检索结果-内蒙古大学图书馆

中国修复重建外科杂志 2008年第12期22卷 1470-1475页

作者：丰干钧刘浩陈晓禾李秀群赵献峰梁涛四川大学华西医院骨科成都610041 生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室

目的探讨人椎间盘细胞和关节软骨细胞的分子表型差异,分析hBMSCs经TGF-β3和BMP-7联合诱导后能否分化为软骨细胞和髓核细胞。方法取9例自愿捐赠者髂嵴骨髓20～40mL分离培养hBMSCs。取第4代hBMSCs行三维微球培养。根据基础培养基中加入... 详细信息

目的探讨人椎间盘细胞和关节软骨细胞的分子表型差异,分析hBMSCs经TGF-β3和BMP-7联合诱导后能否分化为软骨细胞和髓核细胞。方法取9例自愿捐赠者髂嵴骨髓20～40mL分离培养hBMSCs。取第4代hBMSCs行三维微球培养。根据基础培养基中加入的生长因子不同,实验分成4组,分别为加入10ng/mLTGF-β3组(A组)、200ng/mLBMP-7组(B组)、同时加入两种生长因子组(C组)以及空白对照组(D组)。于培养后21d,行组织学及免疫组织化学观察;于培养后4、21d进行PCR检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅹ型胶原、蛋白多糖和SOX9基因的表达。结果培养后21d,HE染色示A组和C组细胞呈软骨细胞样形态特征,甲苯胺蓝染色及免疫组织化学染色Ⅱ型胶原表达呈阳性。B组和D组细胞形态无明显改变,PCR检测示培养后21d,A、C组SOX9、蛋白多糖、Ⅰ型胶原及Ⅱ型胶原表达较4d时明显增加(P<0.05)。B、D组Ⅰ型胶原表达较4d时明显增加(P<0.05),SOX9、蛋白多糖及Ⅱ型胶原较4d时无明显变化(P>0.05)。其中仅A组Ⅹ型胶原表达呈阳性。结论TGF-β3和BMP-7联合应用能促进hBMSCs分化更接近于椎间盘细胞,可能为椎间盘组织工程提供种子细胞。

关键词：椎间盘组织工程hBMSCs 诱导分化 BMP-7 TGF-β3 软骨形成

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食管黏膜上皮细胞与SIS复合培养及生物学特性研究

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中国修复重建外科杂志 2008年第6期22卷 742-746页

作者：谭波魏人前杨志明李秀群韩平智伟解慧琪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的探讨体外快速培养犬食管黏膜上皮细胞(esophageal mucosa epithelial cells,EMECs)及其与SIS体外复合培养的方法,为组织工程食管研究提供实验依据。方法取2～5周龄幼犬5只,无菌获取其食管组织,采用混合酶消化法,分离培养EMECs,于倒... 详细信息

目的探讨体外快速培养犬食管黏膜上皮细胞(esophageal mucosa epithelial cells,EMECs)及其与SIS体外复合培养的方法,为组织工程食管研究提供实验依据。方法取2～5周龄幼犬5只,无菌获取其食管组织,采用混合酶消化法,分离培养EMECs,于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,取第2代细胞培养1～5 d绘制生长曲线并进行细胞表面标志物细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK-19)检测。取第2代EMECs与SIS复合培养4、8 d,行形态学、组织学及扫描电镜观察。结果倒置相差显微镜下EMSCs呈典型铺路石样。CK-19免疫组织化学染色可见细胞胞浆呈阳性染色。MTT法测定第2代细胞在传代培养2 d生长达高峰。EMECs与SIS复合培养4 d,细胞呈多角形,细胞间连接紧密,呈铺路石样排列;SIS表面形成1～2层细胞组成的复层上皮样结构。8 d时,细胞密度增大,SIS表面形成2～3层细胞组成的复层上皮样结构;扫描电镜见细胞在材料上已大量增长,呈层状排列。结论采用混合酶消化法,用含6%FBS的DKSFM培养犬EMECs,方法简便,适合推广应用。SIS与EMECs有良好的相容性,可作为构建组织工程食管的理想支架材料。

关键词：食管黏膜上皮细胞 SIS 复合培养生物学特性犬

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组织工程骨植骨临床应用七年随访结果

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中国修复重建外科杂志 2008年第5期22卷 606-609页

作者：彭鲲项舟杨志明解慧琪伍晓靖黄富国岑石强四川大学华西医院骨科成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室成都610041

目的总结生物衍生组织工程骨植骨临床应用的中期效果。方法2000年12月-2001年6月,采用同种异体骨膜来源的成骨细胞1×106/mL与生物衍生骨支架材料构建组织工程骨,经体外培养3～7d后,植入修复10例骨缺损。男6例,女4例;年龄14～70岁,... 详细信息

目的总结生物衍生组织工程骨植骨临床应用的中期效果。方法2000年12月-2001年6月,采用同种异体骨膜来源的成骨细胞1×106/mL与生物衍生骨支架材料构建组织工程骨,经体外培养3～7d后,植入修复10例骨缺损。男6例,女4例;年龄14～70岁,中位年龄42。其中骨囊性病变2例,陈旧性骨折不愈合1例,新鲜粉碎性骨折伴骨缺损6例,慢性化脓性骨髓炎1例。每例患者植入生物衍生组织工程骨量3～15g,平均7.3g。结果10例患者术后伤口均Ⅰ期愈合。术后获随访7年,除1例于术后1年发生植骨松动外露取出,以及1例并发创伤后肱骨头坏死取出外,其余植骨均在术后3.0～4.5个月达骨性愈合。X线片检查:除1例患者已行肱骨头切除术外,其余均达到骨愈合,骨皮质连续,重塑良好。患肢功能能满足日常生活及工作需要。结论生物衍生组织工程骨具有良好的成骨能力,临床应用中期效果良好,未见明显排斥反应及并发症。

关键词：组织工程骨生物衍生支架材料临床应用中期随访

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角蛋白在血管生成中的作用实验研究

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中国修复重建外科杂志 2008年第10期22卷 1246-1250页

作者：徐永张素珍钟振华解慧琪苏自奋魏于全四川大学生命科学学院成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.肿瘤生物治疗研究室四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室

目的研究角蛋白17(keratin17,K-17)对血管内皮细胞迁移、增殖和管样结构形成的影响,了解K-17在血管生成过程中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)于含10%FBS的DMEM培养液培养过夜,采用脂质... 详细信息

目的研究角蛋白17(keratin17,K-17)对血管内皮细胞迁移、增殖和管样结构形成的影响,了解K-17在血管生成过程中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)于含10%FBS的DMEM培养液培养过夜,采用脂质体转染法向HUVEC中分别加入K-17-小分子干扰RNA(small interfer-ingRNA,siRNA)-转染试剂(Lipofectamine2000)混合液(实验组)、siRNA-转染试剂混合液(阴性对照组),使siRNA终浓度为50nmol/L;对照组加相同体积仅含载体(脂质体Lipofectamine2000)的培养基,采用RT-PCR和Westernblot法检测K-17-siRNA沉默效果。于培养后36h采用细胞计数法检测细胞增殖能力;培养后30h,分别采用24孔板Millicell小室检测细胞迁移能力以及胶原纤维凝胶实验法检测细胞分化成管能力。另取未经siRNA处理的HUVEC分别在含10%FBS的培养基(A组)、含2%FBS的培养基(B组)和含2%FBS及10ng/mLbFGF的培养基(C组)中培养24h,检测HUVECK-17的表达。结果实验组K-17-siRNA作用于HUVEC30h后,RT-PCR检测示细胞内K-17mRNA的表达为0.09±0.01,较阴性对照组0.35±0.07和对照组0.34±0.06均降低了约74%(P<0.01);Westernblot检测示实验组K-17-siRNA作用于HUVEC30h后,细胞内K-17蛋白表达为0.19±0.01,较阴性对照组0.52±0.01和对照组0.55±0.02分别降低了63%和65%(P<0.01);阴性对照组和对照组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。K-17-siRNA作用HUVEC36h后,实验组细胞增殖能力与阴性对照组和对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。HUVEC转染K-17-siRNA30h后,实验组HUVEC24h穿过Millicell小室上室膜进入下室的细胞数为(3719.0±319.0)个,明显低于阴性对照组(7356.3±795.7)个和对照组(7437.5±212.0)个,差异有统计学意义(P<0.01),阴性对照组和对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。实验组、阴性对照组和对照组HUVEC24h分化形成的管数分别为(1.1±0.5)、(3.6±0.5)和(3.2±0.6)管/视野,实验组与阴性对照组、对照组间比较差异均有统计学意义(P<0.01),阴性对照组和对照组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。A、B、C组HUVECK-17的表达分别为0.25±0.02、0.08±0.01和0.72±0.03,3组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论K-17对HUVEC增殖无影响,但增强其迁移能力,有利于血管生成。

关键词：角蛋白17 血管生成人脐静脉内皮细胞迁移增殖

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低氧对胎盘基蜕膜间充质干细胞增殖、凋亡和血管内皮细胞生长因子表达的影响

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生理学报 2008年第6期60卷 783-789页

作者：黄永灿陈晓禾王佳李秀群解慧琪唐莉邓力四川大学华西药学院成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室成都610041

本文旨在探讨生理低氧和无血清培养条件下人胎盘基蜕膜间充质干细胞(placental decidua basalis-mesenchymal stem cells,PDB-MSCs)的生物学特征和细胞因子的表达情况。采用密度梯度离心法培养获得PDB-MSCs,利用MTT法、流式细胞术检测PD... 详细信息

本文旨在探讨生理低氧和无血清培养条件下人胎盘基蜕膜间充质干细胞(placental decidua basalis-mesenchymal stem cells,PDB-MSCs)的生物学特征和细胞因子的表达情况。采用密度梯度离心法培养获得PDB-MSCs,利用MTT法、流式细胞术检测PDB-MSCs在不同氧浓度(20%O2和1%O2)、有无血清(10%FBS和0%FBS)条件下各个时间点(6h、12h、24h、48h、72h、96h)的增殖和凋亡情况,并采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测无血清条件下各个时间点细胞上清液中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量。结果显示,在特定的时间内低氧可以促进PDB-MSCs增殖(P<0.01,n=3),而血清对PDB-MSCs增殖的影响与氧浓度关系密切;同时,在本实验条件下,低氧、无血清分别或联合培养不会导致PDB-MSCs凋亡(P>0.05,n=3);在无血清条件下,24h时低氧组PDB-MSCs表达较高水平的VEGF。以上结果提示,PDB-MSCs可能成为缺血相关组织工程产品种子细胞的一个新来源。

关键词：基蜕膜间充质干细胞低氧增殖凋亡血管内皮细胞生长因子

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肌球蛋白轻链在肌肉再生中作用的体外实验研究

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中国修复重建外科杂志 2008年第6期22卷 753-758页

作者：张素珍解慧琪徐永李秀群邓力陈晓禾邱琳杨志明四川大学生命科学学院成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院肿瘤生物治疗研究室

目的应用不同来源的成肌细胞(myoblast,Mb)研究肌球蛋白轻链(myosin light chain,Myl)在肌肉再生中的作用,为进一步了解Myl的生理功能提供依据。方法3周龄健康雄性C57BL/6小鼠12只。采用酶消化法和Preplate技术分离纯化小鼠眼外肌、膈... 详细信息

目的应用不同来源的成肌细胞(myoblast,Mb)研究肌球蛋白轻链(myosin light chain,Myl)在肌肉再生中的作用,为进一步了解Myl的生理功能提供依据。方法3周龄健康雄性C57BL/6小鼠12只。采用酶消化法和Preplate技术分离纯化小鼠眼外肌、膈肌和腓肠肌Mb(eMb、dMb和gMb),进行传代培养。采用RT-PCR和Western blot法检测第1代细胞Myl的表达,亚甲基蓝法检测细胞增殖能力,倒置相差显微镜观察肌管形成情况。采用浓度为1、2、4、8、16 ng/mL Myl单克隆抗体分别处理3种细胞(实验组),与未处理的细胞比较(对照组),观察细胞增殖能力及肌管形成的变化。结果培养24 h的eMb、dMb和gMb均检测到Myl1、Myl4 mRNA和Myl蛋白表达,且eMb的表达水平显著低于dMb和gMb(P<0.01),dMb和gMb间差异无统计学意义(P>0.05);3种细胞均未检测到Myl2和Myl3 mRNA表达。eMb的增殖速度高于dMb和gMb(P<0.01);eMb和dMb、gMb分别在接种后40 h和16 h出现肌管;第6天eMb肌管数为(137.2±24.5)/视野,显著高于dMb的(47.6±15.5)/视野和gMb的(39.8±5.1)/视野(P<0.01),后两者差异无统计学意义(P>0.05)。Myl抗体作用后,3种细胞实验组各浓度吸光度值均显著高于对照组(P<0.05),表现浓度依赖性;dMb实验组和对照组16 h肌管数分别为(48.2±7.1)/孔和(23.4±4.9)/孔,6 d肌管数分别为(40.6±10.2)/视野和(63.1±6.1)/视野,两组间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论Myl可能通过促使Mb终末分化,负性影响Mb增殖而在肌肉再生中发挥一定作用。

关键词：肌球蛋白轻链成肌细胞增殖肌肉再生体外研究小鼠

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人成纤维细胞稳定转染的方法比较

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四川大学学报（医学版） 2008年第4期39卷 654-657页

作者：芦小燕解慧琪李莉智伟陈晓禾邓力四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室成都610041 四川大学华西药学院药理系

目的采用3种不同的方法将质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞,从中寻找最佳的稳定转染的方法。方法分别采用阳离子聚合物转染、阳离子脂质体转染和电转染方法,将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞... 详细信息

目的采用3种不同的方法将质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞,从中寻找最佳的稳定转染的方法。方法分别采用阳离子聚合物转染、阳离子脂质体转染和电转染方法,将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞。24h后,荧光显微镜下观察EGFP表达,流式细胞术测定瞬时转染率;通过G418筛选得到稳定转染的细胞。结果电转染有最高的瞬时转染效率(56.8%),稳定转染得到的阳性克隆最多,且从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间也最少(约20d);用阳离子聚合物瞬时转染率低(1.7%),稳定筛选同样可以得到阳性大克隆,但是数量很少且从细胞筛选到扩增至阳性大克隆所用的时间也最多(约30d);阳离子脂质体转染效果居中,瞬时转染率为39.9%,从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间约25d。结论用电转染法将质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞是最佳的转染方法。

关键词：人成纤维细胞稳定转染电转染阳离子聚合物转染阳离子脂质体转染

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组织工程的发展与未来

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中国修复重建外科杂志 2008年第2期22卷 228-229页

作者：杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

“组织工程”概念提出至今已有20年了。回顾20年发展进程，在种子细胞、三维支架材料、生物活性因子、组织构建、体内植入等方面已取得很大进展，并有一些临床应用的实例证明组织工程的研究路线是正确的，展现了良好的产业化前景。

关键词：组织工程种子细胞支架材料生物活性因子细胞治疗

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胎盘和骨髓来源的间充质干细胞生物学特性比较

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第29期12卷 5731-5734页

作者：卢遥解慧琪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室四川省成都市610041

学术背景:间充质干细胞主要来源于骨髓,但人骨髓中的间充质干细胞含量极低。近年来,已有具备干/祖细胞特征的间充质细胞自外周血、密质骨、软骨、肌肉等组织中分离出来,这些组织的一个共同特征就是来源于胚胎发育期的中胚层,提示胎盘中... 详细信息

学术背景:间充质干细胞主要来源于骨髓,但人骨髓中的间充质干细胞含量极低。近年来,已有具备干/祖细胞特征的间充质细胞自外周血、密质骨、软骨、肌肉等组织中分离出来,这些组织的一个共同特征就是来源于胚胎发育期的中胚层,提示胎盘中存在间充质干细胞成分。目的:介绍胎盘和骨髓来源的间充质干细胞的分离方法及应用前景,对其生物学特性进行比较。检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库1996-01/2008-2的相关文献,检索词"placenta-derived mes-enchymal stem cells,bonemarrow-derived mesenchymal stemcell,Biological characteristics,Tissue engineering",并限定文章语言种类为English。同时计算机检索万方数据库1999-01/2008-2的相关文献,检索词"胎盘来源的间充质干细胞,骨髓来源的间充质干细胞,生物学特性,组织工程",并限定文章语言种类为中文。共检索到137篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①文章所述内容应与胎盘来源的间充质干细胞或骨髓来源的间充质干细胞研究以及两者生物学特性比较密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:①重复性研究。②Meta分析。文献评价:文献来源主要是对胎盘和骨髓来源的间充质干细胞研究进展做汇总分析。所选用的31篇文献中,8篇为综述,其余均为临床或基础实验研究。资料综合:①目前对于胎盘间充质干细胞的体外分离以Percoll连续密度梯度分离纯化法最为经典,采用此法从组织浸出液中分离获得的间充质干细胞大小均匀,纯度较高。骨髓间充质干细胞的分离方法主要包括贴壁法、密度梯度离心法、细胞表面分子标记分选法。②胎盘间充质干细胞在形态上与骨髓间充质干细胞类似,均为典型的成纤维细胞样,并呈漩涡状生长。胎盘间充质干细胞表达类似于骨髓间充质干细胞的表面标志,如间质细胞标志SH2/CD105、SH3;主要组织相容性复合物HLA-ABC;整合蛋白家族CD49e、CD29;透明质酸盐受体CD44等,不表达造血细胞表面标志CD34、CD45和内皮细胞表面标志vWF、Flk21等,表明胎盘来源的间充质干细胞免疫原性很低,这在移植中具有重要意义。结论:胎盘来源的间充质干细胞具有与骨髓来源的间充质干细胞相似的形态与表面标志,也具有多向分化潜能,并且胎盘取材方便安全,不涉及伦理问题,将成为组织工程干细胞的新来源。

关键词：骨髓间充质干细胞胎盘间充质干细胞生物学特性组织工程综述文献

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IGF-1促原代人胚骨骼肌成肌细胞体外增殖与分化的研究

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中国修复重建外科杂志 2008年第1期22卷 84-87页

作者：岑石强张峻梅黄富国杨志明解慧琪四川大学华西医院骨科成都 610041 成都市第三人民医院检验科四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室

目的为更好地将成肌细胞应用于组织工程构建,探讨IGF-1对原代人胚骨骼肌成肌细胞体外增殖与分化的作用与机制。方法通过核素3H-TdR掺入法测定不同浓度IGF-1(1、2、4、8、16和32ng/mL)作用下成肌细胞的每分钟射线脉冲数(count per minute... 详细信息

目的为更好地将成肌细胞应用于组织工程构建,探讨IGF-1对原代人胚骨骼肌成肌细胞体外增殖与分化的作用与机制。方法通过核素3H-TdR掺入法测定不同浓度IGF-1(1、2、4、8、16和32ng/mL)作用下成肌细胞的每分钟射线脉冲数(count per minute,CPM)值,根据浓度-CPM值量效曲线确定IGF-1促增殖的适宜浓度。在生长培养基中加入该浓度的IGF-1用于实验组细胞,对照组细胞仅接受生长培养基。分别观察实验组与对照组生长曲线,比较两组细胞增殖周期的变化。运用流式细胞技术及核素掺入法测定适宜浓度IGF-1作用下,成肌细胞增殖周期的变化。另选取不同浓度IGF-1(0、5、10、15、20、25、30ng/mL)作用于成肌细胞,观察4d后成肌细胞融合率,通过融合率-IGF-1浓度-量效曲线确定IGF-1促进成肌细胞融合的最佳浓度,并将其用于实验组,而未接受该浓度IGF-1的成肌细胞作为对照组,分别测定两组细胞融合率与磷酸肌酸激酶(creatine kinase,CK)含量并进行比较。结果5ng/mL的IGF-1为促成肌细胞增殖最佳浓度。对照组成肌细胞倍增时间为96h;实验组成肌细胞生长曲线左移,倍增时间缩短为60h。对照组DNA G1、S期与G2M期各亚周期所占时间分别是70.03、25.01与0.96h,实验组为22.66、16.47与20.87h。实验组与对照组成肌细胞CPM峰值出现的时间分别是48h与96h,与生长曲线流式细胞技术测定结果一致。IGF-1促进分化研究显示20ng/mL IGF-1为促成肌细胞分化最佳浓度。实验组成肌细胞融合率较对照组提高30%,CK合成量提高2000mU/mL。结论IGF-1对成肌细胞的增殖与分化均具有促进作用,是通过减少G1期成肌细胞数量,增加S期与G2M期细胞实现的。20ng/mL IGF-1能明显增加成肌细胞融合率CK合成。

关键词：组织工程人成肌细胞 IGF-1 流式细胞术体外培养

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