检索结果-内蒙古大学图书馆

哈尔滨医科大学学报 2009年第4期43卷 328-332页

作者：沐晓芹张莹梁海海李超陈艳艳吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081

目的研究微小RNA133(microRNA-133,miRNA-133)对乳鼠心肌细胞内钙浓度的调节机制。方法利用lipofectamine2000将miRNA-133转染到原代培养的乳鼠心肌细胞中,采用细胞免疫荧光染色方法检测miRNA-133对L型钙通道蛋白表达的影响,并采用激光... 详细信息

目的研究微小RNA133(microRNA-133,miRNA-133)对乳鼠心肌细胞内钙浓度的调节机制。方法利用lipofectamine2000将miRNA-133转染到原代培养的乳鼠心肌细胞中,采用细胞免疫荧光染色方法检测miRNA-133对L型钙通道蛋白表达的影响,并采用激光共聚焦显微镜检测miRNA-133对心肌细胞内钙浓度的影响。结果与对照组相比,转染miRNA-133的乳鼠心肌细胞钙通道蛋白的荧光强度显著降低,细胞内钙荧光强度也明显降低(P<0.05),转染AMO133(miRNA-133的反义链,可特异性阻断miRNA-133)的心肌细胞钙通道蛋白的荧光强度显著增强,细胞内钙荧光强度也明显增加(P<0.05),miRNA-133和AMO133共转染的心肌细胞钙通道蛋白的荧光强度和细胞内钙荧光强度与对照组相比无明显变化。结论MiRNA-133通过抑制L型钙通道蛋白的表达而降低心肌细胞内的钙浓度。

关键词： miRNA-133 心肌细胞细胞钙浓度 L型钙通道

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Caveolin-3在心房纤颤组织中的表达

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哈尔滨医科大学学报 2009年第3期43卷 211-214页

作者：陈艳艳张莹王宁路慧敏梁海海王然沐晓芹吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081

目的探讨犬心房纤颤(atrial fibrillation,AF)模型中微囊蛋白-3(Caveolin-3)蛋白表达情况。方法建立犬房颤(AF)模型,通过免疫荧光染色和Western blot技术检测心房快速起搏建立的犬AF模型及AF患者心房肌的Caveolin-3蛋白表达情况。结果... 详细信息

目的探讨犬心房纤颤(atrial fibrillation,AF)模型中微囊蛋白-3(Caveolin-3)蛋白表达情况。方法建立犬房颤(AF)模型,通过免疫荧光染色和Western blot技术检测心房快速起搏建立的犬AF模型及AF患者心房肌的Caveolin-3蛋白表达情况。结果在犬和人房颤的心房组织,Western blot结果显示Caveolin-3蛋白表达明显降低,与非房颤组织相比P<0.05。在犬假手术组和窦性心律的患者,免疫荧光结果显示位于心房组织细胞膜上Caveolin-3蛋白表达明显,并均匀分布在细胞膜表面;而在AF状态下,人和犬心房肌Caveolin-3蛋白表达显著降低。结论Caveolin-3参与了AF这一临床复杂病症的发生和发展。

关键词：心房纤颤微囊蛋白-3 蛋白表达

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西尼地平对缺血心肌的保护作用机制研究

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哈尔滨医科大学学报 2009年第4期43卷 316-319页

作者：张容姬张勇王莹陈艳艳周游吕延杰杨宝峰孙建平哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081

目的观察西尼地平对缺血心肌缝隙连接蛋白(Cx43)含量、分布的影响。方法采用结扎大鼠左冠状动脉的方法制备心肌缺血模型,分析心电图,应用Western blot检测心室中Cx43表达量的变化,电镜观察心肌细胞闰盘结构变化。结果心电图显示,西尼地... 详细信息

目的观察西尼地平对缺血心肌缝隙连接蛋白(Cx43)含量、分布的影响。方法采用结扎大鼠左冠状动脉的方法制备心肌缺血模型,分析心电图,应用Western blot检测心室中Cx43表达量的变化,电镜观察心肌细胞闰盘结构变化。结果心电图显示,西尼地平能明显缩短冠脉结扎导致的QRS和QT间期延长(P<0.05)。West-ern blot结果显示结扎组Cx43含量明显降低(P<0.05),而西尼地平可上调Cx43表达(P<0.05)。电镜观察显示西尼地平可恢复缺血心肌组织闰盘缝隙连接的结构分布。结论西尼地平可提高缺血心肌组织Cx43的表达,降低心律失常的发生,对缺血心肌具有保护作用。

关键词：西尼地平缝隙连接蛋白43 心肌缺血

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鼠抗人CD20单克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第5期25卷 454-456页

作者：包红霞吴春铃李淑珍唐晓波褚晓杰王爽张家宁朱大岭哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室哈尔滨医科大学黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药物与内源性物质代谢省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠... 详细信息

目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠制备(mAb),用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot、免疫荧光鉴定其特异性及免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。结果:CD20-GST和CD20-His蛋白在大肠杆菌中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的CD20蛋白,经细胞融合得到1株稳定分泌CD20抗体的杂交瘤细胞株,Western blot和免疫组化显示抗CD20mAb与CD20蛋白具有良好的反应性。结论:成功制备高纯度CD20蛋白并以此为抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的鼠mAb的杂交瘤细胞株BD11F4,为进一步研究CD20对非霍奇金淋巴瘤的诊断治疗提供基础。

关键词： CD20 原核表达融合蛋白抗体制备

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兔抗人羧酸酯酶1多克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第6期25卷 516-518页

作者：朱晓美李淑珍吴春铃包红霞朱大岭唐晓波哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学药学院生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的:制备兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体(pAb),并对抗体进行特性鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CES1(即CES1-GST)和pET-32a-CES1(即CES1-His)。CES1-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb,辛酸-硫酸铵... 详细信息

目的:制备兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体(pAb),并对抗体进行特性鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CES1(即CES1-GST)和pET-32a-CES1(即CES1-His)。CES1-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb,辛酸-硫酸铵法纯化抗体,采用Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性。结果:CES1-GST和CES1-His融合蛋白均在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达。兔抗人CES1pAb效价为1∶64000。Western blot鉴定表明,该抗体可识别重组人CES1蛋白,也可特异地识别人肝微粒体中的CES1亚基。免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性识别正常肝组织中的CES1蛋白。结论:成功地制备了兔抗人CES1pAb,该抗体可应用于ELISA、Western blot、免疫组化等实验,为进一步研究CES1的功能提供了特异性检测工具。

关键词： CES1 重组蛋白多克隆抗体

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红外荧光标记蛋白检测方法的优化

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哈尔滨医科大学学报 2009年第2期43卷 111-113,117页

作者：王莹张勇张容姬王玉平张莹陈艳艳吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室省部共建国家重点实验室培育基地-黑龙江省生物医药工程重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的应用Odyssey双色红外荧光扫描成像系统定量检测蛋白质,通过对免疫印迹中转印膜和封闭液的筛选及抗体双标记的应用,优化红外荧光标记的蛋白检测方法。方法①差速离心法提取大鼠心肌组织膜蛋白,在转膜和封闭过程中比较了4组方案,通过... 详细信息

目的应用Odyssey双色红外荧光扫描成像系统定量检测蛋白质,通过对免疫印迹中转印膜和封闭液的筛选及抗体双标记的应用,优化红外荧光标记的蛋白检测方法。方法①差速离心法提取大鼠心肌组织膜蛋白,在转膜和封闭过程中比较了4组方案,通过对不同方案蛋白转印效率和背景噪音强度的差异比较,筛选最佳转印膜和封闭液;②运用抗体双标记的方法来研究不同种或不同形式蛋白在同一泳道的检测情况。结果①PVDF膜和脱脂奶粉封闭液结合应用,蛋白显现更清晰;②双重标记间隙连接蛋白43,同时检测到该蛋白两种形式。结论VDF膜、脱脂奶粉封闭液及抗体双标记的使用可以取得更好的红外荧光标记的蛋白检测结果。

关键词：间隙连接蛋白43 免疫印迹 Odyssey双色红外荧光扫描成像系统双标记

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三氧化二砷对心肌细胞的毒性及其机制的探讨

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哈尔滨医科大学学报 2009年第3期43卷 215-217,221页

作者：柴丽敏赵晓燕吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室黑龙江哈尔滨 150081

目的探讨三氧化二砷(As_2O_3)对H9c2心肌细胞株凋亡的诱导及其机制.方法 H9c2细胞培养,不同浓度As_2O_3干预后,采用MTT、AO/EB染色法、CaspACE检测系统观察细胞存活率、形态并检测凋亡.结果 As_2O_3(2～10 μmol/L)使H9c2心肌细胞株活... 详细信息

目的探讨三氧化二砷(As_2O_3)对H9c2心肌细胞株凋亡的诱导及其机制.方法 H9c2细胞培养,不同浓度As_2O_3干预后,采用MTT、AO/EB染色法、CaspACE检测系统观察细胞存活率、形态并检测凋亡.结果 As_2O_3(2～10 μmol/L)使H9c2心肌细胞株活力下降;AO/EB染色法观察可见细胞凋亡的特征形态;Caspase-3阻断剂AcDEVD-CHO可以阻断As_2O_3诱导的凋亡.结论 As_2O_3诱导的H9c2心肌细胞株凋亡,Caspase-3的激活是其所致凋亡的机制之一.

关键词：三氧化二砷细胞凋亡 Caspase-3

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染色体领域研究进展及意义

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国际遗传学杂志 2009年第6期32卷 416-420页

作者：李春香张丽秋关荣伟白静傅松滨哈尔滨医科大学医学遗传学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室

染色体在间期细胞核中高度有序地组织形成特定区域,称为染色体领域。间期核中染色体领域的排布特征不仅与细胞核功能相关而且与许多细胞学过程相关。本文综述了染色体领域的研究进展,尤其是染色体动力学,同时本文也涉及染色体领域的表... 详细信息

染色体在间期细胞核中高度有序地组织形成特定区域,称为染色体领域。间期核中染色体领域的排布特征不仅与细胞核功能相关而且与许多细胞学过程相关。本文综述了染色体领域的研究进展,尤其是染色体动力学,同时本文也涉及染色体领域的表遗传学研究。

关键词：染色体领域基因组地理学表观遗传学

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脂微球前列腺素E1对大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤的保护作用和机制

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中华临床医师杂志（电子版） 2009年第10期3卷 49-52页

作者：孙敏李鸿珠王丽岩杨狄郭津田野徐长庆黑龙江省医院肾内科哈尔滨150010 哈尔滨医科大学病理生理教研室黑龙江生物医药工程重点实验室

目的观察脂微球前列腺素E1(凯时)对大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法Wistar大鼠24只,随机分成正常对照组、缺血/再灌注损伤组和凯时保护组。利用Langendorff灌流装置复制大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型。观... 详细信息

目的观察脂微球前列腺素E1(凯时)对大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法Wistar大鼠24只,随机分成正常对照组、缺血/再灌注损伤组和凯时保护组。利用Langendorff灌流装置复制大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型。观察指标:冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,心肌匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,心肌超微结构,HE染色,TUNEL染色及免疫组化等。结果凯时(10μg/L)可使心肌缺血/再灌注损伤所致的LDH释放显著降低,心肌超微结构损伤减轻,SOD活性升高,MDA含量降低;同时使细胞凋亡减少,Bcl-2表达增加,Bax和Caspase-3表达减少。结论凯时能显著减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤,其机制可能与凯时具有抗氧化、清除自由基和抗细胞凋亡的作用有关。

关键词：前列地尔心肌再灌注损伤活性氧细胞凋亡疾病模型动物

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抗肿瘤药物槐定碱对心脏毒性的研究

抗肿瘤药物槐定碱对心脏毒性的研究

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2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：谷东方李宝馨杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地

目的:许多具有抗心律失常作用的药物通过抑制HERG通道延长APD发挥作用,但过度抑制可引起LQT导致致命性心律失常Tdp,因此HERG通道是评价药物安全性的重要靶点。本研究通过抗肿瘤药物槐定碱对HERG钾通道电生理、动力学及蛋白转运表达的影... 详细信息

目的:许多具有抗心律失常作用的药物通过抑制HERG通道延长APD发挥作用,但过度抑制可引起LQT导致致命性心律失常Tdp,因此HERG通道是评价药物安全性的重要靶点。本研究通过抗肿瘤药物槐定碱对HERG钾通道电生理、动力学及蛋白转运表达的影响,发现其发挥抗心律失常作用的分子机制,进而探讨其对心脏的毒性。方法:（1）采用全细胞膜片钳技术在稳定的表达HERG基因的HEK293细胞中,研究槐定碱对HERG电流和HERG通道动力学的影响;（2）采用Western blot和细胞免疫荧光染色等分子生物学实验技术,研究槐定碱对HERG通道蛋白表达的影响。结果:（1）槐定碱浓度依赖性地抑制HERG时间依赖性电流(I)及HERG尾电流(I)。在0mV,10,30,100和300μmol/L槐定碱对最大尾电流的抑制率分别为5.4±2.3%（P>0.05）,16.3±2.6%（P>0.05）,29.3±2.1%（P>0.05）和41.9±2.0%（P<0.01）,槐定碱的IC大于300μmol/L。（2）300μmol/L槐果碱使HERG通道稳态激活曲线左移,V显著性变化（给药前,-17.2±0.6 mV;给药后,-22.7±0.9 mV;P<0.05）。（3）300μmol/L槐定碱没有显著性意义改变稳态失活特性（P>0.05）。（4）在-30 mV～+30 mV电压下,300μmol/L槐定碱都使瞬时失活时间常数明显减小,失活速度加快。-30 mV下,给药前τ=14.2±0.5 ms,给药后τ=9.3±0.3 ms（P<0.001）。（5）在-60 mV～-20 mV电压下,300μmol/L槐定碱都使去活化时间常数明显减小,去活化速度加快。-60 mV下,给药前τ=4.0±0.3 ms,给药后τ=2.3±0.1 ms（P<0.01）。（6）槐定碱（30,100和300μmol/L）处理48 h后,对HERG通道蛋白表达没有影响（P>0.05）。结论:槐定碱对HERG通道的抑制作用是其发挥抗心律失常作用之一;槐定碱与HERG通道开放/失活状态都能结和,但对开放状态亲和力较强,可引起LQT,有发生心脏毒性的危险;槐定碱不通过HERG通道蛋白转运障碍而影响药物的使用安全。

关键词：槐定碱时间常数心脏毒性抗肿瘤药物

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