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作者：董国良刘振利谢长清韩肖亚袁宗辉彭大鹏国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种玉米赤霉烯酮的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织和动物饲料中此类毒素的筛选检测。[方法]本研究以玉米赤霉烯酮为原料连接羧甲基羟胺... 详细信息

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种玉米赤霉烯酮的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织和动物饲料中此类毒素的筛选检测。[方法]本研究以玉米赤霉烯酮为原料连接羧甲基羟胺（CMO）,合成半抗原ZEN-CMO,分别与大分子蛋白KLH、BSA、HSA和OVA进行偶联,制备完全抗原ZEN-CMO-KLH、ZEN-CMO-BSA、ZEN-CMO-HSA和ZEN-CMO-OVA。以玉米赤霉烯酮为原料合成半抗原7-NH-ZEN,通过戊二醛（GA）法与BSA连接,制备完全抗原7-NH-ZEN-GA-BSA。将人工抗原ZEN-CMO-BSA/HSA/KLH和7-NH-ZEN-GA-BSA免疫雌性Balb/c小鼠,监测小鼠血清效价和特异性。通过单克隆技术筛选杂交瘤细胞株,采用小鼠体内诱生法制备单克隆抗体。以ZEN-CMO-OVA为包被原、ZEN为竞争物,优化ELISA条件,建立间接竞争ELISA方法。按1、2、4倍定量限（LOQ）向玉米、猪饲料、猪肉、猪肝脏、猪肾脏和牛奶样品中添加ZEN标准溶液。样品经前处理后用制备的单克隆抗体进行ELISA检测,研制试剂盒产品。[结果]半抗原经质谱鉴定合成成功,人工抗原经紫外分光光度计鉴定成功。动物免疫后,经筛选,获得单克隆杂交瘤细胞株ZEN/6C2,该杂交瘤细胞株的染色体数平均为100.7,经鉴定亚型为IgG。ELISA优化结果表明,包被原最佳浓度为1μg mL,单克隆抗体的最佳稀释度为1:64000;标准曲线回归方程为y=（A-D）/[1+（x/C）]+D,A=0.97351,B=7.47822,C=2.03041,D=0.07020,R=0.99977,IC值为114.0±5.0ng L（n=5）,线性范围10～6250ng L。标准曲线的板内和板间变异系数均小于15%,灵敏度为11.3ng L。该抗体对α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇和玉米赤霉酮的交叉反应率分别为89.5%、39.3%、99.2%、55.5%和44.3%。样品添加实验结果表明药物回收率为62.9%～113.6%,批内和批间变异系数均小于15%,结果表明药物说明该ELISA方法的准确性和重复性良好。通过与液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）对比考核,该ELISA方法与LC-MS/MS方法相关性良好,相关系数为0.995,表明该ELISA方法的检测结果切实可靠。[结论]本研究制备了一种能够同时识别玉米赤霉烯酮及其5种代谢产物的广谱单克隆抗体,与国内外同类抗体相比灵敏度较高,广谱性好;基于该抗体建立了玉米、饲料、动物可食性组织及牛奶中玉米赤霉烯酮及其5种代谢物的ELISA检测方法,填补了该方法在动物可食性组织和牛奶中玉米赤霉烯酮类霉菌毒素检测的空白,为玉米赤霉烯酮类霉菌毒素多残留酶联免疫检测产品的研发奠定了基础,具有较高的学术价值和广阔的应用前景。

关键词：玉米赤霉烯酮类抗原单克隆抗体酶联免疫吸附试验动物组织饲料

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甲氧苄啶类单克隆抗体的制备及其在动物可食性组织中的ELISA快速检测方法研究

甲氧苄啶类单克隆抗体的制备及其在动物可食性组织中的ELISA快速...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：韩肖亚刘振利谢长清董国良袁宗辉彭大鹏国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种甲氧苄啶类的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织中此类药物的筛选检测。[方法]本研究以二甲氧苄啶（DVD）为原料连接丁二酸酐（HS）,合... 详细信息

[目的]本研究拟通过半抗原设计、抗原合成和单克隆抗体制备,制备一种甲氧苄啶类的广谱单克隆抗体,并研制相应的ELISA检测试剂盒,用于动物可食性组织中此类药物的筛选检测。[方法]本研究以二甲氧苄啶（DVD）为原料连接丁二酸酐（HS）,合成半抗原DVD-HS,又以甲氧苄啶（TMP）为原料合成半抗原TMPCOOH。DVD-HS和TMPCOOH分别与BSA、OVA等大分子蛋白偶联,制备完全抗原DVD-HS-DCC-BSA、DVD-HS-DCC-OVA、TMPCOOH-DCC-BSA和TMPCOOH-DCC-OVA。以二甲氧苄啶（DVD）为半抗原,BSA和OVA连接,制备完全抗原DVD-GA-BSA和DVD-GA-OVA。将完全抗原DVD-HS-DCC-BSA、DVD-GA-BSA和TMPCOOH-DCC-BSA免疫雌性Balb/c小鼠,监测小鼠血清效价和特异性。通过单克隆技术筛选杂交瘤细胞株,采用小鼠体内诱生法制备单克隆抗体。以TMPCOOH-DCC-OVA为包被原、TMP为竞争物,优化ELISA条件,建立间接竞争ELISA方法。按1、2、4倍定量限（LOQ）向牛奶、蜂蜜、猪肉、猪肝脏、鸡肉和鸡肝脏样品中添加TMP标准溶液。样品经前处理后用制备的单克隆抗体进行ELISA检测,研制试剂盒产品。[结果]半抗原经质谱鉴定合成成功,人工抗原经紫外分光光度计鉴定成功。动物免疫后,经筛选,获得单克隆杂交瘤细胞株TMP/2Gl,该杂交瘤细胞株的染色体数平均为103.4。经鉴定亚型为IgGl。ELISA优化结果表明,包被原最佳浓度为100 g/L,单克隆抗体的最佳稀释度为1:16000;标准曲线回归方程为y=（A-D）/[1+（1000x/C）^B]+D,A=0.9244,B=6.5644,C=2.34793,D=0.09546,R=1.00000,IC值为0.232±0.007 g/L（n=5）,线性范围为0.0125～3.2 g/L,灵敏度为0.053 g/L。该抗体对其他五种甲氧苄啶类药物的IC50值分别为DVD （0.527μg/L）、ADP （1.479μg/L）、BQP （4.354μg/L）、OMP （0.965μg/L）、BMP （0.119μg/L）,交叉反应率分别为DVD（44%）、ADP（15.7%）、OMP（24%）、BQP（5.3%）、BDP（195%）,且与磺胺类药物无交叉反应。样品添加实验结果表明药物回收率为81.4%～107.7%,批内和批间变异系数均小于20%,结果表明药物说明该ELISA方法的准确性和重复性良好。通过与液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）对比考核,R2=0.994,相关性良好,由此可说明本试验建立的检测方法是真实可靠的。[结论]本研究通过分子模拟技术,设计出了一种新颖的半抗原,基于此半抗原,获得了一种可识别6种甲氧苄啶类药物的广谱性抗体,与现有的同类单克隆抗体相比较其灵敏度较高、广谱性较强,具有一定的学术意义。基于该抗体,本研究建立了牛奶、蜂蜜、猪肉、猪肝脏、鸡肉、鸡肝脏中甲氧苄啶类药物的多残留ELISA检测方法,该方法样品前处理简单、检测限较低、准确性和重复性较好,具有广阔的应用前景。

关键词：甲氧苄啶类抗原单克隆抗体酶联免疫吸附试验动物可食性组织

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苯二氮卓类单克隆抗体的制备及其在动物饲料和动物可食性组织中的ELISA快速检测方法研究

苯二氮卓类单克隆抗体的制备及其在动物饲料和动物可食性组织中的...

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中国畜牧兽医学会2017年学术年会

作者：王涓王玉莲袁宗辉彭大鹏国家兽药残留基准实验室农业部兽药残留检测重点实验室农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

引言苯二氮卓类药物属于作用于中枢神经系统的药物,它们与相应受体结合产生作用,能够使动物镇静、嗜睡,或对周围的环境冷漠。兽医临床上,常作为麻醉辅助药物或在将生产食品动物运往屠宰场过程中使用,以减少应激反应,降低死亡率。若长期... 详细信息

引言苯二氮卓类药物属于作用于中枢神经系统的药物,它们与相应受体结合产生作用,能够使动物镇静、嗜睡,或对周围的环境冷漠。兽医临床上,常作为麻醉辅助药物或在将生产食品动物运往屠宰场过程中使用,以减少应激反应,降低死亡率。若长期摄入苯二氮卓类药物,可产生依赖性,突然停药表现为抑郁、精神激动、失眠等。这类药物在动物可食性组织中的残留可严重威胁消费者和动物的健康。因此,加强对这类药物在动物可食性组织残留的快速检测方法研究十分重要。材料与方法以硝西泮（NZP）为原料,制备半抗原7-NH-NZP,连接牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）,

关键词：可食性组织动物饲料 ELISA 单克隆抗体快速检测方法

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吩噻嗪类单克隆抗体的制备及其在动物饲料中的ELISA快速检测方法研究

吩噻嗪类单克隆抗体的制备及其在动物饲料中的ELISA快速检测方法...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十四次学术讨论会

作者：王涓王玉莲袁宗辉彭大鹏国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学中国武汉430070

[目的]吩噻嗪类药物属于作用于中枢神经系统的药物，它们与相应受体结合产生作用，能够使动物镇静、嗜睡，或对周围的环境冷漠。兽医临床上，常作为麻醉辅助药物或在将生产食品动物运往屠宰场过程中使用，以减少应激反应，降低死亡率。... 详细信息

[目的]吩噻嗪类药物属于作用于中枢神经系统的药物，它们与相应受体结合产生作用，能够使动物镇静、嗜睡，或对周围的环境冷漠。兽医临床上，常作为麻醉辅助药物或在将生产食品动物运往屠宰场过程中使用，以减少应激反应，降低死亡率。若长期摄入吩噻嗪类药物，会导致对心血管系统、循环系统、神经系统等产生副作用，还可引起远期毒性作用，以及诱导致畸、致癌、致突变作用;且该类药物可通过胎盘屏障和血脑屏障，进入乳汁，对婴儿或幼畜产生呼吸抑制作用。因此，这类药物在动物可食性组织中的残留可严重威胁消费者和动物的健康。故加强对这类药物在动物饲料中的快速检测方法研究十分重要。

关键词：吩噻嗪类抗原单克隆抗体酶联免疫吸附试验动物饲料

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放射性同位素标记药物在药物代谢与处置研究中的应用

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中国新药杂志 2016年第13期25卷 1475-1484页

作者：斯琴朝克图黄玲利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室国家兽药安全评价实验室华中农业大学动物医学院湖北工程学院生命科学技术学院特色果蔬质量安全控制湖北省重点实验室

放射性标记药物是广泛应用于新药研究和药物残留分析等领域,用来阐明药物代谢和处置过程的完美工具。常用标记核素有;H,;C,;F,;I等。在新药研究和药物残留分析研究中药物的吸收、分布、生物转化、排泄途径、残留时间及物料平衡等都需要... 详细信息

放射性标记药物是广泛应用于新药研究和药物残留分析等领域,用来阐明药物代谢和处置过程的完美工具。常用标记核素有;H,;C,;F,;I等。在新药研究和药物残留分析研究中药物的吸收、分布、生物转化、排泄途径、残留时间及物料平衡等都需要利用标记在药物的代谢稳定部位上的放射性标记化合物完成。本文阐述放射性同位素示踪技术在药物代谢及处置研究中的应用,并举例说明了相关研究中的检测方法和手段,介绍了放射性标记药物的检测方法及相关仪器设备的发展、种类,未来发展的可能方向。

关键词：放射性标记药物代谢处置研究残留

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武汉市售动物性食品抗菌药物残留调查分析

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湖北农业科学 2008年第3期47卷 321-323页

作者：伍金娥常超王玉莲袁宗辉武汉工业学院食品科学与工程学院武汉430023 华中农业大学国家兽药残留检测基准实验室/农业部食品安全评价重点开放实验室武汉430070

采用拭子法对武汉市的市售动物性食品(猪肾、猪肝、猪肉)中的抗菌药物残留情况进行了抽样调查,结果发现武汉市上市猪肝阳性检出率为13%,猪肾阳性检出率为25%,猪肉阳性检出率为1%。用HPLC法对筛选结果为阳性的猪样品做一步确证分析,在肝... 详细信息

采用拭子法对武汉市的市售动物性食品(猪肾、猪肝、猪肉)中的抗菌药物残留情况进行了抽样调查,结果发现武汉市上市猪肝阳性检出率为13%,猪肾阳性检出率为25%,猪肉阳性检出率为1%。用HPLC法对筛选结果为阳性的猪样品做一步确证分析,在肝脏和肾脏中均检出了青霉素、链霉素和金霉素的残留;猪肉中检出金霉素的残留,表明动物性食品抗菌药物残留的现状不容乐观。

关键词：拭子法动物性食品抗菌药物残留抽样调查

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检测猪可食性组织中金霉素残留的FAST法与HPLC法的比较研究

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黑龙江畜牧兽医 2008年第6期 60-61页

作者：伍金娥常超王玉莲赵春保袁宗辉武汉工业学院食品科学与工程学院湖北武汉430023 华中农业大学国家兽药残留检测基准实验室／农业部食品安全评价重点开放实验室湖北武汉430070

金霉素(Chlortetracycline,CTC)是一种广谱抗生素,具有促生长、改善饲料利用率、成本低等优点,是我国目前畜禽饲料生产巾普遍使用的一种抗生素,但使用不当或过量使用会导致其在猪可食性组织中的残留,对人类健康构成威胁.

关键词： FAST 动物组织检测基准兽药残留金霉素可食性 HPLC法广谱抗生素

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猪肾脏中氯丙嗪和异丙嗪残留检测方法的建立

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中国兽医学报 2005年第4期25卷 412-413,416页

作者：范盛先黄玲利袁宗辉陈品华中农业大学兽药研究所农业部兽药残留检测基准实验室农业部食品安全评价重点开放实验室湖北武汉430070

建立了猪肾脏中氯丙嗪和异丙嗪残留量检测的高效液相色谱法。猪肾脏中残留的氯丙嗪和异丙嗪,用乙腈提取,再依次用酸化乙腈和正己烷净化,氮气吹干,甲醇溶解后,用Waters高效液相色谱系统,HypersilC18柱,UV检测器,用V(乙腈)∶V(水)∶V(0.5m... 详细信息

建立了猪肾脏中氯丙嗪和异丙嗪残留量检测的高效液相色谱法。猪肾脏中残留的氯丙嗪和异丙嗪,用乙腈提取,再依次用酸化乙腈和正己烷净化,氮气吹干,甲醇溶解后,用Waters高效液相色谱系统,HypersilC18柱,UV检测器,用V(乙腈)∶V(水)∶V(0.5mol·L-1乙酸铵)(50∶49∶1)为流动相,流速1.2mL/min,波长254nm测定,内标法定量。结果表明,氯丙嗪和异丙嗪在猪肾脏中的最低检测限均为10μg/kg,组织中添加量为10μg/kg时,氯丙嗪和异丙嗪的回收率分别为83%和84%,批间变异系数均小于20%。该方法样品处理简单,可同时检测氯丙嗪和异丙嗪在猪肾脏中的残留量。

关键词：氯丙嗪异丙嗪猪肾脏残留

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喹赛多对仔猪产肠毒素大肠杆菌感染的预防效果

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中国兽医学报 2005年第6期25卷 643-645,648页

作者：丁明星袁宗辉王玉莲朱惠玲范盛先华中农业大学兽药研究所农业部食品安全评价重点开放实验室农业部兽药残留检测基准实验室湖北武汉430070

150只去势长大仔猪随机分为6组,Ⅰ和Ⅳ组饲喂不含抗菌药的基础日粮,Ⅱ和Ⅴ组基础日粮中添加喹乙醇100m g/kg,Ⅲ和Ⅵ组基础日粮中添加喹赛多100 m g/kg。Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组仔猪灌服1010CFU产肠毒素性大肠杆菌(O139∶K88),Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组仅灌服... 详细信息

150只去势长大仔猪随机分为6组,Ⅰ和Ⅳ组饲喂不含抗菌药的基础日粮,Ⅱ和Ⅴ组基础日粮中添加喹乙醇100m g/kg,Ⅲ和Ⅵ组基础日粮中添加喹赛多100 m g/kg。Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组仔猪灌服1010CFU产肠毒素性大肠杆菌(O139∶K88),Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组仅灌服肉汤。结果表明,喹赛多饲喂猪直肠粪便中大肠杆菌总数和接种的血清型大肠杆菌数与喹乙醇饲喂猪均无显著差异(P>0.05),喹赛多和喹乙醇饲喂猪直肠粪便中接种的血清型大肠杆菌数均低于非药物饲喂猪(P<0.05)。Ⅳ组仔猪感染率为68%;Ⅴ和Ⅵ组感染率均为16%。药物饲喂猪平均日增重显著改善(P<0.05),喹赛多饲喂猪平均日增重高于喹乙醇饲喂猪(P<0.05)。Ⅳ组仔猪平均日增重和饲料转化率分别下降9.6%和8.4%,Ⅵ组仔猪日增重和饲料转化率分别提高11.9%和7.9%,均高于Ⅴ组(4.2%和1.5%)。可见喹赛多不仅对断奶仔猪产肠毒素大肠杆菌感染有显著预防作用,而且还有较好的促进生长和提高饲料转化率作用。

关键词：喹赛多产毒素性大肠杆菌预防生长性能猪

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猪肾中抗菌药物残留筛选方法研究

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中国动物检疫 2005年第9期22卷 27-29页

作者：伍金娥宋士波范盛先袁宗辉农业部食品安全评价重点开放实验室&农业部兽药残留检测基准实验室华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学兽药研究所博士生导师武汉430070

本实验用拭子法对猪肾脏中的7种常用抗菌药物(包括青霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、新霉素、金霉素、恩诺沙星、红霉素)残留进行了研究。用添加法测定了猪肾组织以上7种药物的检测限和假阴性率。结果表明拭子法对以上药物的检测限均低于... 详细信息

本实验用拭子法对猪肾脏中的7种常用抗菌药物(包括青霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、新霉素、金霉素、恩诺沙星、红霉素)残留进行了研究。用添加法测定了猪肾组织以上7种药物的检测限和假阴性率。结果表明拭子法对以上药物的检测限均低于我国规定的最低残留限量,并且该方法检测组织中的庆大霉素、新霉素、金霉素、恩诺沙星、红霉素没有发现假阴性,对检测青霉素和氨苄青霉素有假阴性的产生。用国外同类方法(试剂盒)对10种抗菌药物(青霉素、金霉素、红霉素、恩诺沙星、庆大霉素、磺胺二甲嘧啶、三甲氧苄胺嘧啶、林可霉素、喹乙醇、氯霉素)与所建拭子法进行比较,发现它们之间的差异较小。本研究表明:拭子法达到国外试剂盒水平,是一种有效的猪肾组织中抗菌药物残留检测方法。提示:在我国的残留监控中有良好的应用前景。

关键词：抗菌药物残留筛选拭子法猪肾药物残留猪肾脏筛选方法氨苄青霉素庆大霉素恩诺沙星

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