检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2012年第1期25卷 32-35页

作者：王蕴红张乾英朱重阳李鑫张军重庆医科大学分子医学及肿瘤学研究中心重庆400016 重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016

目的构建人FBP17基因重组真核表达质粒,并检测其在人正常肝细胞LO2中的表达及对细胞存活率的影响。方法用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pEGFP-C1-FBP17质粒,胶回收FBP17基因片段,与p3XFLAG-CMV-10载体连接,构建重组真核表达质粒p3XFLAG-CMV-10/F... 详细信息

目的构建人FBP17基因重组真核表达质粒,并检测其在人正常肝细胞LO2中的表达及对细胞存活率的影响。方法用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pEGFP-C1-FBP17质粒,胶回收FBP17基因片段,与p3XFLAG-CMV-10载体连接,构建重组真核表达质粒p3XFLAG-CMV-10/FBP17,LipofectamineTM法转染人正常肝细胞LO2,RT-PCR和Western blot法检测转染细胞中FBP17基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,XTT法检测其对转染细胞增殖的影响。结果重组表达质粒p3XFLAG-CMV-10/FBP17经双酶切及测序证实构建正确;转染该重组质粒的LO2细胞FBP17基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显增高,且该质粒转染对细胞存活率无影响。结论成功构建了FBP17基因重组真核表达质粒,其可在LO2细胞中表达,且对细胞的存活率无影响,为进一步研究FBP17相互作用蛋白及其功能奠定了基础。

关键词： FBP17基因 LO2细胞细胞骨架

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Feridex及Resovist对神经干细胞生物学特性影响的实验研究

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哈尔滨医科大学学报 2012年第4期46卷 336-339页

作者：王爽赵裕光闫晓波王丽华哈尔滨医科大学附属第二医院神经科哈尔滨医科大学细胞生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的研究超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxides,SPIOs)Feridex及Resovist对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)生物学特性的影响。方法 NSCs培养及鉴定;使用Feridex及Resovist制备磁标记NSCs;利用免疫细胞化学、透射电镜和Prussian blue染色等方法对磁标记NSCs的生长、分化等生物学特性进行研究。结果 Feridex及Resovist分别与NSCs共同孵育后,透射电镜及Prussian blue染色显示胞浆中含有铁颗粒,SPIOs也可以随细胞的分裂增殖而传到子代细胞中。随Feridex及Resovist浓度的增高(2.8μg/mL～16.8μg/mL),Feridex及Resovist对NSCs存活、分化能力的影响无显著性差异(P>0.05)。当Feridex及Resovist的浓度大于22.4μg/mL时,SPIOs影响其存活和分化(P<0.05),在同一浓度条件下,Feridex和Resovist对NSCs的影响无显著性差异(P>0.05)。结论低浓度(<22.4μg/mL)的Feridex及Resovist对NSCs生物学特性无明显影响。

关键词：超顺磁性氧化铁神经干细胞 Feridex Resovist

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miRNA-451表达质粒的构建及对人A549肺癌细胞侵袭转移及凋亡的影响

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重庆医科大学学报 2012年第10期37卷 841-845页

作者：姚莉孙艳查何彭惠民重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:探讨miRNA-451对人A549肺癌细胞侵袭转移及凋亡的影响。方法:Hsa-miRNA-451序列通过miRBase数据库查找,根据此序列设计出2条寡核苷酸片段,将目的基因经过退火处理后克隆至真核表达载体pGenesil-1.1质粒中,从而构建成为miRNA-451真... 详细信息

目的:探讨miRNA-451对人A549肺癌细胞侵袭转移及凋亡的影响。方法:Hsa-miRNA-451序列通过miRBase数据库查找,根据此序列设计出2条寡核苷酸片段,将目的基因经过退火处理后克隆至真核表达载体pGenesil-1.1质粒中,从而构建成为miRNA-451真核表达载体(pGenesil-1.1-miRNA-451质粒)。将pGenesil-1.1-miRNA-451及pGenesil-1.1-control质粒分别转染人A549肺癌细胞,经过G418的筛选,建立pGenesil-1.1-miRNA-451及pGenesil-1.1-control稳定表达的细胞株。流式细胞术分析检测细胞凋亡的情况;Transwell小室检测miRNA-451对细胞侵袭能力的影响;细胞划痕实验检测细胞的迁移情况。结果:经测序证实miRNA-451真核表达质粒构建成功,与未处理的人A549肺癌细胞和稳定表达pGenesil-1.1-control的细胞相比,稳定表达了pGenesil-1-miRNA-451的人A549肺癌细胞的侵袭和迁移能力均明显受到抑制影响,而细胞凋亡无明显变化(P>0.05)。结论:miRNA-451对人A549肺癌细胞侵袭转移具有显著的抑制作用,但对细胞凋亡作用不明显。

关键词：肺癌 miRNA-451 侵袭转移凋亡

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乳腺癌前病变组织原代成纤维细胞生物学特征初步研究

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第三军医大学学报 2012年第1期34卷 16-19页

作者：孙艳彭琼乐王黎阳赵浏阳袁泉李俊柳满然重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室 400016 基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016

目的比较乳腺导管不典型增生成纤维细胞(atypical intraductal hyperplasia fibroblasts,AFs)与正常乳腺成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)、乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)在生物学特征上的差异。方法采用Ⅰ型胶原酶法分离并培养AFs、NFs和CAFs,免疫细胞荧光化学检测其粘连蛋白(fibronectin,FN)表达以鉴定细胞纯度。比较3种细胞的细胞生长曲线、细胞周期和周期蛋白cyclin D1、p21waf1及p53的变化。结果获得并鉴定了NFs、AFs、CAFs;其生长速度依次增加(P<0.05),细胞周期S期百分比(8.24±2.47)、(16.94±4.77)、(33.31±7.90)依次增大(P<0.05);与NFs相比,AFs周期蛋白cyclin D1表达增加(P<0.05),p21waf1和p53蛋白表达降低(P<0.05);与CAFs相比,AFs的周期蛋白cyclin D1没有升高(P<0.05),p21waf1蛋白和p53蛋白表达更强(P<0.05)。结论 AFs相对于NFs和CAFs,细胞生长增殖具有特异性,这种变化提示乳腺肿瘤的癌前病变阶段AFs可能是NFs逐步向CAFs转变的过渡阶段。

关键词：乳腺癌微环境成纤维细胞细胞周期

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JNK在小鼠毛囊周期中的动态表达

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第三军医大学学报 2012年第22期34卷 2274-2277页

作者：王瑞敏星懿展郭海英何龙杨恬连小华查何彭惠民重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400030

目的研究JNK在生后小鼠背皮毛囊周期中的表达规律及探讨其对毛囊周期的调控作用。方法选择生后不同时期(1、7、14、16、21、31 d)C57BL/6J小鼠54只,采用RT-PCR技术,检测JNK mRNA在小鼠背皮毛囊周期中的表达情况;采用Western blot和免疫... 详细信息

目的研究JNK在生后小鼠背皮毛囊周期中的表达规律及探讨其对毛囊周期的调控作用。方法选择生后不同时期(1、7、14、16、21、31 d)C57BL/6J小鼠54只,采用RT-PCR技术,检测JNK mRNA在小鼠背皮毛囊周期中的表达情况;采用Western blot和免疫组化技术,进一步检测JNK蛋白在毛囊周期中的表达规律。结果 RT-PCR检测结果表明,在毛囊周期中,JNK1在生长早期(生后7、31 d)表达最强,退化期(生后16 d)和静止期(生后21 d)维持较弱的表达;JNK2在各时相点均有中等强度表达。单因素方差分析显示,JNK1的表达水平在生长早期(0.99±0.02)与静止期(0.30±0.01)间存在显著差异(P<0.05),JNK2在生长早期(0.77±0.01)与退化期(0.97±0.03)间存在显著差异(P<0.05)。Western blot与RT-PCR检测结果一致。免疫组化结果显示,在毛囊生长期,JNK主要表达于毛母质和外根鞘;进入退化期,JNK表达于外根鞘和上皮索;静止期毛囊中无表达。结论 JNK在毛囊周期中呈动态表达模式,生长期JNK可能通过影响毛母质细胞的增殖和/或分化来调节毛囊生长;退化期JNK可能涉及毛囊细胞的凋亡过程。

关键词： JNK 毛囊毛囊周期小鼠表达

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表达红色荧光蛋白重组柯萨奇病毒B组3型基因组稳定性分析

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微生物与感染 2012年第1期7卷 28-36页

作者：赵文然钟学宽张淑娟沃晓嫚张中海王博钟照华哈尔滨医科大学细胞生物学教研室哈尔滨150086 哈尔滨医科大学地方病防治研究中心哈尔滨150086 哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨150086

本文旨在分析含红色荧光蛋白mCherry基因的重组柯萨奇病毒B组3型(CVB3)基因组的稳定性。用重组质粒pCVB3-mCherry转染HeLa细胞,观察细胞病变和mCherry的表达。收获病毒后,用噬斑形成实验纯化病毒并测定病毒毒力。将重组病毒CVB3-mCherry... 详细信息

本文旨在分析含红色荧光蛋白mCherry基因的重组柯萨奇病毒B组3型(CVB3)基因组的稳定性。用重组质粒pCVB3-mCherry转染HeLa细胞,观察细胞病变和mCherry的表达。收获病毒后,用噬斑形成实验纯化病毒并测定病毒毒力。将重组病毒CVB3-mCherry在HeLa细胞中连续传代,提取第2～6代重组病毒总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出报告基因mCherry及CVB3部分序列,进行测序分析。结果表明,pCVB3-mCherry转染的HeLa细胞出现细胞病变并表达红色荧光蛋白mCherry;从第2代开始,CVB3-mCherry出现报告基因mCherry及部分CVBVP4基因序列丢失,基因序列丢失导致病毒开放读码框架移位。本研究表明,mCherry基因序列的插入导致CVB3基因组不稳定。随着病毒的传代逐渐丢失插入的报告基因mCherry及CVB3基因组的部分序列,病毒读码框架移位,产生致死性突变株。因此,应用CVB3-mCherry时,病毒的传代次数不超过2代,否则应重新从重组质粒中收获病毒,并对每代重组病毒进行纯化和毒力测定。

关键词：柯萨奇病毒B组3型红色荧光蛋白 mCherry 基因重组

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Ad—XBP15重组腺病毒对ATDC5细胞周期与凋亡的效应研究

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医学分子生物学杂志 2012年第5期9卷 326-332页

作者：刘艳娜周菁华张鹏韩晓凤郭风劲重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆市400016 重庆医科大学发育生物学与模式动物平台重庆市400016

目的构建重组人剪接型X盒结合蛋白1（X—boxbindingprotein1spliced，XBP1S）并探讨其对软骨祖细胞ATDC5周期和凋亡的影响。方法应用pAdEasy“腺病毒载体系统，构建得到XBP1S基因全长的重组穿梭质粒pAdTrack—XBP1S，通过电转法同腺病... 详细信息

目的构建重组人剪接型X盒结合蛋白1（X—boxbindingprotein1spliced，XBP1S）并探讨其对软骨祖细胞ATDC5周期和凋亡的影响。方法应用pAdEasy“腺病毒载体系统，构建得到XBP1S基因全长的重组穿梭质粒pAdTrack—XBP1S，通过电转法同腺病毒骨架质粒pAdEasy—1进行同源重组，获得重组腺病毒***1S。随后在HEK-93细胞中包装并扩增重组腺病毒颗粒Ad—XBP1S。用直接PCR法鉴定重组腺病毒。体外感染软骨祖细胞ATDC5，观察绿色荧光蛋白（GFP）感染效率，并应用流式细胞仪（FCM）分别在加入毒胡萝卜素（tunicamycin，TM）和不加入TM的条件下，检测重组腺病毒Ad—XBP1S对ATDC5细胞周期和凋亡的影响。结果酶切鉴定和PCR证实成功构建了重组腺病毒质粒***1S。FCM检测结果表明，在ERS条件下，Ad—XBP1S实验组ATDC5细胞G，（60．70％）期细胞比例低于TM（87．78％）、Ad。GFP对照组（85．24％）（P〈0．05），Ad—XBP1S实验组ATDC5细胞S期（26．64％）高于TM（6．69％）、Ad—GFP对照组（7．35％）（P〈0．05）；TM刺激诱导ERS条件下，感染Ad—XBP1S腺病毒上清后，ATDC5细胞的凋亡率为7．81％，与TM（33．32％）、Ad—GFP对照组（25．95％）比较，差异具有显著性（P〈0．05）。结论含XBP1S基因的重组腺病毒感染ATDC5细胞后，可加速ATDC5细胞周期的转化并抑制其凋亡。为后续研究XBP1S生物学功能奠定了基础。

关键词： X盒结合蛋白1 重组腺病毒 ATDC5细胞细胞凋亡增殖

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IRE1α上调人骨肿瘤细胞XBP1启动子转录活性的研究

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医学分子生物学杂志 2012年第3期9卷 171-177页

作者：李祥柱赵文君刘艳娜周菁华郭风劲重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆市400016 重庆医科大学发育生物学与模式动物平台重庆市400016

目的研究内质网跨膜蛋白肌醇酶1α（inositol-requiring enzyme 1α，IRE1α）对其下游转录因子XBP1启动子转录活性的影响。方法在成功构建人IREla基因全长重组质粒的基础上，设计合成并构建靶向IRE1α基因的siRNA干扰载体（pS1；pS2）... 详细信息

目的研究内质网跨膜蛋白肌醇酶1α（inositol-requiring enzyme 1α，IRE1α）对其下游转录因子XBP1启动子转录活性的影响。方法在成功构建人IREla基因全长重组质粒的基础上，设计合成并构建靶向IRE1α基因的siRNA干扰载体（pS1；pS2）；采用巢式PCR扩增XBP1启动子，插入到***载体，构建携带XBP1启动子的报告基因重组质粒pGL3-XBP1。分别将siIRE1α干扰质粒与pGL3-XBPl报告基因重组质粒共转染人SW1353细胞和Saos-2细胞中，48h后采用双荧光报告系统检测IRE1α对XBP1启动子转录活性的调控作用。结果酶切及测序结果证实siRNA1干扰质粒和XBPl启动子真核表达载体均构建成功，双荧光报告系统检测显示SW1353细胞和Saos-2细胞中，直接载体pcDNA3．15（-）IRE1α与pGL3-XBP1共转实验组的荧光素酶活性明显高于其他实验组（P〈0．5），并随着IRE1α转染剂量的增加逐渐达到饱和；而silRE1α与pGL3-XBP1共转实验组的荧光素酶活性明显降低。免疫印迹结果显示，过表达IRE1α明显上调剪接型XBPlS蛋白的表达。结论人恶性骨肿瘤细胞中，过表达IRE1α明显上调XBP1启动子的转录与表达，并能有效促进XBPIU剪切生成XBPIU；通过siRNA方法抑制IRE1α后，XBP1启动子的转录与表达受到抑制。本实验为进一步研究骨肿瘤细胞中IRE1α调控XBP1启动子转录与剪接的分子机制奠定基础，为临床骨肿瘤的诊断与治疗提供一定的实验依据。

关键词： IRE1α XBP1启动子转录活性骨肿瘤

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Ad-XBP1S重组腺病毒对ATDC5细胞周期与凋亡的效应

Ad-XBP1S重组腺病毒对ATDC5细胞周期与凋亡的效应

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全国生物遗传多样性高峰论坛

作者：刘艳娜周菁华张鹏韩晓凤郭风劲重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆医科大学发育生物学与模式动物平台

应用pAdEasy腺病毒载体系统,构建得到XBP1S基因全长的重组穿梭质粒pAdTrack-XBP1S,通过电转法同腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,获得重组腺病毒pAd-XBP1S。随后在HEK-293细胞中包装并扩增重组腺病毒颗粒Ad-XBP1S。用直接PCR法鉴... 详细信息

应用pAdEasy腺病毒载体系统,构建得到XBP1S基因全长的重组穿梭质粒pAdTrack-XBP1S,通过电转法同腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,获得重组腺病毒pAd-XBP1S。随后在HEK-293细胞中包装并扩增重组腺病毒颗粒Ad-XBP1S。用直接PCR法鉴定重组腺病毒。体外感染软骨祖细胞ATDC5,观察绿色荧光蛋白（GFP）感染效率,并应用流式细

关键词：重组腺病毒细胞周期 Ad-XBP1S ATDC5

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靶向IRE1a干扰质粒构建及对ERS时细胞增殖及凋亡的影响

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医学分子生物学杂志 2012年第2期9卷 103-109页

作者：姜蓉刘艳娜周菁华刘平郭风劲重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆市400016 重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆市400016 重庆医科大学发育生物学与模式动物平台重庆市400016

目的构建靶向人IRE1a的shRNA干扰质粒（pSUPER-IRE1a）并观察其对人HeLa细胞和HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法设计并合成靶向IRE1a基因的两条shRNA，分别克隆至真核表达载体pSUPER构建重组质粒pS1、pS2，依次转染入HeLa细胞和HepG2细... 详细信息

目的构建靶向人IRE1a的shRNA干扰质粒（pSUPER-IRE1a）并观察其对人HeLa细胞和HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法设计并合成靶向IRE1a基因的两条shRNA，分别克隆至真核表达载体pSUPER构建重组质粒pS1、pS2，依次转染入HeLa细胞和HepG2细胞中。采用RT—PCR检测pS1、pS2转染前后IRE1a在HeLa细胞和HepG2细胞中的mRNA水平，免疫印迹检测pS1、pS2转染前后IRE1a蛋白的表达；MTT比色法、BrdU／DAPI双免疫荧光法及流式细胞仪分别检测各重组质粒对HeLa细胞和HepG2细胞增殖及凋亡的影响。结果干扰质粒（pSUPER-IRE1a）能有效抑制HeLa细胞和HepG2细胞中IRE1a基因的表达；成功转染后，细胞处于内质网应激（ER stress）状态时，各实验组细胞增殖率及凋亡率与对照组比较，差异均具有统计学意义P〈0．05）。结论成功构建靶向人IRE1a的shRNA真核表达载体pS1、pS2，有效抑制了HeLa细胞和HepG2细胞中IRE1a的表达；细胞处于ERS状态时，IRE1a-shRNA有效促进HeLa、HepG2两种肿瘤细胞的增殖；抑制HeLa和HepG2细胞的凋亡。

关键词： IRE1a shRNA 细胞增殖细胞凋亡

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