检索结果-内蒙古大学图书馆

中华肿瘤防治杂志 2012年第3期19卷 180-183,196页

作者：张海燕孟欣都镇先邓娓娓刘国良王华芹中国医科大学附属第一医院老年病科辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院生化与分子生物教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院内分泌科辽宁沈阳110001

目的:明确Nrf2对蛋白酶体抑制剂万珂诱导甲状腺癌细胞凋亡的影响及其作用途径。方法:选取Nrf2高表达的8305C细胞,用微小RNA干扰技术转染细胞,采用实时定量PCR法和蛋白质印迹法分析封闭效果,而细胞内GCLCmRNA的表达、还原型谷胱甘肽(GSH... 详细信息

目的:明确Nrf2对蛋白酶体抑制剂万珂诱导甲状腺癌细胞凋亡的影响及其作用途径。方法:选取Nrf2高表达的8305C细胞,用微小RNA干扰技术转染细胞,采用实时定量PCR法和蛋白质印迹法分析封闭效果,而细胞内GCLCmRNA的表达、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量和细胞凋亡率,分别由实时定量PCR法、比色法和流式细胞仪法测得。并测定siNrf2对万珂诱导其他甲状腺癌细胞凋亡的影响。结果:与对照组相比,siNrf2组在培养液和万珂处理中Nrf2mRNA和蛋白都显著减少,P<0.01;随机序列核酸siRNA和错位型siNrf2差异无统计学意义,P>0.05。与对照组相比,siNrf2能够增加万珂诱导8305C、8505C、KTC1和KTC3的细胞凋亡率,差异均有统计学意义,P<0.01;FRO和KTC2的细胞凋亡率差异无统计学意义,P>0.05。与随机序列核酸siRNA组相比,空白对照组中siNrf2转染组GCLCmRNA及GSH减少,P<0.05;万珂处理组中siNrf2转染组两者减少更显著,P<0.01。GSH和NAC(GSH的前体并能提高GSH的含量)抑制了siNrf2促万珂诱导甲状腺癌细胞凋亡作用。结论:Nrf2抵消万珂诱导甲状腺癌细胞凋亡作用,至少部分是通过GCLC转录激活和随后GSH的生成实现的。

关键词：甲状腺肿瘤/病理学蛋白酶体抑制剂氧化应激 Nrf2

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胱天蛋白酶3介导BAG3蛋白剪切的研究

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中国医科大学学报 2012年第7期41卷 603-606页

作者：张海燕都镇先孟欣邓娓娓王华芹中国医科大学附属第一医院老年病科沈阳110001 中国医科大学附属第一医院内分泌科沈阳110001 中国医科大学基础医学院生化与分子生物教研室沈阳110001

目的解析胱天蛋白酶(caspase)3介导BCL2结合抗凋亡基因3(BAG3)酶切的具体作用靶点,明确caspase 3裂解对BAG3抗凋亡作用的影响。方法采用生物信息学方法筛选BAG3蛋白序列中潜在caspase酶切位点;采用定点突变法构建潜在caspase酶切位点突... 详细信息

目的解析胱天蛋白酶(caspase)3介导BCL2结合抗凋亡基因3(BAG3)酶切的具体作用靶点,明确caspase 3裂解对BAG3抗凋亡作用的影响。方法采用生物信息学方法筛选BAG3蛋白序列中潜在caspase酶切位点;采用定点突变法构建潜在caspase酶切位点突变体;体外翻译野生型和突变型BAG3蛋白;利用重组caspase对野生型或突变型重组BAG3蛋白进行体外剪切实验;构建BAG3裂解片段的真核表达载体,突变型或片段BAG3表达载体转染SW1990细胞;利用Western blot检测各组细胞中BAG3蛋白的裂解情况;利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果在BAG3蛋白序列中存在K344EVD347和L515EAD518 2个潜在caspase酶切位点;caspase3可有效剪切D518A突变型BAG3,而不能剪切D347A突变型BAG3;D518A突变型和野生型BAG3同等程度抑制MG132诱导的细胞凋亡,D347A突变型BAG3对细胞凋亡的保护作用高于D518A突变型或野生型BAG3,而N末端和C末端剪切片段BAG3对MG132诱导的细胞凋亡无作用。结论 caspase3主要在D347位点裂解BAG3蛋白;BAG3在D347位点的剪切使其丧失了原有的抗凋亡作用。

关键词：胱天蛋白酶 BAG3 裂解凋亡

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还原型谷胱甘肽对蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡影响的研究

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中华肿瘤防治杂志 2012年第1期19卷 37-40,48页

目的:探讨还原型谷胱甘肽在启动蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:选取4种人甲状腺未分化癌细胞系ARO、FRO、KTC2和8305C,分别设空白对照组、万珂处理组;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡;测定还原型谷胱甘肽(GSH)含量、... 详细信息

目的:探讨还原型谷胱甘肽在启动蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:选取4种人甲状腺未分化癌细胞系ARO、FRO、KTC2和8305C,分别设空白对照组、万珂处理组;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡;测定还原型谷胱甘肽(GSH)含量、谷氨酸半胱氨酸合成酶(GCL)和谷胱甘肽合成酶(GS)的活性;实时定量PCR法检测GCL和GS mRNA的水平。结果:与对照组相比,蛋白酶体抑制剂万珂对人甲状腺癌细胞系FRO和KTC2具有很强的细胞凋亡诱导作用;万珂处理24h时,FRO、KTC2细胞中GSH水平下降,差异有统计学意义,P<0.01;ARO和8305C细胞中GSH水平显著增加,差异有统计学意义,P<0.01。万珂处理组FRO和KTC2甲状腺癌细胞中,GCL的活性没有变化而GCL mRNA也仅有轻度增加,P>0.05;但在ARO和8305C细胞中,万珂作用8h后,GCL的活性及mRNA的表达显著增加,差异有统计学意义,P<0.01;而GS活性及mRNA水平在各组细胞中的变化差异均无统计学意义,P>0.05。结论:蛋白酶体抑制剂可诱导耐药的甲状腺癌细胞中GCL转录和活性增高,提高GSH在细胞中的表达,导致蛋白酶体抑制剂诱导的肿瘤细胞凋亡受抑。

关键词：甲状腺肿瘤/病理学蛋白酶体抑制剂还原型谷胱甘肽细胞凋亡

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胱天蛋白酶酶解BAG3蛋白的体外研究

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中华肿瘤防治杂志 2012年第24期19卷 1863-1865页

作者：张海燕都镇先孟欣邓娓娓王华芹中国医科大学附属第一医院老年病科辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院内分泌科辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院生化与分子生物教研室辽宁沈阳110001

目的:探讨BAG3是否为胱天蛋白酶的直接作用底物。方法:选取人胰腺癌细胞SW1990,分别设培养液处理空白对照组、蛋白酶体抑制剂MG132单独或与胱天蛋白酶抑制剂z-YVAD、z-DEVD、z-IETD或z-LEHD联合处理;利用重组胱天蛋白酶对重组BAG3蛋白... 详细信息

目的:探讨BAG3是否为胱天蛋白酶的直接作用底物。方法:选取人胰腺癌细胞SW1990,分别设培养液处理空白对照组、蛋白酶体抑制剂MG132单独或与胱天蛋白酶抑制剂z-YVAD、z-DEVD、z-IETD或z-LEHD联合处理;利用重组胱天蛋白酶对重组BAG3蛋白进行体外酶解;蛋白质印迹法检测各组细胞中BAG3蛋白的裂解情况。结果:在体外,2mol/L胱天蛋白酶1抑制剂z-YVAD和2mol/L胱天蛋白酶8抑制剂z-IETD可以部分抑制,2mol/L胱天蛋白酶3抑制剂z-DEVD可以完全抑制,而胱天蛋白酶9抑制剂z-LEHD不能抑制MG132诱导的BAG3裂解;在胱天蛋白酶的体外酶切实验中,重组胱天蛋白酶1、3和8可以裂解BAG3,而胱天蛋白酶9不能剪切BAG3。另外,胱天蛋白酶3裂解BAG3的效率最高,0.1mol/L胱天蛋白酶3即可以对BAG3进行剪切,0.5mol/L胱天蛋白酶3可以完全酶切BAG3。结论:BAG3是胱天蛋白酶的直接作用底物,胱天蛋白酶3是执行BAG3裂解的主要胱天蛋白酶。

关键词：胱天蛋白酶 BAG3 裂解直接底物

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蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡机制的探讨

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中华肿瘤防治杂志 2012年第8期19卷 583-587页

目的:探讨p38MAPK信号转导通路参与蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡的作用机制。方法:选取甲状腺癌细胞系,利用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的三种抑制剂抑制磷酸化途径,利用微小RNA干扰技术转染细胞,封闭p38MAPK。用蛋白质印迹法检测... 详细信息

目的:探讨p38MAPK信号转导通路参与蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡的作用机制。方法:选取甲状腺癌细胞系,利用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的三种抑制剂抑制磷酸化途径,利用微小RNA干扰技术转染细胞,封闭p38MAPK。用蛋白质印迹法检测红系衍生的核因子2相关因子2(Nrf2)及p38MAPK的表达,实时定量PCR检测细胞内GCLC mRNA的表达,测定还原型谷胱甘肽的含量,流式细胞仪法检测甲状腺癌细胞凋亡率。结果:在甲状腺癌细胞系8305C细胞中,与对照组相比,p38MAPK的抑制剂SB203580和sip38MAPK均能够抑制蛋白酶体抑制剂诱导的Nrf2细胞核易位(P<0.01),并使随后的GCLC mRNA表达减少、GSH含量减少(P<0.01),显著提高蛋白酶体抑制剂诱导的甲状腺癌细胞凋亡率(P<0.01),而其他2种抑制剂和随机序列核酸siRNA无上述作用。结论:蛋白酶体抑制剂通过p38MAPK途径激活Nrf2的细胞核易位,进而导致GCLC的诱导作用和谷胱甘肽生成的连锁反应,成为蛋白酶体抑制剂在甲状腺癌细胞中的一种抗凋亡机制。

关键词：甲状腺肿瘤/病理学蛋白酶体抑制剂 p38丝裂原活化蛋白激酶 Nrf2 细胞凋亡

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氧调节蛋白150诱导甲状腺癌细胞凋亡机制的研究

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中华肿瘤防治杂志 2012年第14期19卷 1057-1060页

目的:探讨氧调节蛋白150(ORP150)是否能够通过调控内质网应激来对抗蛋白酶体抑制剂介导的甲状腺未分化癌细胞凋亡。方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO、8305C和8505C,分别设空白对照组、siORP150组、随机序列核酸(siRNA)组、ORP150组... 详细信息

目的:探讨氧调节蛋白150(ORP150)是否能够通过调控内质网应激来对抗蛋白酶体抑制剂介导的甲状腺未分化癌细胞凋亡。方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO、8305C和8505C,分别设空白对照组、siORP150组、随机序列核酸(siRNA)组、ORP150组、siCHOP组和siORP150+siCHOP组,加或不加蛋白酶体抑制剂MG132(2μmol/L)处理;利用微小RNA干扰技术封闭ORP150及CHOP的表达;实时定量PCR法、蛋白质印迹法及流式细胞仪(FCM)检测CHOP基因表达及各组甲状腺未分化癌细胞凋亡率。结果:FRO、8305C和8505C细胞中,ORP150表达载体组中CHOP mRNA较空白载体组显著降低,P<0.01;siORP150组中CHOP mRNA较随机序列核酸siRNA组显著升高,P<0.01。在FRO细胞中,蛋白质印迹法检测CHOP得到相似的结果。FCM检测结果显示,FRO细胞中siORP150组细胞凋亡率为87.72%,而这种增敏效应被siCHOP所抑制,其细胞凋亡率为56.96%,两组差异有统计学意义,P<0.01;8305C和8505C细胞中也得到相似的结果。结论:氧调节蛋白150通过调节CHOP的表达调控蛋白酶体抑制剂MG132诱导甲状腺未分化癌细胞凋亡的作用。

关键词：甲状腺肿瘤病理蛋白酶体抑制剂氧调节蛋白150 CHOP 细胞凋亡

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氧化应激对蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡影响的研究

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中华肿瘤防治杂志 2012年第4期19卷 263-267页

目的:探讨氧化应激在启动蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:选取4种人甲状腺未分化癌细胞系ARO、FRO、KTC2和8305C,分别设空白对照组、万珂处理组和万珂+钛剂联合组;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡情况;Caspase-3活性测... 详细信息

目的:探讨氧化应激在启动蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:选取4种人甲状腺未分化癌细胞系ARO、FRO、KTC2和8305C,分别设空白对照组、万珂处理组和万珂+钛剂联合组;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡情况;Caspase-3活性测试法检测各组细胞Caspase-3活性;用荧光分光光度计法检测各组细胞蛋白酶体活性和细胞内ROS水平。结果:与空白对照组相比,蛋白酶体抑制剂万珂对人甲状腺癌细胞系FRO和KTC2具有很强的细胞凋亡诱导作用;使FRO和KTC2细胞中Caspase-3的活性显著增高,P<0.01;可持续快速抑制蛋白酶体活性,但在4组细胞中差异无统计学意义,P>0.05;万珂可显著提高活性氧簇在FRO和KTC2甲状腺癌细胞中的表达。万珂组与万珂+钛剂组活性氧簇水平在4种甲状腺癌细胞中差异均有统计学意义,P<0.05;在FRO和KTC2甲状腺癌细胞中,万珂组与万珂+钛剂组中的细胞凋亡率差异有统计学意义,P<0.01。结论:蛋白酶体抑制剂可以提高活性氧簇在甲状腺未分化癌细胞中的表达,促进肿瘤细胞的凋亡,并且这种效应可以被抗氧化剂所抑制。

关键词：甲状腺肿瘤/病理学细胞凋亡蛋白酶体抑制剂氧化应激肿瘤

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白藜芦醇抑制白血病K562细胞增殖机制的探讨

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中华肿瘤防治杂志 2012年第19期19卷 1460-1463页

作者：张海燕都镇先孟欣邓娓娓王华芹中国医科大学附属第一医院老年病干诊科辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院内分泌科辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院生化与分子生物教研室辽宁沈阳110001

目的:探讨白藜芦醇(RES)抑制白血病K562细胞增殖的机制及非折叠蛋白应答(UPR)对其机制的影响。方法:选取不同浓度的RES干预K562细胞,并且用RES(100μmol/L)干预K562细胞不同时段;利用MTT法检测细胞存活率;利用流式细胞仪分析细胞周期并... 详细信息

目的:探讨白藜芦醇(RES)抑制白血病K562细胞增殖的机制及非折叠蛋白应答(UPR)对其机制的影响。方法:选取不同浓度的RES干预K562细胞,并且用RES(100μmol/L)干预K562细胞不同时段;利用MTT法检测细胞存活率;利用流式细胞仪分析细胞周期并检测细胞凋亡率;利用蛋白质印迹法检测凋亡早期蛋白及UPR靶点蛋白表达水平;利用实时定量PCR法检测GRP78和CHOP mRNA的表达。结果:RES导致K562细胞细胞存活率明显减少,并呈剂量依赖方式;RES的生长抑制作用主要是阻断细胞周期中的G1期,G2/M期的变化较小;RES处理的K562细胞没有显著的细胞凋亡。RES可提高GRP78mRNA的表达水平,呈剂量及时效依赖方式;RES对CHOP mRNA水平也有诱导作用,但只有在RES浓度较大时(50μmol/L)或作用时间较长时(8h)才开始上调,并且上调幅度较小。蛋白质印迹分析证实RES提高UPR靶点(GRP78、GRP94、磷酸化eIF2a和剪接作用XBP-1)的蛋白表达水平。结论:RES优先诱导UPR存活分支,表明UPR参与RES抑制白血病K562细胞增殖的机制。

关键词： K562细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶代谢细胞凋亡药物作用

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蛋白酶体抑制剂对甲状腺未分化癌细胞ATF-4表达影响的研究

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中华肿瘤防治杂志 2012年第16期19卷 1212-1215页

作者：张海燕吕岩孟欣都镇先邓娓娓王华芹中国医科大学附属第一医院老年病科辽宁沈阳110001 中国医科大学护理学院辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院生化与分子生物教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院内分泌科辽宁沈阳110001

目的:探讨蛋白酶体抑制剂对甲状腺未分化癌FRO细胞中活化转录因子4(ATF-4)表达的影响,以及ATF-4在蛋白酶体抑制剂诱导FRO细胞凋亡中的作用。方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO,分别设空白对照组和蛋白酶体抑制剂MG132处理组;利用微小... 详细信息

目的:探讨蛋白酶体抑制剂对甲状腺未分化癌FRO细胞中活化转录因子4(ATF-4)表达的影响,以及ATF-4在蛋白酶体抑制剂诱导FRO细胞凋亡中的作用。方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO,分别设空白对照组和蛋白酶体抑制剂MG132处理组;利用微小RNA干扰技术,减少ATF-4的表达,实时定量PCR法、蛋白质印迹法分别检测各组细胞中ATF-4、氧调节蛋白150(ORP150)mRNA和蛋白表达;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,蛋白酶体抑制剂MG132显著增加FRO细胞系中ATF-4基因表达水平,P<0.01;与空白对照组和随机序列核酸siRNA组相比,siATF-4处理组中ATF-4、ORP150mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),其凋亡率显著增加,P<0.01。结论:蛋白酶体抑制剂能够上调甲状腺未分化癌FRO细胞系中ATF-4基因的表达水平,siATF-4具有降低ATF-4及OPR150基因表达的作用,同时增加蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺未分化癌FRO细胞的凋亡作用。

关键词：甲状腺肿瘤/病理学细胞凋亡蛋白酶体抑制剂活化转录因子4

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基于***技术的计算机模拟病例考核系统的设计与应用

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中华医学教育探索杂志 2012年第2期11卷 179-181页

作者：孙昕王丽美刘宜鑫韩松涛何颖哈尔滨医科大学基础医学院计算机教研室 150081 哈尔滨市第五医院骨科 150040

为考查医学生的实际临床诊疗能力，在医学教育中引入计算机模拟病例技术是十分必要的。结合***技术和模拟病例技术的计算机模拟病例考核系统，能较逼真地模拟医生看病的过程，实现对医学生临床实践技能客观全面的测评。该系统在医学教... 详细信息

为考查医学生的实际临床诊疗能力，在医学教育中引入计算机模拟病例技术是十分必要的。结合***技术和模拟病例技术的计算机模拟病例考核系统，能较逼真地模拟医生看病的过程，实现对医学生临床实践技能客观全面的测评。该系统在医学教学发展和临床技能培训等方面有着良好的应用前景。

关键词：计算机模拟病例网络技术考核系统临床能力

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