检索结果-内蒙古大学图书馆

中国科技论文在线 2011年第3期6卷 231-236页

作者：郭津徐长庆哈尔滨医科大学病理生理教研室哈尔滨150086 佳木斯大学儿童神经康复实验室黑龙江佳木斯154003 黑龙江生物医药工程重点实验室哈尔滨150086

观察动脉粥样硬化对大鼠心肌钙敏感受体(CaSR)表达和MAPK通路的影响。采用腹腔注射维生素D3(VitD3,6×105U/kg)+高脂饮食6周的方法,建立大鼠动脉粥样硬化模型。Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=12)和动脉粥样硬化组(n=12)。采用West... 详细信息

观察动脉粥样硬化对大鼠心肌钙敏感受体(CaSR)表达和MAPK通路的影响。采用腹腔注射维生素D3(VitD3,6×105U/kg)+高脂饮食6周的方法,建立大鼠动脉粥样硬化模型。Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=12)和动脉粥样硬化组(n=12)。采用Western blot观察大鼠心肌CaSR、p-ERK、p-JNK和p-P38的蛋白表达;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;光镜观察腹主动脉和心肌形态学变化;电镜观察心脏超微结构变化;紫外分光法检测血清肌酸激酶(CK)、超氧化物岐化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)含量,电化学免疫发光法检测肌钙蛋白T(cTnT)水平。与正常对照组相比,动脉粥样硬化组的CK活性、MDA含量、cTnT水平、细胞凋亡指数以及CaSR、p-ERK、p-JNK和p-P38的表达均明显升高,而SOD活性则显著降低,心肌细胞超微结构损伤严重。动脉粥样硬化性心肌损伤可能与氧化应激使心肌CaSR表达增加,进而通过MAPK通路激活诱导细胞凋亡有关。

关键词：动脉粥样硬化钙敏感受体心肌细胞凋亡

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转化生长因子-β在骨髓间充质干细胞治疗实验性自身免疫性重症肌无力机制中的作用

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中国生物制品学杂志 2010年第3期23卷 225-229页

作者：刘江恒韩志娟周明言李娜刘静穆莉莉孔庆飞李呼伦哈尔滨医科大学神经生物教研室黑龙江省神经生物学重点实验室哈尔滨150081

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)在骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)机制中的作用。方法分离培养健康Lewis大鼠BMSCs,并进行大量体外扩增;以大鼠来源的乙酰胆碱受体(R-AChR)2次免疫Lewis大鼠,建立EAMG模型... 详细信息

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)在骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)机制中的作用。方法分离培养健康Lewis大鼠BMSCs,并进行大量体外扩增;以大鼠来源的乙酰胆碱受体(R-AChR)2次免疫Lewis大鼠,建立EAMG模型;第2次免疫的同时,经尾静脉移植BMSCs,1×107个/只,依据Lennon评分标准,进行体重测量和临床体征评定。并通过体外实验进一步探讨TGF-β在治疗EAMG过程中的具体机制。结果BMSCs移植明显缓解了EAMG的临床症状,临床评分及体重变化差异均有统计学意义,表明治疗有效;体外实验结果显示,BMSCs能通过TGF-β的分泌影响AChR特异性Th17/Treg细胞亚群的分布及其相关因子的分泌,以anti-TGF-β抗体封闭后,这种调节作用在一定程度上被抑制。结论BMSCs通过细胞因子TGF-β,能在一定程度上调节AChR特异性Th17/Treg细胞亚群的平衡,从而起到治疗EAMG的作用。

关键词：转化生长因子-β 骨髓间充质干细胞实验性自身免疫性重症肌无力

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骨髓间充质干细胞对大鼠脑胶质瘤C6细胞系分化的影响

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中国生物制品学杂志 2010年第8期23卷 793-796页

作者：王小冬穆莉莉戢玉环孙博王广友韩志娟刘婷婷李呼伦王菁华哈尔滨医科大学附属第二医院急诊科哈尔滨150086 哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省高校神经生物学重点实验室哈尔滨150081

目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)对大鼠脑胶质瘤C6细胞系分化的影响及其相关机制。方法用Transwell小室共培养BMSCs与C6细胞,采用细胞计数法检测C6细胞增殖水平;流式细胞术检测C6细胞的细胞周期;免疫荧光... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)对大鼠脑胶质瘤C6细胞系分化的影响及其相关机制。方法用Transwell小室共培养BMSCs与C6细胞,采用细胞计数法检测C6细胞增殖水平;流式细胞术检测C6细胞的细胞周期;免疫荧光与免疫组化法分别检测波形蛋白(vimentin)和胶质纤维酸性蛋白(Glia lfibrillary acidic protein,GFAP)的表达;生化法检测谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)的活性。结果 BMSCs对C6细胞的增殖具有抑制作用;与BMSCs进行双层培养72h的C6细胞出现G0/G1期细胞周期阻滞,双层培养组的C6细胞GFAP表达明显增强,同时vimentin表达减弱,并且这两种分化标志物在细胞内的分布及排列发生了改变;双层培养组C6细胞内GS活性升高。结论 BMSCs能诱导C6细胞向成熟星形胶质细胞分化,可能与BMSCs分泌的某些细胞因子有关。

关键词：间质干细胞 C6细胞系细胞分化

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辅助性CD4^+ T细胞亚群失衡在实验性自身免疫性重症肌无力大鼠发病机制中的作用

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中国生物制品学杂志 2010年第9期23卷 930-934页

作者：王小冬孙博王菁华孔庆飞谢晓丽周明言李娜李呼伦穆莉莉哈尔滨医科大学附属第二医院急诊科哈尔滨150086 哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省高校神经生物学重点实验室哈尔滨150081

目的研究实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)大鼠发病过程中辅助性CD4+T细胞亚型的变化。方法将Lewis大鼠分为完全弗氏佐剂(CFA)早、晚期发病时对照相和EAMG早期(初次免疫后13d)、高峰期(初... 详细信息

目的研究实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)大鼠发病过程中辅助性CD4+T细胞亚型的变化。方法将Lewis大鼠分为完全弗氏佐剂(CFA)早、晚期发病时对照相和EAMG早期(初次免疫后13d)、高峰期(初次免疫后50d)发病时相4组,各组分别给予相应的药物后,于发病早期和高峰期分离淋巴细胞,采用流式细胞术检测各组大鼠淋巴细胞中Th1、Th2、Th17和Treg细胞的比例,ELISA法检测淋巴细胞培养上清中各种细胞因子水平。结果在EAMG发病的早期时相,与CFA组比较,EAMG组Th1、Th2、Th17细胞的比例下降,而Treg细胞比例上升;淋巴细胞培养上清中IFNγ和IL-4水平显著下降(P<0.05),IL-6水平显著升高(P<0.05),IL-17和TGF-β水平略升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。在EAMG发病的高峰期,与CFA组比较,EAMG组Th1和Th17细胞的比例显著上升(P<0.05),而Th2和Treg细胞的比例显著下降(P<0.05),淋巴细胞培养上清中IFNγ和IL-17水平显著上升(P<0.05),IL-4和TGF-β水平显著下降(P<0.01),IL-6水平略上升,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论在EAMG发生过程中,4种辅助性CD4+T细胞亚型之间的平衡被打破,晚期时相中Th1和Th17细胞比例上升,而Th2和Treg细胞比例下降。

关键词：重症肌无力,自身免疫性,实验性 Th1细胞 Th2细胞 Th17细胞 Treg细胞

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骨髓间充质干细胞对大鼠胶质瘤细胞增殖的影响

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国际免疫学杂志 2010年第6期33卷 481-485页

作者：王菁华戢玉环穆莉莉孙博王广友王丹丹刘玉梅孔庆飞李呼伦哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省普通高校神经生物重点实验室哈尔滨150081

目的研究骨髓间充质干细胞（BMSC）对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的影响，并且探讨其相关机制。方法提取SD大鼠BMSC，进行体外培养、扩增。应用MTt比色法检测不同浓度BMSC上清液对C6细胞系增殖的抑制作用。用Transwell小室将BMSC与C6细胞进... 详细信息

目的研究骨髓间充质干细胞（BMSC）对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的影响，并且探讨其相关机制。方法提取SD大鼠BMSC，进行体外培养、扩增。应用MTt比色法检测不同浓度BMSC上清液对C6细胞系增殖的抑制作用。用Transwell小室将BMSC与C6细胞进行双层培养，以HE染色法检测C6细胞形态变化。用划痕实验检测细胞迁移情况。结果MTF结果显示BMSC上清液对C6细胞有抑制作用，120h后1：8、1：4、1：2的BMSC上清稀释液、BMSC上清原液培养组的生长抑率分别为17．1％、26．0％、39．9％、43．1％；与BMSC进行双层培养后的C6细胞其形态发生了明显改变，由圆形或多角形变为长梭形，细胞包体伸出长突起；划痕实验显示在36h时对照组迁移率为100％，划痕完全愈合，而BMSC上清组划痕未见全愈合，迁移率为82％。结论①BMSC上清液能抑制胶质瘤C6细胞的恶性增殖，而且抑制效应呈剂量依赖性；②BMSC对C6的运动和迁移产生了抑制作用，从而降低了其恶性侵袭程度。

关键词：骨髓间充质干细胞胶质瘤细胞增殖共培养

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系统性红斑狼疮患者血清特异性的噬菌体7肽的筛选、鉴定及其意义

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第7期30卷 665-669页

作者：王垚苏丽菊李辉刘彦虹翟爱霞考文萍吴静李文辉胡云龙钟照华张凤民哈尔滨医科大学微生物学教研室 150086 哈尔滨医科大学附属第二医院检验科黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室

目的筛选和鉴定与系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）患者血清特异性结合的噬菌体7肽,并分析其实际意义.方法分别选取正常人及SLE患者血清各30例,先后用正常人混合血清及SLE患者混合血清作为筛选配基,对噬菌体随机7... 详细信息

目的筛选和鉴定与系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）患者血清特异性结合的噬菌体7肽,并分析其实际意义.方法分别选取正常人及SLE患者血清各30例,先后用正常人混合血清及SLE患者混合血清作为筛选配基,对噬菌体随机7肽库进行亲和筛选、扩增,获得SLE血清特异性结合的噬菌体克隆,并用患者混合血清进行Dot-ELISA实验鉴定获得的噬菌体克隆,进而分别用SLE患者及正常人血清各12例进一步鉴定阳性噬菌体的混合克隆,确定阳性噬菌体克隆与个体血清之间的结合情况;并对最终鉴定的噬菌体克隆进行测序与比对分析.结果筛选到与SLE患者混合血清特异性结合的阳性克隆12个;阳性噬菌体混合克隆与SLE患者个体血清反应阳性率明显高于其与正常人血清的反应率;序列分析显示阳性噬菌体克隆的抗原表位与大肠杆菌、沙门菌、人类免疫缺陷病毒（HIV）有一定的同源性,但与人类抗原表位无关.结论噬菌体随机7肽库筛选出的SLE特异性多肽可能用于制备SLE诊断试剂,同时SLE患者血清中存在与病原体抗原表位结合的抗体成分,提示SLE可能与病原体感染有关.

关键词：噬菌体随机肽库系统性红斑狼疮血清

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EAE模型中IL-17阻断MBP经鼻黏膜免疫诱导耐受的机制研究

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免疫学杂志 2010年第1期26卷 25-28,33页

作者：张瑶孟庆峰王菁华孙博孔庆飞刘玉梅周明言刘希君李呼伦王广友哈尔滨医科大学神经生物学教研室哈尔滨医科大学神经生物省重点实验室博士生150081 伊春市南岔区公安分局技术中队 153100

目的探讨MBP68-86肽段经鼻黏膜诱导EAE模型免疫耐受中IL-17的作用机制。方法向4组Lewis大鼠鼻黏膜分别给与PBS、MBP、MBP+IL-17及MBP+IL-17^+腹腔注射Anti-IL-6,诱导免疫耐受给药5 d后,建立EAE动物模型。ELISA方法测定各组血清中细胞因... 详细信息

目的探讨MBP68-86肽段经鼻黏膜诱导EAE模型免疫耐受中IL-17的作用机制。方法向4组Lewis大鼠鼻黏膜分别给与PBS、MBP、MBP+IL-17及MBP+IL-17^+腹腔注射Anti-IL-6,诱导免疫耐受给药5 d后,建立EAE动物模型。ELISA方法测定各组血清中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-17和TGF-β的含量;评估EAE临床发病情况;脊髓切片分别做HE染色观察淋巴细胞浸润及分布情况,免疫组化方法检测脊髓中单位面积IL-17^+细胞数量;流式细胞仪检测淋巴结中Th17细胞和Treg细胞数量。结果IL-17组与MBP组细胞因子含量相比IFN-γ(P<0.05)、IL-4(P<0.01)、IL-6(P<0.01)、IL-17(P<0.001)、TGF-β(P<0.01)有显著差异,与PBS组无差异;IL-17组、PBS组与MBP组、Anti-IL-6组相比,免疫后出现体重减轻、尾瘫、后肢瘫痪等临床表现;脊髓切片中淋巴细胞浸润面积较大且细胞数量较多、IL-17^+细胞数显著增多;淋巴结中CD4^+IL-17^+T细胞百分率显著增多、CD4^+Foxp3^+T细胞显著减少。结论鼻黏膜给予IL-17可以打破MBP特异性免疫耐受的形成;并且IL-17是通过促进IL-6表达增加,使初始化的T细胞向Th17细胞分化增加,从而打破MBP鼻黏膜免疫耐受治疗EAE。

关键词：实验性自身免疫性脑脊髓炎免疫耐受 IL-17 Th17细胞调节性T细胞

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模拟微重力培养对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠淋巴细胞功能的影响

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国际免疫学杂志 2010年第2期33卷 157-162页

作者：白莎莎王菁华孔庆飞刘玉梅刘希君孙博王广友李娜李呼伦哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省普通高等学校神经生物重点实验室150081

目的观察模拟微重力条件下实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠淋巴细胞细胞功能的变化。方法尾根免疫MBP668-86建立EAE模型；12d时处死大鼠，分离培养淋巴结细胞；利用旋转式细胞培养系统进行模拟微重力培养；不同时间点，增殖实验检... 详细信息

目的观察模拟微重力条件下实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠淋巴细胞细胞功能的变化。方法尾根免疫MBP668-86建立EAE模型；12d时处死大鼠，分离培养淋巴结细胞；利用旋转式细胞培养系统进行模拟微重力培养；不同时间点，增殖实验检测细胞增殖、流式检测细胞凋亡、T细胞亚型、Th细胞亚群变化；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清中细胞因子的变化。结果EAE淋巴细胞针对MBP68-86抗原特异性增殖，在培养20h，60h，80h时，增殖受到抑制（t=3．859，P〈0．01；t=5．933，P〈0．001；t=7．613，P〈0．001）；40h时，增殖受到促进（t=4．015，P〈0．01）。培养24h时，微重力组坏死及凋亡细胞增高（t=3．998，P〈0．01；t=3．705，P〈0．01），Th细胞降低（t=4．111，P〈0．01），Th1、Th17和调节性T细胞（Treg）亚群比例升高（t=2．743，P〈0．05；t=4．362，P〈0．01；t=2．945，P〈0．05）。微重力培养40h时，IFN-γ，TNF-α浓度明显升高（t=4．056，P〈0．01；t=4．666，P〈0．01），TGF-β、IL-6、IL4、IL-17浓度明显降低（t=2．855，P〈0．05；t=2．644，P〈0．05；t=3．154，P〈0．05；t=2．732，P〈0．05）。结论除40h外，MBP668-86。特异性淋巴细胞增殖在模拟微重力环境中被抑制；细胞死亡增多、Th细胞减少，对EAE起重要作用的细胞因子的浓度改变。

关键词：自身抗原反应性淋巴细胞微重力细胞增殖细胞凋亡 Th细胞细胞因子

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BDV核蛋白FQ RT-PCR试剂盒的评价与应用

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微生物学通报 2010年第2期37卷 239-245页

作者：徐鸣明展群岭张英英张亮宋武琦张凤鸣谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学神经科学中心重庆400016 哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染和免疫重点实验室黑龙江哈尔滨150081

为评价博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)核蛋白荧光定量PCR(FQRT-PCR)试剂盒的各项指标,比较分子信标探针相对普通探针的优势,并了解其实际检测效果,本课题组使用BDVOL持续感染细胞株、非BDV病毒序列转染的OL细胞、正常的OL细胞,... 详细信息

为评价博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)核蛋白荧光定量PCR(FQRT-PCR)试剂盒的各项指标,比较分子信标探针相对普通探针的优势,并了解其实际检测效果,本课题组使用BDVOL持续感染细胞株、非BDV病毒序列转染的OL细胞、正常的OL细胞,对BDVRT-PCR试剂盒的敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评估,同时检测部分临床病人和动物外周血液RNA。实验结果显示:试剂盒可以检测出的病毒RNA最低浓度为2.5×101,相当于1个病毒拷贝数,无非特异检出;不同批次的试剂盒的检测结果变异系数小于0.7;加速破坏的试剂盒和正常试剂盒检测结果之间变异系数在2以内;对临床病人检测阳性率为3.6%,对动物检测阳性率为4.2%(猪)和1.5%(马)。可见该试剂盒重复性和稳定性均好;敏感性、特异性优于普通探针试剂盒,是BDV基础研究、流行病学调查和临床检测的良好工具。

关键词：博尔纳病病毒实时荧光定量PCR 核蛋白

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Ox-LDL对培养的心肌细胞钙敏感受体表达和细胞凋亡的影响

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中国科技论文在线 2010年第12期5卷 983-988页

观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对原代培养的乳鼠心肌细胞钙敏感受体(CaSR)的表达和细胞凋亡的影响。将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为2组:正常对照组(control group)和ox-LDL组(ox-LDL group)。用MTT比色法、电镜、TUNEL染色和流式... 详细信息

观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对原代培养的乳鼠心肌细胞钙敏感受体(CaSR)的表达和细胞凋亡的影响。将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为2组:正常对照组(control group)和ox-LDL组(ox-LDL group)。用MTT比色法、电镜、TUNEL染色和流式细胞计数仪等方法观察心肌细胞凋亡;用Western blot观察CaSR、Cytc、Bax、caspase-3和Bcl-2的蛋白表达;用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙浓度的变化。与正常组比较,ox-LDL组:CaSR表达呈时间与剂量依赖性上调,细胞内钙增加,细胞凋亡增加,Cytc、Bax和caspase-3表达升高,细胞存活率和Bcl-2表达降低。ox-LDL可使原代培养心肌细胞的CaSR表达增加,通过激活线粒体通路,促进细胞凋亡。

关键词：钙敏感受体心肌细胞氧化型低密度脂蛋白细胞凋亡

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