晶郭继芳姜锋王坤牡丹江医学院附属红旗医院心内科黑龙江牡丹江157011 牡丹江医学院基础医学院病理教研室黑龙江牡丹江157011 哈尔滨医科大学附属第三医院黑龙江哈尔滨158001

目的阿托伐他汀具有多重心肌保护作用,但其机制尚不明确,本文应用大鼠心肌缺血-再灌注损伤（MIRI）模型研究短期阿托伐他汀预处理的心肌保护作用,并对其与血浆内皮素（ET）、血栓素A2（TXA2）、前列环素（PGI2）的关系进行初步探讨.方... 详细信息

目的阿托伐他汀具有多重心肌保护作用,但其机制尚不明确,本文应用大鼠心肌缺血-再灌注损伤（MIRI）模型研究短期阿托伐他汀预处理的心肌保护作用,并对其与血浆内皮素（ET）、血栓素A2（TXA2）、前列环素（PGI2）的关系进行初步探讨.方法将80只雄性SD大鼠随机等分为4组：假手术组（A组,生理盐水5 mL/d）、MIRI组（B组,生理盐水5 mL/d）、阿托伐他汀标准剂量预处理组[C组,阿托伐他汀20 mg/（kg·d）]和阿托伐他汀强化剂量预处理组[D组,阿托伐他汀40 mg/（kg·d）].灌胃3 d后,第4天制作大鼠在体MIRI模型,结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min后,用放射免疫分析法测定血浆ET、TXA2、PGI2含量.结果与A组比较,B组血浆ET和TXA2水平升高、PGI2水平及PGI2/TXA2比值降低（P〈0.05）;与B组比较,C组ET和TXA2水平降低、PGI2水平及PGI2/TXA2比值升高（P〈0.05）;与C组比较,D组ET和TXA2水平降低、PGI2水平及PGI2/TXA2比值升高更为明显（P〉0.05）.结论在大鼠MIRI中,阿托伐他汀预处理可促进PGI2生成,扩张血管,削弱内皮因子的收缩作用,降低ET含量,调节PGI2/TXA2平衡,改善微循环,从而发挥心肌保护作用.

关键词：心肌缺血-再灌注损伤（MIRI）阿托伐他汀内皮素血栓素A2 前列环素

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VEGF-D的表达与结肠癌淋巴管生成及淋巴结转移的相关性

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解剖科学进展 2013年第4期19卷 307-310页

作者：李晓冬王劲健李晓峰常英哈尔滨医科大学基础医学院人体解剖学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨血管内皮生长因子-D(Vascular endothelial growth factorD,VEGF-D)在结肠癌组织中的表达规律,及其与结肠癌淋巴管密度(LVD)、淋巴结转移之间的关系。方法采用免疫组化法对43例人结肠癌组织和14例结肠良性病变组织的VEGF-D表达... 详细信息

目的探讨血管内皮生长因子-D(Vascular endothelial growth factorD,VEGF-D)在结肠癌组织中的表达规律,及其与结肠癌淋巴管密度(LVD)、淋巴结转移之间的关系。方法采用免疫组化法对43例人结肠癌组织和14例结肠良性病变组织的VEGF-D表达进行分析,以LYVE-1标记淋巴管,测算淋巴管密度,统计分析结肠癌中的VEGF-D表达与结肠癌临床病理特征的关系。采用Western-blot法检测16例人结肠癌组织中淋巴结转移组和无淋巴结转移组的VEGF-D蛋白表达。结果免疫组化结果显示结肠癌组织中VEGF-D的阳性率明显高于结肠良性病变组织,并且与结肠癌组织的LVD成正相关。Western-blot结果显示结肠癌中淋巴结转移组的VEGF-D的表达量较无淋巴结转移组明显增加,VEGF-D表达与患者的肿瘤浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期显著相关,而与年龄和肿瘤大小无关。结论结肠癌组织中VEGF-D的高表达可能与结肠癌的淋巴管的新生及淋巴结转移有关。

关键词：血管内皮生长因子-D 淋巴管新生淋巴道转移人结肠癌

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间充质祖细胞源性的神经元样细胞肌内移植后自身特性的维持

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第三军医大学学报 2013年第8期35卷 744-749页

作者：赵文勇万立华粟永萍冉新泽重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016 第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的探讨间充质祖细胞(mesenchymal progenitor cells,MPCs)源性的神经元样细胞肌内移植后能否维持其自身特性。方法取3周龄健康GFP转基因C57小鼠后肢长骨进行MPC培养及鉴定,选取生长良好的第3代MPC,采用神经元原代培养上清液进行神经... 详细信息

目的探讨间充质祖细胞(mesenchymal progenitor cells,MPCs)源性的神经元样细胞肌内移植后能否维持其自身特性。方法取3周龄健康GFP转基因C57小鼠后肢长骨进行MPC培养及鉴定,选取生长良好的第3代MPC,采用神经元原代培养上清液进行神经元样细胞诱导分化后收集细胞,并制备成5×105/μL细胞悬液备用。选取12周龄健康C57小鼠24只,按随机数字表法分为损伤+移植细胞组、损伤+生理盐水组、假手术+移植细胞组、假手术+生理盐水组。损伤+移植细胞组及假手术+移植细胞组:将制备的5μL MPC悬液散点注入小鼠三头肌内;损伤+生理盐水组和假手术+生理盐水组:同法注入等量生理盐水。术后4周取材,荧光显微镜下观察肌内移植细胞存活情况,电镜观察肌肉超微结构的变化,免疫荧光染色检测神经元特异性标志物NSE、NeuN及神经胶质特异性标志物GFAP的表达情况。结果肌内移植细胞生长良好且均匀分布于肌细胞间隙,并抑制了肌细胞核、线粒体、内质网的退变及肌肉纤维化的发生。损伤+移植细胞组定植存活的移植细胞阳性表达:NSE(58.35±1.37)%、NeuN(60.22±0.16)%及GFAP(13.32±1.65)%,损伤+生理盐水组、假手术+移植细胞组、假手术+生理盐水组均无阳性细胞表达。结论 MPC具有良好的生物学活性,经体外诱导分化为神经元及神经胶质样细胞后移植于失神经支配肌内可定植存活,并能够维持神经元及神经胶质样细胞的特性,同时有效抑制了肌细胞核、线粒体、内质网的退变及肌肉纤维化的发生。

关键词：周围神经间充质祖细胞神经元样细胞神经胶质样细胞

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案例教学法结合Sandwich教学法在法医临床学实验教学中的运用

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南京医科大学学报（社会科学版） 2013年第1期13卷 89-92页

作者：张志威王建文李荣李开南京医科大学基础医学院法医学教研室江苏南京210029

法医临床学实验教学内容繁杂,采用传统教学方法往往不能达到较好的教学效果。笔者将案例教学法结合Sandwich教学法引入法医临床学实验教学实践中,充分调动了学生学习的主动性、积极性,同时培养了学生表达和沟通能力、分析问题和解决问... 详细信息

法医临床学实验教学内容繁杂,采用传统教学方法往往不能达到较好的教学效果。笔者将案例教学法结合Sandwich教学法引入法医临床学实验教学实践中,充分调动了学生学习的主动性、积极性,同时培养了学生表达和沟通能力、分析问题和解决问题的能力;该方法的运用进一步提高了法医临床学实验教学的教学质量,对学生综合能力的培养起到了积极作用。

关键词：案例 Sandwich教学法法医临床学

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小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株中Annexin A7蛋白的表达及意义

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临床与实验病理学杂志 2013年第10期29卷 1047-1050页

作者：张竹青卢书明赵志英唐建武大连市中心医院病理科大连116033 大连医科大学附属第一医院消化内科大连116011 大连医科大学基础医学院病理学与法医学教研室大连116044

目的观察Annexin A7(ANXA7)蛋白在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株(Hca-F、Hca-P)中的表达水平,分析其在两种细胞株中的表达及意义。方法采用免疫细胞化学、Western blot和流式细胞仪检测ANXA7在细胞株Hca-F和Hca-P中的表达。结果免... 详细信息

目的观察Annexin A7(ANXA7)蛋白在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株(Hca-F、Hca-P)中的表达水平,分析其在两种细胞株中的表达及意义。方法采用免疫细胞化学、Western blot和流式细胞仪检测ANXA7在细胞株Hca-F和Hca-P中的表达。结果免疫细胞化学结果显示,ANXA7表达于Hca-F细胞胞核和胞质,以胞核为主,在Hca-P中表达位于胞质;Western blot结果显示,ANXA7在Hca-F、Hca-P中的表达相对值分别为0.09±0.01和0.23±0.02,ANXA7在Hca-F细胞中的表达明显低于Hca-P,差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞仪结果显示,ANXA7在Hca-F细胞中的相对荧光强度值(57.71±9.85)显著高于Hca-P(17.61±1.00),差异有统计学意义(P<0.001)。结论 ANXA7在Hca-F、Hca-P中的差异性表达可能与肿瘤淋巴道转移能力相关。

关键词：肝肿瘤 Annexin A7 淋巴道转移

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