检索结果-内蒙古大学图书馆

基因拷贝数与染色体位置对酵母表达乙肝病毒融合表面抗原SA-28基因的影响

生物工程学报 2000年第2期16卷 124-128页

作者：潘辉高向东王飞袁汉英李育阳复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

应用FLP重组酶介导的染色体定点整合技术,将带有不同拷贝数的乙肝病毒融合表面抗原SA28基因表达单元的质粒整合在酵母不同的染色体位点,并测定了SA28基因的表达情况,初步研究了基因拷贝数与染色体位置对酵母表达外源基因的影响。结果表... 详细信息

应用FLP重组酶介导的染色体定点整合技术,将带有不同拷贝数的乙肝病毒融合表面抗原SA28基因表达单元的质粒整合在酵母不同的染色体位点,并测定了SA28基因的表达情况,初步研究了基因拷贝数与染色体位置对酵母表达外源基因的影响。结果表明SA28基因在HIS3位点整合时的表达水平随基因拷贝数的增加而提高,遵循基因剂量效应;在某些染色体位点整合时,插入方向对其表达有不同程度的影响,呈现出明显的染色体极性效应。

关键词：酵母基因拷贝数染色体位置效应表达

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人肿瘤坏死因子可溶性受体I cDNA的克隆及其在原核和真核细胞中的表达

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复旦学报（自然科学版） 1998年第2期37卷 129-134页

作者：修梅朱琛戴卫列王顺友赵寿元李昌本复旦大学遗传工程国家重点实验室上海

以人的胎盘总ＲＮＡ为模板，用ＲＴ－ＰＣＲ的方法，获得人肿瘤坏死因子可溶性受体Ｉ（ｓｈＴＮＦＲ－Ｉ）的ｃＤＮＡ，并对其进行全序列分析，在此基础上构建了原核及真核的表达载体。

关键词：人肿瘤坏死因子可溶性受体免疫系统无性系

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不同长度马铃薯GBSS基因启动子的块茎专一性表达的初报

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复旦学报（自然科学版） 1998年第4期37卷 559-563页

作者：宋东光黄大庆王光清汪训明复旦大学遗传工程国家重点实验室

将0．4，0．8，1．6，2．9kbGBSS基因的5＇侧翼区与GUS基因融合，构建了双元表达载体．0．8kbGBSS－GUS通过基因枪转化法在块茎切片中获得了瞬间表达．已将上述构建体通过农杆菌转化法导入了马铃薯．X－Gluc染色及PCR结果均证实已获得... 详细信息

将0．4，0．8，1．6，2．9kbGBSS基因的5＇侧翼区与GUS基因融合，构建了双元表达载体．0．8kbGBSS－GUS通过基因枪转化法在块茎切片中获得了瞬间表达．已将上述构建体通过农杆菌转化法导入了马铃薯．X－Gluc染色及PCR结果均证实已获得转基因再生植株．在离体诱导块茎中，2．9，1．6，0．4kbGBSS启动子驱动的GUS活性均明显高于茎段，高出1～15倍；1．6，2．9kbGBSS启动子驱动的GUS活性则大大高于0．8，0．4kbGBSS启动子驱动的GUS活性；其中2．9kb的GBSS启动子显示最强烈的块茎表达专一性．

关键词：马铃薯 GBSS GUS 块茎专一表达基因表达启动子

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尿路上皮癌诊断中DNA倍体分析和尿脱落细胞学检查的临床价值

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临床与实验病理学杂志 2015年第6期31卷 636-639页

作者：唐燕余龙复旦大学遗传工程国家重点实验室

目的探讨DNA倍体分析和尿脱落细胞学检查对尿路上皮癌诊断的临床价值,寻找早期诊断尿路上皮癌的理想方法。方法随机收集121例尿路上皮癌患者的尿液标本作为实验组,另取95例良性血尿非肿瘤患者的尿液标本作为对照组,分别进行尿脱落细胞... 详细信息

目的探讨DNA倍体分析和尿脱落细胞学检查对尿路上皮癌诊断的临床价值,寻找早期诊断尿路上皮癌的理想方法。方法随机收集121例尿路上皮癌患者的尿液标本作为实验组,另取95例良性血尿非肿瘤患者的尿液标本作为对照组,分别进行尿脱落细胞学检查和DNA倍体分析。结果尿脱落细胞学检查的敏感性高于DNA倍体分析,但特异性低于DNA倍体分析。尿脱落细胞学检查敏感性为85.10%,特异性为76.80%;DNA倍体分析敏感性为81.80%,特异性为81.10%。121例中,膀胱癌103例,上尿路上皮癌18例。对于不同分型的尿路上皮癌,两种方法在高级别肿瘤中均有较好的敏感性,尤其是DNA倍体分析在浸润性膀胱癌和上尿路上皮癌的诊断中具有极好的敏感性,均>94%。结论 DNA倍体分析结合尿脱落细胞学检查,可大大提高尿路上皮癌检测的特异性,以及增加对浸润性膀胱癌及上尿路上皮癌诊断的灵敏度,是对尿路上皮癌检测方法的有利补充。

关键词：膀胱肿瘤尿路上皮癌 DNA倍体尿脱落细胞学检查诊断

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人促血小板生成素受体c-Mpl编码区全长cDNA的克隆及其稳定表达的细胞株的构建

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生物工程学报 2000年第3期16卷 320-323页

作者：赵新燕蔡静莉戴卫列周伟国李昌本赵寿元复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

以人HEL细胞总RNA为模板 ,采用RT PCR方法扩增了人促血小板生成素受体c Mpl编码区全长1 9kbcDNA ,测序结果表明与已报道的序列一致。然后构建了c mpl的 pcDNA3表达载体 pcMPL ,转染不表达c mpl的K5 6 2细胞后 ,经G418抗性筛选 ,Northern... 详细信息

以人HEL细胞总RNA为模板 ,采用RT PCR方法扩增了人促血小板生成素受体c Mpl编码区全长1 9kbcDNA ,测序结果表明与已报道的序列一致。然后构建了c mpl的 pcDNA3表达载体 pcMPL ,转染不表达c mpl的K5 6 2细胞后 ,经G418抗性筛选 ,Northernblot和Southernblot检测证实获得稳定表达c mpl的细胞株。为进一步研究c Mpl的生物学功能提供有用的实验材料。

关键词： K562细胞表达 TPO c-MpL RT-PCR 基因克隆

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人TNFα分子N末端、C末端结构的修饰与生物活性的关系

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Acta Genetica Sinica 1995年第5期22卷 329-335页

作者：常金丽李新何晓龙吕群喻红蔡武城李昌本赵寿元复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室

通过对人肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒα）──ＴＮＦα分子的Ｎ末端第４、５、１０位以及Ｃ末端第１５７位氨基酸的修饰，由ＴＮＦα原型序列Ｓｅｒ（４）、Ｓｅｒ（５）、……Ａｓｐ（１０）改为Ｃｙｓ、... 详细信息

通过对人肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒα）──ＴＮＦα分子的Ｎ末端第４、５、１０位以及Ｃ末端第１５７位氨基酸的修饰，由ＴＮＦα原型序列Ｓｅｒ（４）、Ｓｅｒ（５）、……Ａｓｐ（１０）改为Ｃｙｓ、Ｔｈｒ、……Ａｒｇ，Ｃ末端１５７位Ｌｅｕ改为Ｐｈｅ，研究了ＴＮＦα分子结构改变与其生物活性的关系。从ＴＮＦα分子的一级结构和高级结构得知，分子的Ｎ末端可能参与对受体的识别，而Ｃ末端对稳定ＴＮＦα分子的活性形式──三聚体起主要作用，因而将分子修饰部位选在Ｎ、Ｃ末端。采用ＰＣＲ定位突变方法，构建了ＴＮＦα衍生物１０（ＴＮＦαｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ１０－ＴＮＦａＤ１０）的表达载体，观察两个部位数个氨基酸改变后对整个ＴＮＦα分子生物活性的影响。实验结果表明：Ｎ、Ｃ末端数个氨基酸的置换并未明显提高ＴＮＦα的表达量，但却提高了其体外细胞毒功能，为原型ＴＮＦα的１０倍左右。原因可能系Ｎ末端第４位由丝氨酸改成半胱氨酸，使ＴＮＦαＤ１０的表达产物呈多聚体状态。ＨＰＬＣ检测示表达产物为三聚体单一峰，在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳还原条件下仍可见到三聚体的蛋白条带为以上推测提供了证据。此外，由于Ｃ末端第１５７位由原型ＴＮ?

关键词：肿瘤坏死因子衍生物药物结构修饰基因

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鼠心钠素基因在大肠杆菌中的融合表达及产物的分离纯化

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复旦学报（自然科学版） 1998年第4期37卷 428-432页

作者：罗红良严维耀郑兆鑫复旦大学遗传工程国家重点实验室

将克隆有化学合成的鼠心钠素基因的质粒pXZ－α－ANP－590改建成质粒pLH280，转化大肠杆菌表达融合蛋白LacZ＇－280－α－ANP．当带有此质粒的最适宿主菌JM101在37℃，270r／min摇床培养14h，融合蛋白表达量可达最高值．利用超声波破碎... 详细信息

将克隆有化学合成的鼠心钠素基因的质粒pXZ－α－ANP－590改建成质粒pLH280，转化大肠杆菌表达融合蛋白LacZ＇－280－α－ANP．当带有此质粒的最适宿主菌JM101在37℃，270r／min摇床培养14h，融合蛋白表达量可达最高值．利用超声波破碎菌体；通过盐酸胍抽提融合蛋白；透析除去盐酸胍后用溴化氰裂解融合蛋白；SephadexG－25柱层析后收集样品；各峰样品冷冻干燥后进行放免活性测定．结果说明第一峰样品具有放免活性．HPLC分析和生物活性测定均证明此分离样品与标准心钠素样品基本一致．处理1L携带质粒pLH280的发酵液（D（600）＝2．0）可得1．2mg有活性的α－ANP，较之携带质粒pXZ－α－ANP－590的发酵液（D（600）＝2．0）的α－ANP产量提高了4倍．

关键词：鼠心钠素 LacZ基因融合蛋白表达大肠杆菌

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NGAL基因在原发性肝癌中的表达及其功能分析

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复旦学报（自然科学版） 2012年第1期51卷 91-98页

作者：李林国周同侯永敏复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200433

NGAL基因是Lipocalin家族成员,与MMP9的功能密切相关,在乳腺癌、食管癌等多种恶性肿瘤中异常表达,为了研究其在原发性肝癌中的表达及功能,通过荧光实时定量PCR法检测了NGAL基因在23对肝癌组织标本中的表达情况.结果显示:在12例肝癌组织... 详细信息

NGAL基因是Lipocalin家族成员,与MMP9的功能密切相关,在乳腺癌、食管癌等多种恶性肿瘤中异常表达,为了研究其在原发性肝癌中的表达及功能,通过荧光实时定量PCR法检测了NGAL基因在23对肝癌组织标本中的表达情况.结果显示:在12例肝癌组织中NGAL显著上调表达,占总样本数的52.17%(P<0.05),提示了NGAL基因的表达水平可能与肝癌的发生发展过程有关.通过构建绿色荧光蛋白融合表达载体,用脂质体法转化肝癌细胞株SMMC-7721进行瞬时表达.细胞周期实验显示NGAL的表达可促使SMCC-7721细胞从G1期向S期转化,转化NGAL的细胞中S期细胞显著增多(P<0.05),提示其可能具有促进肝癌细胞生长的功能;细胞凋亡实验发现NGAL的表达可显著抑制低血清诱导下的细胞凋亡率(P<0.05),提示其可能参与抑制肝癌细胞的凋亡.

关键词：原发性肝细胞癌 NGAL 荧光实时定量PCR 细胞周期细胞凋亡

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人类新基因SEC15L3 cDNA的鉴定

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复旦学报（自然科学版） 2008年第3期47卷 341-346,353页

作者：方伟群刘凡郑丹顾少华季朝能复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200433

从人胎脑cDNA文库中克隆到1条新的Sec15基因SEC15L3 cDNA,比已报道的SEC15L1(NM-019053)少4个外显子,并已提交GenBank,登录号为***-PCR和荧光定量PCR实验显示该基因在胰腺、脾脏、胸腺、前列腺和睾丸几个组织中表达量较高,而且与SEC15L... 详细信息

从人胎脑cDNA文库中克隆到1条新的Sec15基因SEC15L3 cDNA,比已报道的SEC15L1(NM-019053)少4个外显子,并已提交GenBank,登录号为***-PCR和荧光定量PCR实验显示该基因在胰腺、脾脏、胸腺、前列腺和睾丸几个组织中表达量较高,而且与SEC15L1的组织表达谱有明显差异.生物信息学方法模拟SEC15L3蛋白,并与SEC15L1比较,结果显示两者有不同的高级结构,已推测出两者可能是不同ex-ocyst的成分,并且在不同组织中行使不同功能.

关键词： Sec15 Sec15样蛋白3 exocyst 胞吐作用

来源：评论

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人干细胞生长因子的克隆与表达

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复旦学报（自然科学版） 1998年第2期37卷 221-224页

作者：崔剑平徐人尔陆诗华陈春妹应蓓蓓赵寿元李昌本复旦大学遗传工程国家重点实验室上海

干细胞生长因子（ＳｔｅｍＣｅｌｌＦａｃｔｏｒ，ＳＣＦ）能够刺激造血干细胞生长，并与多种细胞因子有协同作用．研究中，运用ＰＣＲ手段，从中国人胎肝ｍＲＮＡ中扩增得到编码人ＳＣＦ全部胞外部分的ｃＤＮＡ．经测序鉴定后，... 详细信息

干细胞生长因子（ＳｔｅｍＣｅｌｌＦａｃｔｏｒ，ＳＣＦ）能够刺激造血干细胞生长，并与多种细胞因子有协同作用．研究中，运用ＰＣＲ手段，从中国人胎肝ｍＲＮＡ中扩增得到编码人ＳＣＦ全部胞外部分的ｃＤＮＡ．经测序鉴定后，将其克隆入表达载体ｐＲＳＥＴ－Ｃ，并在大肠杆菌ＤＥ３菌株进行表达．Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实表达产物确为人ＳＣＦ，并对其包涵体作了变性、复性的初步研究．该成果为ＳＣＦ的产品化打下了基础，并将有助于其结构与功能的研究．

关键词：干细胞生长因子 PCR 无性系细胞因子

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