检索结果-内蒙古大学图书馆

外源性组织型纤溶酶原激活物信号肽突变体增强蛋白质在哺乳细胞中的表达及分泌

国际免疫学杂志 2010年第5期33卷 403-405,414页

作者：王甲业陈文江李妍魏国超程德春凌虹哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省病原生物学重点实验室 150081 大庆医学高等专科学校临床医学部外科教研室 163312

目的比较不同tPA信号肽突变体对目的蛋白表达和分泌水平的影响,优化并筛选通用性外源信号肽序列.方法通过定点突变技术将人类组织型纤溶酶原激活物（tPA）的信号肽第22位氨基酸由脯氨酸（P）突变为丙氨酸（tPA22P/A）或甘氨酸（tPA22... 详细信息

目的比较不同tPA信号肽突变体对目的蛋白表达和分泌水平的影响,优化并筛选通用性外源信号肽序列.方法通过定点突变技术将人类组织型纤溶酶原激活物（tPA）的信号肽第22位氨基酸由脯氨酸（P）突变为丙氨酸（tPA22P/A）或甘氨酸（tPA22P/G）,并将突变前后的3种信号肽序列分别插入HIV-1 p24基因的N末端,构建不同的p24蛋白表达载体,这些重组表达载体体外瞬时转染人胚肾HEK293T细胞,转染72 h后,通过SDS-PAGE与western blot检测并比较各组培养上清和细胞中p24蛋白的表达水平.结果成功构建了3个p24蛋白的真核表达载体***、***22P/A和***22P/G,经序列测定证实基因序列和方向与预期相符;重组载体转染293T细胞72 h后均检测到分泌性p24的表达.与***组相比,***22P/A转染组培养上清中和细胞内p24蛋白表达水平分别提高62%和29%,***22P/G转染组分别提高8%和6%.结论 tPA信号肽22位由脯氨酸突变为丙氨酸或甘氨酸,这就提高了目的蛋白的表达和分泌水平,为优化外源蛋白在哺乳细胞中的表达和分泌提供了实验基础.

关键词：组织型纤溶酶原激活物信号肽哺乳细胞

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B组柯萨奇病毒对心肌细胞感染模式的研究

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徐州医学院学报 2010年第3期30卷 155-160页

作者：张中海张琦闫长栋钟照华徐州医学院生理学教研室江苏徐州221004 徐州医学院实验动物中心哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的观察B组柯萨奇病毒(Coxsackie virus B,CVB)在原代心肌细胞中的感染特点,从而研究CVB对心肌细胞的致病机制。方法原代培养Balb/c乳鼠心肌细胞,并获得纯化的心肌细胞。使用B组柯萨奇病毒嗜心肌毒株3型(CVB3m)攻击原代心肌细胞,观察... 详细信息

目的观察B组柯萨奇病毒(Coxsackie virus B,CVB)在原代心肌细胞中的感染特点,从而研究CVB对心肌细胞的致病机制。方法原代培养Balb/c乳鼠心肌细胞,并获得纯化的心肌细胞。使用B组柯萨奇病毒嗜心肌毒株3型(CVB3m)攻击原代心肌细胞,观察病毒感染心肌细胞后心肌细胞的细胞病变、超微结构和心肌酶的变化。结果成功原代培养了Balb/c乳鼠心肌细胞。心肌细胞在病毒感染后,细胞病变(CPE)不明显,与在HeLa等细胞中的典型CPE不同。心肌细胞在CVB3m感染后保持细胞形态和博动超过2周时间。电镜显示心肌细胞结构正常,细胞器数量增加,在心肌细胞胞质中可见晶格样病毒颗粒排列。培养细胞的上清液中心肌酶升高。结论CVB在原代心肌细胞中表现为持续感染,CVB在心肌细胞中的致病机制不同于HeLa细胞。

关键词：心肌细胞 B组柯萨奇病毒 Balb/c乳鼠原代细胞培养

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阿苯达唑联合黄芪对华支睾吸虫感染大鼠肝功能异常的疗效观察

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中国地方病学杂志 2009年第5期28卷 505-508页

作者：刘平舒晶李懿宏文景山崔洪波任欢李殿俊哈尔滨医科大学免疫学教研室 150086 哈尔滨医科大学寄生虫学教研室 150086 哈尔滨医科大学微生物学教研室 150086 哈尔滨医科大学肿瘤研究所 150086

目的观察阿苯达唑联合黄芪对华支睾吸虫感染大鼠肝功能异常的疗效。方法健康成年Wistar大鼠32只，按体质量随机分为对照组、未治疗组、阿苯达唑组和阿苯达唑＋黄芪组,每组8只。未治疗组、阿苯达唑组和阿苯达唑＋黄芪组大鼠给华支睾吸虫... 详细信息

目的观察阿苯达唑联合黄芪对华支睾吸虫感染大鼠肝功能异常的疗效。方法健康成年Wistar大鼠32只，按体质量随机分为对照组、未治疗组、阿苯达唑组和阿苯达唑＋黄芪组,每组8只。未治疗组、阿苯达唑组和阿苯达唑＋黄芪组大鼠给华支睾吸虫囊蚴50个／只灌胃．对照组大鼠给生理盐水灌胃：阿苯达唑组大鼠在感染后10周每日每只给阿苯达唑50mg／kg灌胃，连续5d：阿苯达唑＋黄芪组大鼠在给阿苯达唑的同时腹腔注射黄芪注射液800mg／kg，连续30d。于感染后14周采集血样，检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TBIL）、透明质酸酶（HA）、层粘连蛋白（LN）和Ⅲ型前胶原（PCⅢP）水平。结果大鼠血清ALT和LN水平组间比较，差异有统计学意义（F值分别为31．40、11．82，P〈0．01）。血清ALT和LN水平，未治疗组[（85．50±9．65）U／L、（64．20±4．18）μg／L]、阿苯达唑组[（65．29±7．78）U／L、（58．23±2．55）μg／L]较对照组[（47．88±4．88）U／L、（51．20±4．12）μg／L]明显升高（P〈0．05）；阿苯达唑组和阿苯达唑＋黄芪组[（50．25±9．29）U／L、（53．68±5．63）μg／L]较未治疗组明显下降（P〈0．05），阿苯达唑＋黄芪组下降较阿苯达唑组更明显（P〈0．05）。大鼠血清TBIL、PⅢNP和HA组间比较差异有统计学意义（χ^2值分别是15．309、21．418、19．759，P〈0．01）。血清TBIL、PⅢNP、HA水平，未治疗组（2．400μmol／L、46．220μg／L、310．885μg／L）、阿苯达唑组（1．200μmol／L、36．540μg／L、178．010μg／L）较对照组（0．700μmol／L、26．085μg／L、81．935μg／L）明显升高（P〈0．05）。大鼠血清TBIL水平，阿苯达唑＋黄芪组（0．750μmol／L）较未治疗组明显降低（P〈0．05）；大鼠血清PⅢNP和HA水平，阿苯达唑组和阿苯达唑＋黄芪组（30．470μg／L、100．240μg／L）较未治疗组明显降低（P〈0．05），与阿苯达唑组比较，阿苯达唑＋黄芪组大鼠血清TBIL、PⅢNP和HA水平下降更明显（P〈0．05）。结论大鼠感染华支睾吸虫后肝功能异常，经阿苯达唑联合黄芪治疗后肝功能得到改善，肝纤维化减轻，阿苯达唑联合黄芪治疗效果好于单独应用阿苯达唑治疗。

关键词：华支睾吸虫病大鼠药物疗法肝功能试验

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人腺病毒3型感染对H9c2细胞microRNA表达谱的影响

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国际免疫学杂志 2009年第3期32卷 173-175页

作者：林乐勋赵文然佟雷武帅钦刘慧敏刘惠彬栾天王博马倩倩钟照华哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室

目的研究腺病毒感染对大鼠心肌来源的H9c2细胞microRNA表达谱的影响。方法用人腺病毒3型（Ad3）攻击成层和未成层的H9c2细胞，6h后收获总RNA，基因芯片检测microRNA表达谱。结果比较未成层与成层的H9c2细胞microRNA的表达谱，H9c2细胞... 详细信息

目的研究腺病毒感染对大鼠心肌来源的H9c2细胞microRNA表达谱的影响。方法用人腺病毒3型（Ad3）攻击成层和未成层的H9c2细胞，6h后收获总RNA，基因芯片检测microRNA表达谱。结果比较未成层与成层的H9c2细胞microRNA的表达谱，H9c2细胞成层后有54种microRNA表达显著下调，7种microRNA表达显著上调。与未感染病毒的细胞比较，Ad3感染的未成层H9c2细胞有41种microRNA表达显著下调，12种microRNA表达显著上调。与未感染病毒的细胞比较，Ad3感染成层H9c2细胞后有8种microRNA的表达显著下调，62种microRNA的表达显著上调。结论细胞不同的生长状态及Ad3感染显著改变了H9c2细胞的microRNA表达谱。

关键词：人腺病毒 H9c2细胞 microRNA芯片心肌炎

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人3型腺病毒六邻体蛋白同源建模及其进化轨迹分析

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高等学校化学学报 2009年第8期30卷 1636-1640页

作者：袁晓辉曲章义吴晓敏王迎晨魏凤香张鸿彦刘蕾杨志伟哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室哈尔滨150081 东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室哈尔滨150040

用同源建模方法构建了人3型腺病毒六邻体完整的空间结构,对此结构模型的合理性进行检验,并通过基于多重序列比对的进化轨迹分析发现,不同型别的人腺病毒六邻体型特异性序列主要存在于六邻体的塔区上,结合二级结构分析,预测位于六邻体塔... 详细信息

用同源建模方法构建了人3型腺病毒六邻体完整的空间结构,对此结构模型的合理性进行检验,并通过基于多重序列比对的进化轨迹分析发现,不同型别的人腺病毒六邻体型特异性序列主要存在于六邻体的塔区上,结合二级结构分析,预测位于六邻体塔区表面的几个环区是型特异性中和表位的所在区域.

关键词：同源建模进化轨迹中和表位六邻体

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人腺病毒五邻体基因重组质粒的构建及鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2009年第3期43卷 218-221页

作者：姜海英曲章义张鸿彦王鹏王迎晨哈尔滨医科大学卫生微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的构建腺病毒五邻体基因重组表达质粒。方法通过PCR方法扩增获得腺病毒五邻体基因的完整序列,将此片段定向克隆到pQE30载体的多克隆位点区,筛选重组阳性菌株,提取重组质粒,利用酶切鉴定方法与核酸序列测定验证重组质粒构建的正确性。... 详细信息

目的构建腺病毒五邻体基因重组表达质粒。方法通过PCR方法扩增获得腺病毒五邻体基因的完整序列,将此片段定向克隆到pQE30载体的多克隆位点区,筛选重组阳性菌株,提取重组质粒,利用酶切鉴定方法与核酸序列测定验证重组质粒构建的正确性。结果用PCR法获得了人腺病毒的五邻体基因,将该基因正确地重组到表达质粒pQE30中,构建出腺病毒五邻体基因重组表达质粒pQE30-penton。结论构建腺病毒五邻体基因重组表达质粒pQE30-penton。

关键词：腺病毒五邻体重组质粒序列分析

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医学微生物学教学案例的编写及应用体会

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2009年第4期11卷 399-401页

作者：李玉军付英梅谷鸿喜钟照华张凤民哈尔滨医科大学医学微生物学教研室

随着时代的发展，由老师讲、学生听的传统课堂讲授法已不能适应时代的需求，许多医学院校都在进行各种各样的教学模式改革，其中案例式教学法已开始在各专业被广泛应用。由于医学微生物学的内容与临床感染性疾病密切相关，易于设计和使... 详细信息

随着时代的发展，由老师讲、学生听的传统课堂讲授法已不能适应时代的需求，许多医学院校都在进行各种各样的教学模式改革，其中案例式教学法已开始在各专业被广泛应用。由于医学微生物学的内容与临床感染性疾病密切相关，易于设计和使用案例，因此案例式教学法更适合于微生物学教学，更有利于提高教学质量。现将我们在案例的编写和应用中的一些体会总结如下，期望有助于指导案例教学的应用和提高教学效果。

关键词：案例医学微生物学教学法

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阿是止泻胶囊对甲亢性腹泻大鼠十二指肠黏膜肥大细胞的影响

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哈尔滨医科大学学报 2009年第2期43卷 150-153页

作者：毕长龙张瑛琦翟爱霞成志锋哈尔滨医科大学第四临床医学院内分泌科黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨阿是止泻胶囊对甲状腺功能亢进(甲亢)性腹泻大鼠十二指肠黏膜肥大细胞(MC)的影响。方法制备甲亢性腹泻大鼠模型。运用阿是止泻胶囊低、中、高剂量及黄连素对其干预,采用免疫组化技术测定对照组、模型组、黄连素组、阿是止泻胶... 详细信息

目的探讨阿是止泻胶囊对甲状腺功能亢进(甲亢)性腹泻大鼠十二指肠黏膜肥大细胞(MC)的影响。方法制备甲亢性腹泻大鼠模型。运用阿是止泻胶囊低、中、高剂量及黄连素对其干预,采用免疫组化技术测定对照组、模型组、黄连素组、阿是止泻胶囊低、中、高剂量组大鼠十二指肠黏膜MC数量、脱颗粒比率、面积、周长、等效直径及圆形度。结果①与对照组比较,模型组十二指肠黏膜MC数目、面积、周长、等效直径增大,圆形度变小(P<0.01或P<0.05);②与模型组比较,黄连素组、高剂量组十二指肠黏膜MC数目、面积、周长、等效直径变小,圆形度增大(P<0.01或P<0.05)。结论阿是止泻胶囊能降低十二指肠黏膜MC数目,可能是其治疗甲亢腹泻的机制之一。

关键词：甲状腺功能亢进腹泻阿是止泻胶囊肥大细胞

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FZS中药合剂对细胞凋亡的保护作用研究

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哈尔滨医科大学学报 2009年第4期43卷 320-324页

作者：王建秀王德生段淑荣赵敬堃郭彩玲张凤民哈尔滨医科大学第一临床医学院神经内科黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学基础医学院微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨FZS中药合剂对Aβ25-35、Aβ42、Aβ42寡聚体诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法应用正常细胞进行对照研究,通过测定MTT、LDH和原位末端标记(TUNEL)方法检测细胞凋亡。原子力显微镜观察PC12细胞表面突起的变化。结果MTT在FZS... 详细信息

目的探讨FZS中药合剂对Aβ25-35、Aβ42、Aβ42寡聚体诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法应用正常细胞进行对照研究,通过测定MTT、LDH和原位末端标记(TUNEL)方法检测细胞凋亡。原子力显微镜观察PC12细胞表面突起的变化。结果MTT在FZS组明显增高(P<0.05);LDH、TUNEL凋亡率在FZS组表达明显降低(P<0.05);原子力显微镜观察Aβ致细胞表面突起缩短的现象在FZS组明显改善,差异有显著意义(P<0.05)。结论FZS可以通过降低Aβ的细胞凋亡作用而减少其细胞毒性,FZS中药合剂可能成为Alzheimer病的治疗手段之一。

关键词： β-淀粉样蛋白寡聚体凋亡中药合剂原子力显微镜

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来自同一供者的不同HIV-1感染者体内病毒包膜序列变异性分析

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哈尔滨医科大学学报 2009年第1期43卷 5-8页

作者：张志龙周海舟杜海涛李妍王福祥凌虹哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨市眼科医院黑龙江哈尔滨150010 哈尔滨医科大学第一临床医学院传染科黑龙江哈尔滨150001

目的调查同一供体来源HIV-1病毒包膜序列变异情况,为进一步进行表型特征、病毒感染能力以及抗病毒免疫研究奠定基础。方法从6例同一来源HIV-1感染者外周血单个核细胞中提取DNA,设计跨病毒包膜的保守引物,进行PCR扩增,将扩增产物克隆至... 详细信息

目的调查同一供体来源HIV-1病毒包膜序列变异情况,为进一步进行表型特征、病毒感染能力以及抗病毒免疫研究奠定基础。方法从6例同一来源HIV-1感染者外周血单个核细胞中提取DNA,设计跨病毒包膜的保守引物,进行PCR扩增,将扩增产物克隆至质粒载体,筛选阳性克隆进行序列测定。采用生物信息学方法对其进行系统发育特征以及编码氨基酸的变异性进行了分析。结果共获得6个有完整开放读码框的包膜克隆。在6个克隆中,包膜糖蛋白gp120内变异程度大的区域分别为信号肽区、可变区V1/V2区、恒定区C2区内近V3区部分、V4区和V5区。变异包括点突变、氨基酸插入或缺失等。系统树分析发现所获得病毒克隆与中国分离株BCNB03聚集成一束。结论构建并鉴定了6个HIV-1包膜克隆。同一来源的HIV包膜糖蛋白在不同受者体内发生了较大变异。

关键词： Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜变异性系统发育分析

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