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第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：王维王静刘春红 ITALIANI,Paola BORASCHI,Diana 马世平瞿涤中国药科大学中药药理教研室复旦大学上海医学院生物医学研究院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室病复旦大学上海医学院原微生物研究所医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室复旦大学上海医学院病原微生物研究所

目的:研究穿心莲内酯对小鼠天然免疫和适应性免疫应答的影响。方法:小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,经LPS诱导向M1活化或IL-4诱导向M2活化,同时以穿心莲内酯(10μg/ml)处理;利用real-time PCR检测巨噬细胞活化相关的M1和M2类细胞因子基因转... 详细信息

目的:研究穿心莲内酯对小鼠天然免疫和适应性免疫应答的影响。方法:小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,经LPS诱导向M1活化或IL-4诱导向M2活化,同时以穿心莲内酯(10μg/ml)处理;利用real-time PCR检测巨噬细胞活化相关的M1和M2类细胞因子基因转录水平(M1:IL-1β,IL-18,IL-12等;M2:IL-1Ra,IL-18B P,IL-10等),流式细胞术检测巨噬细胞活化及抗原提呈功能相关的细胞表面分子(CD40,CD80,CD86,MHC等)。用乙肝表面抗原(HBsAg)免疫小鼠,同时腹腔注射给予穿心莲内酯(1mg/kg);利用ELISA方法检测anti-HBsAg,ELISPOT法检测分泌IL-4的脾淋巴细胞数量。结果:穿心莲内酯单独处理巨噬细胞24小时后使其偏向M2活化(IL-12/IL-10比例从0.78降低至0.12),处理LPS激活的巨噬细胞抑制其向M1分化(IL-12/IL-10比例从30.97降低至10.77),处理IL-4激活的巨噬细胞促进其向M2分化(IL-12/IL-10比例从0.32降低至0.15);并且穿心莲内酯下调了LPS激活的巨噬细胞表面分子CD40,CD80,CD86及MHC I的表达。HBsAg免疫的小鼠给予穿心莲内酯后血清特异性抗体anti-HBs滴度下降,分泌IL-4的脾淋巴细胞数量减少。结论:穿心莲内酯可调节小鼠的天然免疫和适应性免疫应答,调节巨噬细胞的活化并减少特异性抗体的产生。

关键词：穿心莲内酯免疫调节巨噬细胞细胞因子抗体

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人星状病毒临床分离株感染CaCo-2细胞的转录组分析

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微生物与感染 2016年第2期11卷 79-86页

作者：吴立梦滕峥刘晶张曦崔晓娴林庆能吴寰宇袁政安谢幼华上海市疾病预防控制中心上海200336 复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

人星状病毒（human astrovirus,HAstV）是引起婴幼儿病毒性腹泻的重要病原之一,但其致病机制及与宿主相互作用的数据非常有限。本研究旨在了解HAstV感染细胞后对宿主基因在转录水平上的影响。首先,利用临床分离HAstV毒株感染CaCo-2细胞... 详细信息

人星状病毒（human astrovirus,HAstV）是引起婴幼儿病毒性腹泻的重要病原之一,但其致病机制及与宿主相互作用的数据非常有限。本研究旨在了解HAstV感染细胞后对宿主基因在转录水平上的影响。首先,利用临床分离HAstV毒株感染CaCo-2细胞,用实时定量反转录-聚合酶链反应（reverse transcriptasepolymerase chain reaction,RT-PCR）检测细胞培养上清液中的病毒总RNA,结果显示接种后9~24h病毒总RNA拷贝数明显增加。然后,利用转录组测序全面比较感染与未感染HAstV的CaCo-2细胞转录本,筛选两者间的差异表达基因;并应用KEGG信号通路富集性方法分析差异表达基因相关的信号通路。结果显示,差异基因富集在两条信号通路上（P〈0.05）,分别为轴突导向通路和Ras信号通路。本研究首次利用深度测序技术分析了HAstV感染对宿主基因在转录水平上的影响,为进一步研究HAstV致病机制等提供了方向。

关键词：人星状病毒转录组测序转录组

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上海市某三甲医院幽门螺杆菌耐药性和毒力与其生物膜形成能力的相关性研究

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微生物与感染 2017年第6期12卷 340-347页

作者：赵付菊胡玢婕王小飞孙启娟项平张艳梅瞿涤赵虎复旦大学附属华东医院检验科上海200040 复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032 复旦大学附属华东医院胃镜室上海200040

为探讨复旦大学附属华东医院(以下简称本院)分离培养的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)的耐药性、毒力和感染特征与其生物膜形成能力的相关性,收集2014年12月—2015年6月于本院消化内镜中心的胃活检组织标本及相应临床病例资料,分... 详细信息

为探讨复旦大学附属华东医院(以下简称本院)分离培养的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)的耐药性、毒力和感染特征与其生物膜形成能力的相关性,收集2014年12月—2015年6月于本院消化内镜中心的胃活检组织标本及相应临床病例资料,分离培养获得幽门螺杆菌,分析菌株的耐药性、毒力基因型、临床病例特征。结果显示,从胃活检组织样本中共分离培养28株幽门螺杆菌,对左氧氟沙星(levofloxacin,LEV)、甲硝唑(metronidazole,MTZ)和克拉霉素(clarithromycin,CLA)的耐药率分别为32%、75%和11%,未发现阿莫西林(amoxicillin,AMX)耐药。单一药物耐药17株(17/28,61%),双重耐药10株(10/28,36%)。毒力基因cagA、oipA和vacAs1检出率为100%,未检出vacAs2。基因型vacAs1 m1占39%(11/28),vacAs1 m2占61%(17/28);iceA1占54%(15/28),iceA2占21%(6/28),iceA1 A2占25%(7/28);dupA^+占36%(10/28)。28株菌株均能形成生物膜,但能力不尽相同。单因素及独立样本t检验分析显示,45~59岁、iceA1^+dupA^-基因型和甲硝唑敏感菌株形成生物膜的能力较强。结果提示,本院分离的幽门螺杆菌对甲硝唑耐药率最高,双重耐药不容忽视。菌株主要毒力基因型为cagA、oipA、vacAs1 m2。幽门螺杆菌的生物膜形成能力与患者年龄有关,45~59岁组较强;携带毒力基因iceA1的菌株生物膜形成能力强;dupA基因型及甲硝唑耐药与菌株生物膜形成呈负相关。

关键词：幽门螺杆菌生物膜形成耐药毒力基因

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汉坦病毒核蛋白核心区域高效表达及产物鉴定

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上海预防医学 2007年第5期19卷 233-234页

作者：周欣李燕婷周妍瞿涤复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部重点实验室上海200032 上海市疾病预防控制中心上海200336

汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)的主要病毒,汉坦病毒的基因由L、M、S三个片段构成,分别编码病毒RNA聚合酶,囊膜核蛋白G1和G2及核衣壳蛋白(简称核蛋白,Nucleocapsid Protein,NP)。血清学研究表明,汉坦病毒核蛋白具有很强的抗原性和... 详细信息

汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)的主要病毒,汉坦病毒的基因由L、M、S三个片段构成,分别编码病毒RNA聚合酶,囊膜核蛋白G1和G2及核衣壳蛋白(简称核蛋白,Nucleocapsid Protein,NP)。血清学研究表明,汉坦病毒核蛋白具有很强的抗原性和免疫原性,同时NP抗原可以与汉坦病毒内的多种血清型病毒的免疫血清产生交叉反应,表明汉坦病毒的NP具有共同的抗原决定族。有鉴于此,我们对核蛋白的核心区域进行表达和纯化,并用SDS-PAGE和Western-Blotting对重组核蛋白进行鉴定,为其应用于诊断抗原提供技术依据。[第一段]

关键词：重组核蛋白汉坦病毒产物鉴定 Western-Blotting 高效表达 SDS-PAGE 肾综合征出血热 Protein

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干扰素治疗慢性乙肝患者外周血调节性T细胞动态变化和临床意义

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实用临床医药杂志 2012年第7期16卷 13-17页

作者：施敏成玉明李柏胜沈思兰刘岩红钱方兴上海市长宁区中心医院消化科上海200335 复旦大学上海医学院分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海201058

目的探讨干扰素抗病毒治疗过程中慢性乙肝患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)的变化及其临床意义。方法采集干扰素抗病毒治疗的CHB患者46例外周血,在治疗前及治疗后12、24、36、48周,停药后24周时,分别以流式细胞仪检测外周... 详细信息

目的探讨干扰素抗病毒治疗过程中慢性乙肝患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)的变化及其临床意义。方法采集干扰素抗病毒治疗的CHB患者46例外周血,在治疗前及治疗后12、24、36、48周,停药后24周时,分别以流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Treg比例,实时荧光定量RT-PCR检测血清HBV-DNA载量,酶联免疫吸附法检测HBV标志物,全自动生化分析仪检测ALT水平。结果在46例CHB患者中,完全应答的13例患者CD4+CD25+Treg频率在12、24、36、48周及停药后24周时分别为(4.16±0.64)%、(3.98±0.75)%、(3.70±0.55)%、(3.44±0.48)%、(3.07±0.48)%,呈逐步下降趋势,明显低于治疗前(5.73±0.62)%(P<0.01)。部分应答的18例患者CD4+CD25+Treg频率在12、24、36、48周及停药后24周时分别为(4.98±0.62)%(、4.50±0.54)%、(4.10±0.64)%、(4.02±0.64)%(、3.82±0.47)%,呈逐步下降趋势,明显低于治疗前(5.84±0.68)%(P<0.01)。无应答的15例患者CD4+CD25+Treg频率较治疗前无明显变化。完全应答、部分应答组患者Treg频率在12、24、36、48周及停药后24周时与无应答组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗24、48周,停药后24周时,HBeAg阴转率分别为10.8%、26.1%、28.3%,发生HBeAg血清学转换者在治疗12周时CD4+CD25+Treg比例明显下降。结论本实验初步认为,干扰素抗病毒治疗过程中及治疗后,有应答的CHB患者的外周血CD4+CD25+Treg频率下降。治疗早期CD4+CD25+Treg比例下降的患者HBeAg血清学转换率可能更高。

关键词：乙型肝炎 CD4+CD25+调节性T细胞干扰素

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DOTS-Plus:控制耐多药结核病的有力武器

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上海预防医学 2006年第5期18卷 225-226页

作者：沈鑫梅建高谦上海市疾病预防控制中心上海200336 复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室上海200032

结核病仍然是全球最为严重的传染病之一.据世界卫生组织(WHO)估计,全球约1/3的人口感染结核,同时,每年新发活动性结核超过800万,约有200万人死于结核病.WHO推荐DOTS(Directly Observed Treatment,short-course,直接观察下短程督导化疗)... 详细信息

结核病仍然是全球最为严重的传染病之一.据世界卫生组织(WHO)估计,全球约1/3的人口感染结核,同时,每年新发活动性结核超过800万,约有200万人死于结核病.WHO推荐DOTS(Directly Observed Treatment,short-course,直接观察下短程督导化疗)策略以控制结核病的蔓延.DOTS虽然可以治愈85%以上的结核病人,但是短程化疗方案却不能完全治愈耐多药结核病(MDR-TB,至少同时对利福平和异胭肼耐药)患者,其治愈率一般不超过60%,即使在初治患者中也仅为40%左右,复治患者只有20%[2].因此,有相当一部分耐多药结核病人长期具有传染性,引起耐多药结核病的传播.与此同时,全球耐药及耐多药结核病的发病形势却十分严峻.据世界卫生组织/国际防痨与肺部疾病联盟(WHO/IUATLD)全球结核病耐药监测项目报告,虽然全球平均耐多药率仅为1%,但是在许多结核病高发地区,耐多药率却高达10%以上[3].值得注意的是,在占全球40%结核病患者的中国和印度,耐多药率也十分严重.在印度,新病人中有3.4%是耐多药患者,而据第四次全国结核病流调发现,我国的耐多药率更是高达10%以上.耐多药结核病已对全球结核病控制构成了严重的威胁.因此,除了DOTS策略外,必须在结核耐多药率较高的国家和地区采取另一种特殊而有效的治疗策略,以防止耐多药结核的传播.为了达到这一目的,WHO于1998年提出了DOTS-Plus策略。[第一段]

关键词：耐多药结核病结核病控制结核病患者世界卫生组织武器短程督导化疗短程化疗方案耐多药率 DOTS策略结核病人

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汉坦病毒S片段荧光定量PCR参考标准品的构建

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上海预防医学 2006年第9期18卷 432-434页

作者：周欣李燕婷沈荣明沈微娟瞿涤复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部重点实验室上海200032 上海市疾病预防控制中心上海200336

[目的]构建汉坦病毒S片段标准品,用于实时荧光定量PCR检测汉坦病毒。[方法]对S片段基因进行序列分析,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针,提取病人总RNA,逆转录为cDNA,经PCR扩增,产物纯化后与PMD 18-T Vector连接,转化到大... 详细信息

[目的]构建汉坦病毒S片段标准品,用于实时荧光定量PCR检测汉坦病毒。[方法]对S片段基因进行序列分析,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针,提取病人总RNA,逆转录为cDNA,经PCR扩增,产物纯化后与PMD 18-T Vector连接,转化到大肠杆菌DH5α,筛选得到标准品的质粒,提取质粒并进行定量。[结果]重组S片段基因质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长,表明基因已成功克隆。以不同稀释水平的标准品进行扩增,统计学分析显示C t值与标准品浓度的对数存在良好线性关系,回归系数在0.99以上。成功制备并获得稳定的S片段重组质粒。[结论]该方法能大量制备质粒标准品,如何进行荧光RT-PCR条件的优化是关键所在。

关键词： S片段实时荧光定量PCR 标准品

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肿瘤坏死因子α突变型斑马鱼在海分枝杆菌感染中的应用研究

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微生物与感染 2017年第3期12卷 156-163页

作者：谢玲玲王风华王德成赵超彭刚牛辰复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032 复旦大学脑科学研究院上海200032 三峡大学医学院宜昌443002

肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)作为重要的炎性细胞因子,在类风湿关节炎、感染性休克等疾病的发病中起重要作用。为探究TNF-α在宿主抵抗海分枝杆菌感染中的作用,本研究采用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋... 详细信息

肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)作为重要的炎性细胞因子,在类风湿关节炎、感染性休克等疾病的发病中起重要作用。为探究TNF-α在宿主抵抗海分枝杆菌感染中的作用,本研究采用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9[clustered regularly interspaced short palindromic repeat(CRISPR)/CRISPR-associated protein 9(Cas9),CRISPR/Cas9]技术,使野生型斑马鱼TNF-α基因发生突变,成功构建并筛选出含有移码突变的TNF-α突变型(TNF-α-/-)斑马鱼。利用原位杂交技术,发现TNF-α-/-斑马鱼中TNF-αmRNA表达水平显著降低。与野生型斑马鱼相比,海分枝杆菌在TNF-α-/-斑马鱼体内扩散和增殖更显著。结果提示,本研究成功构建TNF-α-/-斑马鱼,有助于深入探究TNF-α在斑马鱼抵抗海分枝杆菌感染中的作用及其免疫调节机制。

关键词：成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9 肿瘤坏死因子α 突变型斑马鱼原位杂交细菌感染

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采用基因分型技术分析家庭内结核病的传播

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中华结核和呼吸杂志 2008年第5期

由于结核病的潜伏期较长,传统的流行病学方法对其传染源的追踪和传播规律的认识有一定的局限.20世纪90年代以来,用基因分型技术鉴别不同的结核分枝杆菌,并与传统流行病学结合而建立的分子流行病学方法,使人们对结核病的传播有了新的认识...

由于结核病的潜伏期较长,传统的流行病学方法对其传染源的追踪和传播规律的认识有一定的局限.20世纪90年代以来,用基因分型技术鉴别不同的结核分枝杆菌,并与传统流行病学结合而建立的分子流行病学方法,使人们对结核病的传播有了新的认识.我们采用基因分型法对一个家庭内结核病传播病例进行分析,探讨传统流行病学与分子生物学对于传染源判定的差异。

关键词：

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乙型肝炎病毒与干扰素在宿主细胞相互作用的研究

乙型肝炎病毒与干扰素在宿主细胞相互作用的研究

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首届北京地坛感染病学术会议

作者：袁正宏医学分子病毒学教育部卫生部重点实验室复旦大学上海医学院上海市公共卫生中心复旦大学生物医学研究院

@@目前Ⅰ型干扰素（下简称干扰素）已被临床广泛用于慢性乙型肝炎的治疗，但尚存在治疗效果有限、目前仍不清楚HBV与Ⅰ型干扰素在细胞内如何相互作用以拮抗干扰素的治疗等缺点。

关键词：乙型肝炎病毒干扰素宿主细胞拮抗干扰素

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