检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学科学院院刊 2010年第2期34卷 111-114页

作者：赵怡陈苏红刘志红王升启郝素珍山西医科大学微生物与免疫学教研室太原030001 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

目的研究5种国产病毒RNA提取试剂盒对甲型H1N1流感病毒检测的相对效率、耗时和成本,为各级实验室甲型H1N1流感病毒核酸提取检测提供技术参考。方法对滴度为105pfu/ml的甲型H1N1流感病毒参考株悬液作10-1~10-4系列稀释,采用德国Qiagen公... 详细信息

目的研究5种国产病毒RNA提取试剂盒对甲型H1N1流感病毒检测的相对效率、耗时和成本,为各级实验室甲型H1N1流感病毒核酸提取检测提供技术参考。方法对滴度为105pfu/ml的甲型H1N1流感病毒参考株悬液作10-1~10-4系列稀释,采用德国Qiagen公司的QIAamp Viral RNAMini Kits和5种国产试剂盒对上述样本进行核酸提取,用复合探针实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）对其提取效率进行平行检测,分析5种国产试剂盒与QIAamp Viral RNA Mini Kits提取效率的差异,同时对试剂盒提取时间及价格进行比较。结果对不同稀释度流感病毒样本的提取检测,各试剂盒存在显著差异,均以QIAamp Viral RNA Mini Kits提取效率最高。综合提取效率、耗时及成本等因素考虑,B试剂盒性价比最高。结论不同核酸提取试剂盒对病毒核酸的提取,可影响RT-PCR的检测效果,各实验室应根据自身条件及试验目的,合理选择性价比较高的试剂盒对临床样本进行核酸提取。

关键词：流感病毒A型,H1N1亚型 RNA病毒逆转录聚合酶链反应

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人表皮生长因子慢病毒载体的构建及表达

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郑州大学学报（医学版） 2010年第4期45卷 603-606页

作者：张丽梅冯龙张艳敏马晶赵国强安玉会鲍玉洲河南省眼科研究所分子生物室郑州450003 郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001

目的:构建人表皮生长因子(hEGF)慢病毒(LV)载体。方法:酶切并收集pcDNA3.1-hEGF载体中的hEGF目的基因片段,克隆进入含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体内,将所得重组体LV-GFP-hEGF与辅助载体pΔ8.2和pVSVG共同转染人胚肾293T细胞,... 详细信息

目的:构建人表皮生长因子(hEGF)慢病毒(LV)载体。方法:酶切并收集pcDNA3.1-hEGF载体中的hEGF目的基因片段,克隆进入含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体内,将所得重组体LV-GFP-hEGF与辅助载体pΔ8.2和pVSVG共同转染人胚肾293T细胞,进行病毒包装。收集上清液,按按10-1～10-7倍比稀释后培养,检测病毒滴度;裂解细胞,进行Western Blot分析。结果:PCR扩增、HindⅢ酶切鉴定及测序结果均证实LV-GFP-hEGF构建成功。将LV-GFP-hEGF转染293T细胞,紫外光下检测可见绿色荧光;LV滴度达5×108TU/mL,转染效率>75%,Western Blot证实转染细胞可表达hEGF。结论:成功构建了含有GFP报告基因的hEGF慢病毒载体,包装后的慢病毒可在293T细胞内高效表达。

关键词：人表皮生长因子慢病毒载体基因构建

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嗜热微生物及在高温生物冶金过程中的应用

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微生物学通报 2016年第5期43卷 1101-1112页

作者：刘丽君刘双江姜成英西安医学院基础医学部病原生物学教研室陕西西安710021 中国科学院微生物研究所微生物资源前期开发国家重点实验室北京100101 环境微生物技术联合实验室北京100101

嗜热微生物包括中度嗜热微生物和极端嗜热微生物,主要栖息于热泉、火山口、海底热液喷口、高温反应器以及工厂高温废水排放区等自然或人为产生的高温环境中。它们可以生活在40-80°C、甚至更高的温度中,其中有些具备嗜酸性及特殊的... 详细信息

嗜热微生物包括中度嗜热微生物和极端嗜热微生物,主要栖息于热泉、火山口、海底热液喷口、高温反应器以及工厂高温废水排放区等自然或人为产生的高温环境中。它们可以生活在40-80°C、甚至更高的温度中,其中有些具备嗜酸性及特殊的代谢类型,在高温生物冶金过程中具有应用潜力。高温生物冶金较传统中温生物冶金更具优势,其能浸出某些难处理矿、解决浸矿过程的钝化问题,以及提高浸出效率等,目前已引起了生物冶金工业的重视。本文概述了应用于生物冶金的主要嗜热微生物的生理特点、耐热机制以及对铁、铜和砷等离子的耐受机制,进一步介绍了嗜热微生物在高温生物冶金中的发展及应用。

关键词：嗜热微生物生物冶金高温生物冶金耐热机制金属耐受机制

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IL_2－HBVPre－S融合基因的克隆、表达及生物学活性初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 1996年第2期12卷 12-16页

作者：杨晓峰马文煜姜绍谆逮好英第四军医大学微生物学教研室军事医学科学院基础医学研究所分子遗传教研室

ＩＬ＿２－ＨＢＶＰｒｅ－Ｓ融合基因的克隆、表达及生物学活性初步鉴定杨晓峰，马文煜，姜绍谆，逮好英（第四军医大学微生物学教研室，西安７１００３２）ＩＬ２是最早发现的淋巴因子之一，它通过与激活的Ｔ淋巴细胞表面特异性受体的... 详细信息

ＩＬ＿２－ＨＢＶＰｒｅ－Ｓ融合基因的克隆、表达及生物学活性初步鉴定杨晓峰，马文煜，姜绍谆，逮好英（第四军医大学微生物学教研室，西安７１００３２）ＩＬ２是最早发现的淋巴因子之一，它通过与激活的Ｔ淋巴细胞表面特异性受体的相互作用，在激活的Ｔ淋巴克隆中起着...

关键词： αA-干扰素前S蛋白融合基因融合蛋白克隆

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人肿瘤坏死因子受体的配体胞外段的原核表达及分析

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生物工程学报 2009年第5期25卷 708-713页

作者：焦艳丽郑纺李晓霞王宝利郭善一天津医科大学代谢病医院内分泌研究所天津300070 天津医科大学基础医学院微生物学教研室天津300070

新近报道糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(GITRL)具有抑制前体破骨细胞的作用,故命名为Osteostat,为深入研究其功能和机制,本研究原核表达人GITRL胞外段并进行活性分析。利用限制性内切酶Eco31I获得大肠杆菌偏嗜性GITRL的胞外段... 详细信息

新近报道糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(GITRL)具有抑制前体破骨细胞的作用,故命名为Osteostat,为深入研究其功能和机制,本研究原核表达人GITRL胞外段并进行活性分析。利用限制性内切酶Eco31I获得大肠杆菌偏嗜性GITRL的胞外段cDNA序列,构建了基于pQE-30Xa的原核表达载体,并在M15[pREP4]菌株中经IPTG诱导表达带有His融合标签的GITRL重组蛋白,主要以包涵体形式存在。经体外包涵体变性、复性及纯化后,采用SDS-PAGE和Western blotting进行分析和鉴定。同时建立了报告基因技术检测GITRL重组蛋白生物活性的方法,简单便捷、灵敏而且周期短,利用此方法分析了重组GITRL胞外段表达蛋白的生物活性。

关键词： GITRL 原核表达报道基因偏嗜性限制性内切酶Eco31I

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登革2型病毒NS1-NS2a基因真核表达载体的构建及鉴定

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第三军医大学学报 2009年第6期31卷 557-559页

作者：陈炜王嘉丽高娜田衍平陈宗涛徐小峰张俊磊刘丽梅江雯安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的构建登革2型病毒NS1-NS2a基因真核表达质粒。方法RT-PCR扩增NS1-NS2a基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名... 详细信息

目的构建登革2型病毒NS1-NS2a基因真核表达质粒。方法RT-PCR扩增NS1-NS2a基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pRe-NS1-NS2a;重组质粒转染Vero细胞后,间接免疫荧光染色显示细胞质中有登革2型病毒特异性蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pRe-NS1-NS2a。

关键词：登革2型病毒 NS1-NS2a基因真核表达

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鼠衣原体肺部感染中自然杀伤细胞对白细胞介素-22产生及疾病进程的影响

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山东大学学报（医学版） 2016年第11期54卷 19-23页

作者：董晓婧李静赵蕾齐眉孙泽雨王红赵蔚明山东大学医学院医学微生物学教研室山东济南250012 山东大学齐鲁医院基础医学研究所山东济南250012

目的探究小鼠衣原体(Chlamydia)肺部感染中自然杀伤(NK)细胞对白细胞介素-22(IL-22)产生及疾病进程的影响。方法 36只小鼠分为实验组和对照组,每组18只。实验组小鼠尾静脉注射anti-asialo GM1,以封闭体内NK细胞,同时鼻吸入含鼠衣原体(Ch... 详细信息

目的探究小鼠衣原体(Chlamydia)肺部感染中自然杀伤(NK)细胞对白细胞介素-22(IL-22)产生及疾病进程的影响。方法 36只小鼠分为实验组和对照组,每组18只。实验组小鼠尾静脉注射anti-asialo GM1,以封闭体内NK细胞,同时鼻吸入含鼠衣原体(Chlamydia muridarum)的感染液;对照组小鼠尾静脉注射同型对照抗体,感染方法同实验组。每天记录小鼠体质量变化;分别于感染后6、12 d,检测小鼠肺部衣原体包涵体形成单位(IFU);实时荧光定量PCR、ELISA方法检测小鼠脾脏中IL-22的表达,细胞内细胞因子染色技术检测小鼠脾脏Th17细胞数量变化。结果与对照组相比,实验组小鼠肺部感染加重,体质量降低趋势加大、肺部IFU增加(P<0.05),脾脏中IL-22的mRNA和蛋白表达水平减少(P<0.05),且Th17细胞的百分比和绝对数量均降低(P<0.01)。结论 NK细胞封闭导致小鼠体内IL-22的表达降低、肺部感染加重,提示NK细胞与IL-22的表达存在相关性;NK细胞可通过促进IL-22的产生,从而增强机体抗衣原体感染的能力。

关键词：衣原体自然杀伤细胞白细胞介素-22

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沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ表达降钙素基因相关肽基因重组载体的构建与鉴定

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中华实验外科杂志 2014年第1期31卷 142-145页

作者：王义生李宁博李劲峰施佳辰孙俊魁李月白赵国强郑州大学第一附属医院骨科郑州大学骨科研究所河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室 450052 郑州大学基础医学院郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室微生物免疫教研室

目的构建与鉴定沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ（PPARγ）同时表达降钙素基因相关肽（CGRP）基因重组载体.方法选用pGFP-V-RS载体,将PPARγ小干扰RNA（siRNA）寡核苷酸靶序列连接入pGFP-V-RS载体,酶切鉴定及测序正确后得到重组载体... 详细信息

目的构建与鉴定沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ（PPARγ）同时表达降钙素基因相关肽（CGRP）基因重组载体.方法选用pGFP-V-RS载体,将PPARγ小干扰RNA（siRNA）寡核苷酸靶序列连接入pGFP-V-RS载体,酶切鉴定及测序正确后得到重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ;将CGRP片段与Mlu Ⅰ酶切,并与末端羟基化的线性质粒pGFP-V-RS重组连接,得到重组载体pGFP-V-RS-exCGRP.将获取的CGRP基因片段连接入线性化重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ,酶切鉴定及测序正确后得到重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP.收集第3代HEK-293细胞,将细胞分为4组：CON组：转染空载体pGFP-V-RS质粒,作为对照；SI组：转染重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ质粒；EX组：转染重组pGFP-V-RS-exCGRP质粒；DOU组：转染重组双基因载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP质粒.每组电极杯中加入5x106个细胞,并分别加入上述质粒2.5μl,给予直流电低压脉冲1次,时间15 ms.培养48 h后收集各组细胞,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）与Western blot检测细胞内PPAR、CGRP mRNA及蛋白的表达.结果重组双基因载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP经酶切鉴定及测序结果与设计完全一致.电转染HEK-293细胞后,DOU组细胞PPARγ基因呈低表达,PPARγmRNA与其蛋白的相对表达量为0.036±0.003、0.108 ±0.031,与EX组（0.156±0.014、0.778±0.103）及CON组（0.148±0.014、0.742 ±0.143）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,与SI组（0.054±0.005、0.135 ±0.039）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.DOU组细胞CGRP基因呈高表达,CGRP mRNA与其蛋白的相对表达量为1.144±0.106、1.244±0.184,与SI组（0.320±0.030、0.370±0.089）及CON组（0.444 ±0.041、0.274±0.062）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,与EX组（1.021 ±0.095、1.221±0.181）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论成功构建出沉默PPARγ基因并表达CGRP基因的重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP,能够有效阻断PPARγ基因表达,同时促进CGRP基因表达.

关键词： RNA干扰过氧化物酶体增殖子活化受体-γ 降钙素基因相关肽重组载体

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克隆的丙型肝炎病毒NS2基因中发现数个N端终止突变序列

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同济医科大学学报 2001年第5期30卷 401-403页

作者：冷彦陈秀珠叶嗣颖杜勇杜桂鑫王海涛华中科技大学同济医学院基础医学院微生物学教研室武汉430030 军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

探讨丙型肝炎病毒 ( HCV)准种在 NS2区的基因结构特征。利用逆转录 -巢式 PCR从一份 HCV慢性携带者的阳性血清及一份急性丙肝患者的血清中获得 HCV NS2全长 c DNA,将其克隆于 T载体 ,各随机挑取 5个阳性克隆进行序列测定。结果显示在克... 详细信息

探讨丙型肝炎病毒 ( HCV)准种在 NS2区的基因结构特征。利用逆转录 -巢式 PCR从一份 HCV慢性携带者的阳性血清及一份急性丙肝患者的血清中获得 HCV NS2全长 c DNA,将其克隆于 T载体 ,各随机挑取 5个阳性克隆进行序列测定。结果显示在克隆到的 HCV NS2全长基因中 ,慢性携带者该区序列有一个于 HCV多聚蛋白第 83 5位氨基酸的位置出现终止信号 ,丙肝患者该区序列有三个于第 83 5位氨基酸的位置出现终止信号 ,一个小于第 887位氨基酸的位置出现终止信号。在克隆到的 HCV NS2基因中存在多个 N端终止突变序列 ,提示 NS2

关键词：丙型肝炎病毒 NS2 基因结构 N端终止基因突变序列

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HBV重组抗原表位抗原性的研究

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免疫学杂志 2007年第2期23卷 163-165,171页

作者：潘云华周东霞李嘉琦陈元鼎大理学院基础医学院医学微生物学与免疫学教研室云南大理671000 中国医学科学院医学生物研究所中心实验室昆明650118

目的在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达HBV抗原表位,并对其抗原性进行研究。方法人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I位点,构建重组质粒,在原核pE... 详细信息

目的在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达HBV抗原表位,并对其抗原性进行研究。方法人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I位点,构建重组质粒,在原核pET系统(BL21细胞)中表达。以表达产物为包被抗原对其抗原性进行研究。结果嵌和蛋白与抗-HBs血清可发生特异性结合反应。结论在外源抗原表位表达系统中表达的HBV抗原表位具有良好的抗原性。

关键词： HBV 抗原表位抗原性 FHV-RNA2载体系统

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