检索结果-内蒙古大学图书馆

四川大学学报（自然科学版） 2016年第3期53卷 664-670页

作者：许记刚王红宁杨鑫李然姬高升四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室生物资源与生态环境教育部重点实验室“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台成都610064

IBV H52基因组全长27.6kb,分13个1.3～2.9kb的片段扩增H52全长cDNA,额外扩增N-3′片段,并克隆到载体PMD19-T上.利用No see′m技术在每个片段中引入BsaⅠ或BsmBⅠ酶切位点,D1片段中引入沉默突变位点,在5′UTR端和N-3′引入T7启动子,3′UT... 详细信息

IBV H52基因组全长27.6kb,分13个1.3～2.9kb的片段扩增H52全长cDNA,额外扩增N-3′片段,并克隆到载体PMD19-T上.利用No see′m技术在每个片段中引入BsaⅠ或BsmBⅠ酶切位点,D1片段中引入沉默突变位点,在5′UTR端和N-3′引入T7启动子,3′UTR端引入Poly（A）尾.将克隆好的13个片段酶切,纯化,体外无缝连接为全长cDNA.将全长cDNA及N-3′体外转录获得它们的转录体,将转录体共转染BHK-21细胞,48h后收获细胞液,将细胞液接种10日龄SPF鸡胚获得反向遗传株H52-R.在鸡胚中盲传5代后,通过RT-PCR对无义突变位点进行扩增及序列分析,在反向株H52-R中发现引入的无义突变位点.对反向株H52-R的一些生物学特性如HA、EID50等测定发现,H52-R的这些生物学特性与亲本株H52相似.

关键词： IBV H52 反向遗传 H52-R

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多重PCR检测病死鸡中沙门氏菌方法的研究

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四川大学学报（自然科学版） 2015年第1期52卷 163-169页

作者：杨帆王红宁张安云雷昌伟张志坤四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室、生物资源与生态环境教育部重点实验室、“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台成都610064

为了建立能够同时检测病死鸡样品中的沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多重PCR方法.采用煮沸法提取DNA做为模板,选择分别针对沙门氏菌属、鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的特异性基因(invA、fliC、sdfⅠ)设计引物,优化反应体系... 详细信息

为了建立能够同时检测病死鸡样品中的沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多重PCR方法.采用煮沸法提取DNA做为模板,选择分别针对沙门氏菌属、鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的特异性基因(invA、fliC、sdfⅠ)设计引物,优化反应体系和反应参数,建立多重PCR检测方法.应用该方法对国内17家鸡场369份病死鸡样品进行沙门氏菌的检测,检测结果与传统细菌培养法的结果进行比较.结果表明,优化过的多重PCR可同时对沙门氏菌种、属进行鉴定,灵敏度为4.6×102 CFU/mL;多重PCR方法共检测出沙门氏菌34株,其中鸡白痢沙门氏菌21株、肠炎沙门氏菌5株,与传统细菌培养法检测结果的符合率分别为91.2%、90.5%和80.0%.

关键词：多重PCR 沙门氏菌鸡白痢沙门氏菌肠炎沙门氏菌

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三重PCR方法对猪、鸡源细菌中四环素类药物耐药基因的检测

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四川大学学报（自然科学版） 2013年第1期50卷 171-176页

作者：夏青青王红宁张安云四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室生物资源与生态环境教育部重点实验室"985工程"西南资源环境与灾害防治科技创新平台成都610064

针对GenBank上已公开的四环素类耐药基因tetA、tetC、tetM序列进行比对分析,设计特异性扩增引物,建立三重PCR法快速检测方法.结果表明,单重PCR和三重PCR的符合率为100%.应用本检测方法和传统药敏试验方法(药敏纸片法)对412猪、鸡源细菌... 详细信息

针对GenBank上已公开的四环素类耐药基因tetA、tetC、tetM序列进行比对分析,设计特异性扩增引物,建立三重PCR法快速检测方法.结果表明,单重PCR和三重PCR的符合率为100%.应用本检测方法和传统药敏试验方法(药敏纸片法)对412猪、鸡源细菌的四环素耐药基因和表型同时进行检测.PCR检测实验结果显示,在412株待检细菌中,tetA、tetC、tetM的检出率分别为47.57%,38.35%和34.95%.药敏实验结果表明,待测细菌对四环素的耐药率最高,为95%;对多西环素的耐药率次之,为92%;对米诺环素耐药率相对最低,为84%.比较两种方法,发现其检出结果的符合率为88%.说明两种方法具有较高的一致性.本研究建立了一种猪、鸡源细菌四环素类药物耐药基因三重PCR检测方法,并进行了初步应用.

关键词：四环素耐药性 tetA tetC tetM 三重PCR

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鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对IBV DNA疫苗的免疫增强效应研究

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中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 214-218页

作者：张毅王红宁樊汶樵张安云曹海鹏郭自成丁梦蝶四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室/生物资源与生态环境教育部重点实验室/"985工程"西南资源环境与灾害防治科技创新平台四川成都610064

为研究鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)DNA疫苗免疫效果的影响,根据GenBank登录的鸡IL-1β和IL-16序列设计两对引物,采用RT-PCR方法从四川山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆IL-1β和IL-16基因,与真核表达... 详细信息

为研究鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)DNA疫苗免疫效果的影响,根据GenBank登录的鸡IL-1β和IL-16序列设计两对引物,采用RT-PCR方法从四川山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆IL-1β和IL-16基因,与真核表达质粒pcDNA3.1(+)连接构建了pDNAIL-1β和pDNAIL-16。分别将两种重组质粒与IBVDNA联合免疫SPF雏鸡并进行攻毒试验。结果表明,pDNAIL-1β和pDNAIL-16均能促进血清中特异性抗体水平和外周血T淋巴细胞亚群数量的增加(p<0.05),增强IBV DNA疫苗对同型强毒的保护率15%～25%,pDNAIL-1β提升DNA疫苗的抗体水平的时间比pDNAIL-16多7d。试验表明,鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对IBV DNA疫苗的免疫具有增强作用。

关键词：禽传染性支气管炎病毒鸡IL-1β 鸡IL-16 免疫增强作用

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规模化猪场大肠杆菌β-内酰胺类药物耐药性检测及其超广谱β-内酰胺酶调查

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中国预防兽医学报 2011年第10期33卷 776-780页

作者：田国宝王红宁张安云张毅杨鑫徐昌文四川大学生命科学学院/动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室/生物资源与生态环境教育部重点实验室/"985工程"西南资源环境与灾害防治科技创新平台四川成都610064

为阐明我国规模化猪场大肠杆菌(***)对抗菌药物的耐药现状和耐药机制,本研究于2006年2月至2008年12月从19个省市97个规模化猪场分离鉴定602株***,进行了4大类16种抗菌药物耐药性检测和产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的筛选,采用PCR方... 详细信息

为阐明我国规模化猪场大肠杆菌(***)对抗菌药物的耐药现状和耐药机制,本研究于2006年2月至2008年12月从19个省市97个规模化猪场分离鉴定602株***,进行了4大类16种抗菌药物耐药性检测和产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的筛选,采用PCR方法检测了9种常见β-内酰胺酶耐药基因,对产ESLBs菌株进行了脉冲电场凝胶电泳(PFGE)分析。结果显示:***分离株对抗菌药物产生了不同程度的耐药性,602株***中共有57株产ESBLs,产ESBLs菌株普遍耐受第二及第三代头孢药物。分别有35株和20株***为blaCTX-M型和blaSHV型ESBLs,尚未发现blaOXA型和blaKPC型。PFGE结果显示,产ESBLs菌株间同源性低,推测我国猪源***产ESBLs多为零星发生或以质粒介导的形式传播。本研究为了解我国猪源***对β-内酰胺类药物的耐药现状和ESBLs变化趋势提供了实验依据。

关键词：猪大肠杆菌 β-内酰胺类药物 β-内酰胺酶

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2012-2013年蛋鸡J亚群禽白血病流行病学调查

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四川大学学报（自然科学版） 2015年第4期52卷 932-936页

作者：李鑫王红宁杨鑫李然四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室/"985工程"西南资源环境与灾害防治科技创新平台/生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610064

为了解J亚群禽白血病在蛋鸡中的流行情况，采用ELISA试剂盒对2012-2013年采至7个蛋鸡场的1735份泄殖腔拭子和57份疫苗样品进行了P27抗原检测，1512份血清进行了ALV—J亚群抗体的检测．结果显示：（1）此次调查的蛋鸡场均有不同程度的白... 详细信息

为了解J亚群禽白血病在蛋鸡中的流行情况，采用ELISA试剂盒对2012-2013年采至7个蛋鸡场的1735份泄殖腔拭子和57份疫苗样品进行了P27抗原检测，1512份血清进行了ALV—J亚群抗体的检测．结果显示：（1）此次调查的蛋鸡场均有不同程度的白血病病毒感染，其中两个疑似发病的鸡场P27抗原阳性率均较高，分别为9．89％和11．83％；（2）不同代次蛋鸡的AL阳性率均有所差异．祖代、父母代、商品代蛋鸡P27抗原检出率分别为3．16％、6．49％、8．87％，ALV—J抗体检出率分别为3．36％、4．63％、7．13％．商品代蛋鸡的感染情况比父母和祖代种鸡严重，提示存在垂直感染的情况；（3）不同日龄蛋鸡的AL阳性率有明显差异，以产蛋初期和产蛋高峰期阳性检出率较高；（4）AL阳性率在不同品种的蛋鸡中也有差异，尼克粉蛋鸡的P27抗原阳性率最高，海兰褐蛋鸡的ALV—J抗体阳性率最高；（5）57份弱毒疫苗中，有一份检出P27抗原，可能受到白血病病毒的污染．

关键词： J亚群禽白血病蛋鸡流行病学调查

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鸡传染性支气管炎病毒强毒株和弱毒疫苗株的免疫磁珠-多重RT-PCR鉴别方法的建立

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中国家禽 2017年第10期39卷 14-17页

作者：高文倩韩潇潇王红宁四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台生物资源与生态环境教育部重点实验室四川成都610064

利用鸡传染性支气管炎病毒(IBV)多克隆抗体构建的免疫磁珠富集IBV,对Gen Bank中896株IBV S1基因序列及其多变区进行分析,根据IBV强毒株和弱毒疫苗株序列差异设计引物,建立了一种基于免疫磁珠富集IBV后检测S1基因多变区的多重RT-PCR方法... 详细信息

利用鸡传染性支气管炎病毒(IBV)多克隆抗体构建的免疫磁珠富集IBV,对Gen Bank中896株IBV S1基因序列及其多变区进行分析,根据IBV强毒株和弱毒疫苗株序列差异设计引物,建立了一种基于免疫磁珠富集IBV后检测S1基因多变区的多重RT-PCR方法。结果表明:该方法能扩增出强毒株约710 bp的通用片段和约350 bp的特异片段,弱毒疫苗株能扩增出约710 bp的通用片段和约210 bp的特异片段,能鉴别出强毒株和弱毒疫苗株。免疫磁珠富集IBV后比不富集病毒用RT-PCR方法检测敏感性提高100倍。该方法为IBV检测提供了新的技术支持。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒(IBV) 免疫磁珠多重RT-PCR 鉴别

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市售15种猪场消毒剂消毒效果的比较

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畜牧与兽医 2015年第4期47卷 100-103页

作者：雷云峰康润敏曾凯吕学斌陈晓晖四川省畜牧科学研究院四川成都610066 四川大学生命科学学院/动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室/生物资源与生态环境教育部重点实验室/"985工程"西南资源环境与灾害防治科技创新平台四川成都610064

为评价市售的15种消毒剂的消毒效果,采用悬液定量杀菌试验对15种消毒剂的杀灭能力进行实验室评价,从中选择最有效的3种进行喷雾消毒,检测其杀菌率。结果:15种消毒剂中百毒杀S、百胜-30和新大卫均能够在10 min内100%的杀灭大肠杆菌、金... 详细信息

为评价市售的15种消毒剂的消毒效果,采用悬液定量杀菌试验对15种消毒剂的杀灭能力进行实验室评价,从中选择最有效的3种进行喷雾消毒,检测其杀菌率。结果:15种消毒剂中百毒杀S、百胜-30和新大卫均能够在10 min内100%的杀灭大肠杆菌、金黄色葡萄球菌,而作用10 min对枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢的杀灭率分别能达到82.9%,56.8%和59.3%,喷雾消毒后30 min和48 h的杀菌率分别为81.5%,65.1%,80.9%和54.2%,43.5%,55.2%。表明:15种消毒剂中百毒杀S、百胜-30和新大卫的杀灭能力最强,现场消毒后以百胜-30和百毒杀S的杀菌和持续的效果最好。

关键词：猪场消毒剂杀菌率

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鸡源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药性分析及相关耐药突变研究

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中国畜牧兽医文摘 2015年第3期31卷 202-203页

作者：邓春朋王红宁雷昌伟张安云张冬冬四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室生物资源与生态环境教育部重点实验室“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台

本试验采用药敏纸片法对2014年从13个不同规模化鸡场分离的135株鸡源大肠杆菌进行常用12种抗菌药物敏感性试验,结果表明,头孢西丁和阿莫西林/棒酸耐药率较低,分别为17.8%、18.5%,而氟喹诺酮类的环丙沙星、诺氟沙星和左氧氟沙星的耐药率... 详细信息

本试验采用药敏纸片法对2014年从13个不同规模化鸡场分离的135株鸡源大肠杆菌进行常用12种抗菌药物敏感性试验,结果表明,头孢西丁和阿莫西林/棒酸耐药率较低,分别为17.8%、18.5%,而氟喹诺酮类的环丙沙星、诺氟沙星和左氧氟沙星的耐药率较高,分别为68.9%、65.2%和63.7%;进一步对高耐药率的氟喹诺酮类耐药菌株测定环丙沙星MIC值为4-256μg/ml;PCR扩增相关耐药基因（gyr A和par C）,并测序分析耐药决定区突变及与MIC对应关系表明,耐药菌株突变主要发生在gyr A基因的Ser83密码子和Asp87密码子,及par C基因的Ser80密码子和Glu84密码子上,不同突变类型分别对应一定MIC值范围,其中73.1%（57/78）突变类型为gyr A基因的C（Ser83）→T（Leu）和G（Asp87）→A（Asn）突变,及par C基因的G（Ser80）→T（Ile）突变,其MIC值在8~256μg/ml之间;本研究提示规模化鸡场在防治大肠杆菌等细菌病时,应根据药敏结果选用药物,少用或不用氟喹诺酮类药物。

关键词：鸡源大肠杆菌氟喹诺酮类药物耐药性耐药突变

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禽传染性支气管炎病毒M_(41)株反向遗传株的构建

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中国畜牧兽医文摘 2015年第5期31卷 62-63页

作者：李然许记刚吴暄姬高升杨鑫王红宁四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室生物资源与生态环境教育部重点实验室“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台四川成都610064

禽传染性支气管炎病毒是目前危害禽养殖业的重大传染病之一。由于病毒基因组大、操作困难,给研究其基因组结构开发有效的疫苗带来了困难。本研究在对IBV M41毒株全基因组序列测序的基础上用DNAStar软件的Map Draw程序分析酶切位点的分... 详细信息

禽传染性支气管炎病毒是目前危害禽养殖业的重大传染病之一。由于病毒基因组大、操作困难,给研究其基因组结构开发有效的疫苗带来了困难。本研究在对IBV M41毒株全基因组序列测序的基础上用DNAStar软件的Map Draw程序分析酶切位点的分布情况,将全基因组分为14段分段扩增。采用Primer6设计含No See’m酶切位点,在5’端引入T7启动子核心序列的引物,分段克隆于PMD19-T载体,通过引入的"No See’m式"Bsa I和BsmB I酶切位点,将亚克隆体外拼接成基因组全长cDNA。再通过5’端引入的T7启动子核心序列对基因组全长cDNA进行体外转录,使用电击的方法将全长转录物转染BHK-21细胞,转染后转入SPF鸡胚培养,鉴定成功获得了IBV M41拯救株。为研究IBV强毒株的致病机理、毒力位点及IBV新型疫苗的研究提供了参考,奠定了基础。

关键词： IBV M41株反向遗传

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