检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2022年第6期36卷 748-752页

作者：王铭月孙晓曼李丹地中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000

轮状病毒(rotavirus,RV)是引起人类和动物急性胃肠炎的重要病原体。结构蛋白VP8*(viral protein 8*,VP8*)位于RV最外层的刺突状VP4的头部,VP8*在受体识别和结合中发挥重要作用。目前对RV受体结合特性的研究主要集中在A组轮状病毒(group ... 详细信息

轮状病毒(rotavirus,RV)是引起人类和动物急性胃肠炎的重要病原体。结构蛋白VP8*(viral protein 8*,VP8*)位于RV最外层的刺突状VP4的头部,VP8*在受体识别和结合中发挥重要作用。目前对RV受体结合特性的研究主要集中在A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)和C组轮状病毒(group C rotavirus,RVC)。本文对RV的蛋白结构、受体类型以及RVA和RVC受体结合特性及与受体相互作用的结构基础等研究进展进行综述。

关键词：轮状病毒 VP8*蛋白受体结合特征

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基于三种试剂盒分析新型冠状病毒特异性抗体的动态变化

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病毒学报 2020年第3期36卷 343-347页

作者：姜中毅毛乃颖朱贞张燕崔爱利汪鹏徐丛杉董茂星王雪莹于德山许文波甘肃省疾病预防控制中心兰州73000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为了解新型冠状病毒肺炎(COVID-19)发病后血清中新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异性抗体的动态变化,本研究使用三种不同检测原理的SARS-CoV-2抗体检测试剂盒,对来自甘肃省33例核酸检测阳性的COVID-19确诊病例的58份血清标本,分别进行了病... 详细信息

为了解新型冠状病毒肺炎(COVID-19)发病后血清中新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异性抗体的动态变化,本研究使用三种不同检测原理的SARS-CoV-2抗体检测试剂盒,对来自甘肃省33例核酸检测阳性的COVID-19确诊病例的58份血清标本,分别进行了病毒特异性抗体(IgM、IgG和总抗体)的检测。结果显示,COVID-19发病后IgM、IgG和总抗体阳性率随发病时间的推移而逐渐上升:发病早期3d以内,三种试剂盒检测病毒特异性抗体阳性率在13.6%~31.8%之间;发病4~7d时,阳性率在36.4%~45.5%之间;发病8~14d时,阳性率在55.6%~77.8%之间;而发病15d以上时,阳性率达到100%。此外,本研究使用三种试剂盒检测了健康人血清标本,检测特异性在99%~100%之间。统计学分析结果显示,三种检测试剂盒的检测结果差异无显著性(P>0.05)。综上所述,三种SARS-CoV-2抗体检测试剂盒均具有较好的敏感性和特异性,可用于COVID-19疑似病例在核酸检测阴性时的辅助诊断;本研究初步获得的SARS-CoV-2特异性抗体动态变化特征可为COVID-19血清流行病学调查和无症状感染者研究提供重要的基础依据。

关键词：新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 血清学检测抗体动态变化

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一株Ⅲ型WU多瘤病毒的分离培养和全基因组进化分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第3期43卷 182-190页

作者：黄益曼陈爱珺王超魏田力呼壮丛珊珊谭精晶姚立红郑丽舒中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京100052 首都医科大学附属北京友谊医院儿科北京100050 中国医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室沈阳110122

目的分离培养WU多瘤病毒(WU polyomavirus,WUPyV)并分析全基因组系统进化、同源性及种群动态特征。方法采用实时荧光定量PCR检测2020—2022年间北京友谊医院呼吸道感染住院患儿鼻咽抽吸物样本,利用气液两相的原代人呼吸道上皮细胞模型对... 详细信息

目的分离培养WU多瘤病毒(WU polyomavirus,WUPyV)并分析全基因组系统进化、同源性及种群动态特征。方法采用实时荧光定量PCR检测2020—2022年间北京友谊医院呼吸道感染住院患儿鼻咽抽吸物样本,利用气液两相的原代人呼吸道上皮细胞模型对WUPyV阳性样本进行病毒分离培养,Sanger测序获得全基因组,结合GenBank数据库中已公布的全基因组信息进行系统发育和进化动力学研究。结果WUPyV在2020—2022年的检出率为4.7%(31/659),并成功分离1株Ⅲc型WUPyV临床病毒株BJ0593。WUPyV全基因组及各基因片段同源性较高,VP2基因的平均进化速率约为每年1.256×10^(-4)个氨基酸替换/位点,种群动态在近十年内趋于平缓。结论本研究首次成功分离Ⅲ型WUPyV临床病毒株,为WUPyV的分子进化及致病性研究提供基础。

关键词： WU多瘤病毒分离培养原代人呼吸道上皮细胞全基因组分析

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分子与血清学检测确诊2017年西非塞拉利昂1例猴痘病毒感染病例

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中国人兽共患病学报 2019年第6期35卷 535-538页

作者：叶飞宋敬东赵莉张益夏连续祝令伟任娇王文玲武桂珍田厚文谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生与健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室病毒病应急技术中心北京102206 塞拉利昂-中国友好生物安全实验室塞拉利昂弗里敦999127

目的对发生在西非塞拉利昂南部的疑似猴痘病毒感染者进行实验室确诊.方法采集疑似感染病人感染后12d和55d的血清,利用猴痘特异性引物进行实时定量PCR检测,并对病人血清中痘苗病毒IgG、IgM和猴痘病毒IgG抗体进行ELISA检测,并结合其流行... 详细信息

目的对发生在西非塞拉利昂南部的疑似猴痘病毒感染者进行实验室确诊.方法采集疑似感染病人感染后12d和55d的血清,利用猴痘特异性引物进行实时定量PCR检测,并对病人血清中痘苗病毒IgG、IgM和猴痘病毒IgG抗体进行ELISA检测,并结合其流行病学信息进行诊断.结果实时定量PCR检测该病人感染12d后血清为猴痘病毒核酸阳性;ELISA检测病人感染后12d和55d血清,痘苗病毒IgG、IgM为阳性;猴痘病毒IgG抗体检测均为阳性,且55d较12d抗体滴度有4倍升高(3200/800).结论病人血清的核酸检测和血清学检测结果为阳性,结合病人的临床特征和野生动物接触史,确诊该病人为猴痘病毒感染.

关键词：塞拉利昂猴痘病毒实时定量PCR 血清学检测

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2020年青海省发现风疹病毒2B-L2c基因亚型

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中华实验和临床病毒学杂志 2021年第5期35卷 536-542页

作者：范丽霞李崇亥王晓彤李倩兰汪春翔赵生仓朱贞青海省疾病预防控制中心西宁810007 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒学和病毒病重点实验室北京102206

目的分析2020年青海省风疹流行特点和流行风疹病毒(rubella virus,RV)基因特征,为当地优化和完善风疹防控策略提供科学依据。方法汇总国家法定传染病报告系统中的青海省2020年风疹发病数据,分析其流行病学特征;依托青海省麻疹/风疹实验... 详细信息

目的分析2020年青海省风疹流行特点和流行风疹病毒(rubella virus,RV)基因特征,为当地优化和完善风疹防控策略提供科学依据。方法汇总国家法定传染病报告系统中的青海省2020年风疹发病数据,分析其流行病学特征;依托青海省麻疹/风疹实验室网络,采集并鉴定2020年疑似风疹暴发和散发病例咽拭子标本,阳性标本盲传3代后获得RV分离株,提取病毒核酸后扩增并测定E1基因的739个核苷酸片段,用于鉴定2020年青海RV株基因型和亚型,并分析其与我国流行RV的分子差异。结果2020年青海省风疹发病呈现明显回升态势,发病年龄已后移至10~19岁年龄组青少年(占比94.9%);2020年从青海省4个风疹高发市州共分离到29株RV病毒株,经鉴定所有RV株均属于2B-L2c基因亚型,也是目前我国RV流行的优势基因亚型。此外,病毒学监测数据显示,2020年青海省存在着不同的2B-L2c基因亚型RV传播链,且一起暴发疫情可能由不同的传播链病毒引起。结论2020年青海省流行RV为2B-L2c基因亚型,该病毒的流行导致了青海省2020年风疹疫情的回升以及部分市州的暴发流行。

关键词：风疹风疹病毒 2B-L2c基因亚型

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尼帕病毒N基因核酸检测方法对假病毒阳性标准品的制备及鉴定

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疾病监测 2022年第8期37卷 1011-1015页

作者：黄益曼宋敬东韩辉麻粉莲郑丽舒中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京100052 中国海关科学技术研究中心北京100026

目的针对致死率极高的尼帕病毒,制备安全、稳定的含有尼帕病毒N基因片段的重组假病毒颗粒阳性标准品。方法人工合成含有尼帕病毒N基因片段的核苷酸序列并导入CD513B慢病毒载体,与包装质粒同时转染HEK293T细胞,超速离心浓缩纯化,电镜... 详细信息

目的针对致死率极高的尼帕病毒,制备安全、稳定的含有尼帕病毒N基因片段的重组假病毒颗粒阳性标准品。方法人工合成含有尼帕病毒N基因片段的核苷酸序列并导入CD513B慢病毒载体,与包装质粒同时转染HEK293T细胞,超速离心浓缩纯化,电镜观察假病毒颗粒形态,感染实验验证假病毒功能,并进行线性、稳定性和均一性检测。结果包装并纯化后的假病毒颗粒浓度较高,直径在100~200 nm,可见明显的G蛋白刺突,感染实验绿色荧光蛋白信号强且不同温度下储存稳定性良好,均一性检测变异系数小于1%。结论成功构建含有尼帕病毒N基因片段的假病毒颗粒,可作为阳性对照品在尼帕病毒核酸提取和检测过程中实现全程质量控制。

关键词：尼帕病毒N基因假病毒阳性标准品

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人偏肺病毒在传代细胞和人呼吸道上皮细胞中分离和鉴定

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病毒学报 2022年第2期38卷 313-321页

作者：麻粉莲王超陈爱珺宋敬东谢志萍姚立红郑丽舒中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室北京100052 中国科学院生物安全大科学研究中心武汉430071

人偏肺病毒(Human metapneumovirus,HMPV)是2001年鉴定出的新发呼吸道病毒,婴幼儿、老人和免疫抑制人群易感,引起上呼吸道和下呼吸道感染,目前尚无疫苗和特异性治疗方案。为获得北京地区HMPV临床流行毒株,本研究将经荧光定量PCR检测为H... 详细信息

人偏肺病毒(Human metapneumovirus,HMPV)是2001年鉴定出的新发呼吸道病毒,婴幼儿、老人和免疫抑制人群易感,引起上呼吸道和下呼吸道感染,目前尚无疫苗和特异性治疗方案。为获得北京地区HMPV临床流行毒株,本研究将经荧光定量PCR检测为HMPV阳性的鼻咽抽吸物样本分别接种LLC-MK2、Vero-E6和分化良好的人呼吸道上皮细胞(Human Airway Epithelium,HAE),观察细胞病变、检测免疫荧光、电镜观察病毒形态、测定病毒滴度及分析复制特点,对分离获得的HMPV分离株进行鉴定。结果表明,HMPV感染LLC-MK2细胞可形成合胞体,但在Vero-E6中多呈单个细胞感染;经免疫荧光检测,HAE、LLC-MK2和Vero-E6细胞均可见绿色荧光;电镜结果可见病毒为近似球型的颗粒,有包膜和刺突,直径约在150nm~200nm之间;HMPV在HAE和LLC-MK2两种细胞上的复制特点基本相同。本研究成功建立了临床样本在LLC-MK2、Vero-E6和HAE分离培养HMPV的方法,分离并鉴定了HMPV临床分离株,为HMPV感染机制的研究奠定基础。

关键词：人偏肺病毒人呼吸道上皮细胞病毒分离鉴定

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人H组轮状病毒VP7蛋白表达及其多克隆抗体制备

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第6期38卷 702-708页

作者：刘晓钰赵颖张璐琦欧阳瑄泽章青李丹地李金松李利利孙晓曼段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的表达和纯化人H组轮状病毒(group H rotavirus,RVH)J19株的VP7蛋白,制备VP7的多克隆抗体(多抗)并对其多抗功能进行鉴定。方法通过杆状病毒系统表达RVH J19株的VP7蛋白,通过亲和层析和凝胶过滤层析方法进行蛋白纯化。将纯化得到的RVH ... 详细信息

目的表达和纯化人H组轮状病毒(group H rotavirus,RVH)J19株的VP7蛋白,制备VP7的多克隆抗体(多抗)并对其多抗功能进行鉴定。方法通过杆状病毒系统表达RVH J19株的VP7蛋白,通过亲和层析和凝胶过滤层析方法进行蛋白纯化。将纯化得到的RVH J19株的VP7蛋白免疫兔子以制备VP7多抗血清,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)、免疫荧光荧光试验(Immunofluorescence,IF)等对VP7多抗血清进行鉴定。结果纯化得到可溶的J19 VP7蛋白;制备获得J19株VP7兔多抗;ELISA显示VP7多抗具有较好的结合效价,在稀释2048000倍时与人RVH VP7蛋白仍有结合;WB表明多抗能够结合J19 VP7蛋白;IF显示VP7多抗可以特异识别人H组轮状病毒J19株。结论本研究成功得到了人H组轮状病毒J19 VP7蛋白,制备的VP7多抗可以特异性识别人H组轮状病毒,为人H组轮状病毒的检测及病毒衣壳结构功能研究提供了基础。

关键词：人H组轮状病毒杆状病毒表达系统 VP7蛋白多克隆抗体

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优化SARS-CoV-2 S-EABR在293T细胞中的分泌性表达

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第5期38卷 489-496页

作者：姜苏芮毛彤瑶张鹏段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的通过优化启动子、终止子、信号肽及胞内序列末端氨基酸来增加SARS-CoV-2 S-EABR蛋白在293T细胞系中的分泌性表达。方法首先构建四种含有不同元件(启动子和终止子)组合的PCDNA3.1(-)真核载体质粒(Mb、MS、Ab、AS),插入按照人密码子... 详细信息

目的通过优化启动子、终止子、信号肽及胞内序列末端氨基酸来增加SARS-CoV-2 S-EABR蛋白在293T细胞系中的分泌性表达。方法首先构建四种含有不同元件(启动子和终止子)组合的PCDNA3.1(-)真核载体质粒(Mb、MS、Ab、AS),插入按照人密码子优化的S-EABR-1目的序列,瞬时转染293T细胞,48 h后收取细胞培养上清液和细胞裂解液,通过Western Blot和ELISA检测上清S蛋白的表达水平。然后选择表达最好的元件组合载体,插入S-EABR-1和S-EABR-2(于S-EABR-1尾部添加4个氨基酸——HSLP)目的序列,比较上清S蛋白的表达水平。最后基于上述表达效果最好的元件组合载体及插入目的序列,构建替换SARS-CoV-2 S蛋白原始信号肽的5种载体质粒(tPA,AZ,IFNα2,HSA,GLUC),比较上清S蛋白表达水平。同时利用计算机模拟SRP54亚基与信号肽核酸序列的分子对接,将对接分值(Docking Score)作为对接评价标准,预测两者的结合情况。结果在293T细胞中,Ab组合的载体分泌表达S-EABR水平最高,产量相较于Mb增加了125%。基于Ab组合载体,S-EABR-2序列表达分泌S-EABR的水平较S-EABR-1增加了约50%,进一步替换成HSA信号肽后的S-EABR表达分泌水平较S蛋白原始信号肽增加了约83%。此外,计算机模拟结果显示HSA与SRP54亚基的对接分值最高,为1505.861。结论通过真核表达元件(启动子、终止子和信号肽)及胞内序列的优化可进一步提高经密码子优化后的S-EABR在293T细胞中的分泌性表达。信号肽与SRP54亚基亲和力的计算模拟对接分值与S-EABR分泌表达水平基本吻合的结果也为后续提高目的基因分泌性表达的信号肽筛选提供了一种设计思路和筛选策略。

关键词：新型冠状病毒 S-EABR 启动子终止子信号肽信号识别颗粒

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CpG联合铝佐剂增强RBD-Fc重组蛋白诱导小鼠免疫反应效果的研究

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病毒学报 2023年第6期39卷 1549-1560页

作者：任虎何远薇张亚楠李海郭晋源张燕祝双利冀天娇曹蕾许文波国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所世界卫生组织西太平洋地区麻疹/风疹参比实验室北京102206 北京中医药大学东直门医院北京102206

由严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的2019冠状病毒病(Coronavirus disease 2019,COVID-19)大流行对全球健康和经济构成了严重威胁,SARS-CoV-2关切变异株(Variants of concern,VOCs)的出现更增加了疫苗研发的难度,因此,优化设计对突变株具有广谱免疫反应的疫苗显得尤为重要。本研究选取具有大量显性中和表位的受体结合域(Receptor-binding domain,RBD)蛋白作为目标抗原,在SARS-CoV-2经典株RBD序列的基础上引入多个VOCs的关键突变位点,将其与人IgG1 Fc片段融合表达,并结合CpG单佐剂、氢氧化铝单佐剂或CpG与氢氧化铝复合佐剂两剂次免疫小鼠,比较CpG联合铝佐剂相比单独使用铝或CpG佐剂诱导细胞免疫和体液免疫反应的增强作用,同时观察小鼠产生抗不同VOCs活病毒的交叉中和抗体滴度。结果显示,与单佐剂相比,RBD-Fc蛋白结合CpG与氢氧化铝复合佐剂免疫小鼠可产生最高的IgG结合抗体及高水平Th1偏向的细胞免疫应答。同时,小鼠血清还可以有效地中和SARS-CoV-2贝塔株(GMT:11143)、德尔塔株(GMT:4850)、经典株(GMT:3675),甚至是奥密克戎BA.1株(GMT:1393)和BA.5株(GMT:459)的感染。这些结果表明含有突变位点的SARS-CoV-2 RBD-Fc重组蛋白具有良好的潜力,联合使用CpG和铝佐剂可明显提高和平衡小鼠的细胞免疫反应,产生对不同SARS-CoV-2高滴度的交叉中和抗体,可作为一种广谱疫苗进一步研究和开发。

关键词： RBD-Fc 佐剂体液免疫细胞免疫交叉中和抗体

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