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四川大学学报（医学版） 2019年第3期50卷 298-304页

作者：曹媛媛杨桂枝龚艳菊赵佳冯颖郑翔周雪四川大学华西基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室成都610041

目的研究亨廷顿蛋白相关蛋白1(Huntingtin-associated protein 1,Hap1)基因对成纤维细胞增殖的影响。方法体外分离培养获得Hap1基因敲除(Hap1^(-/-))的原代成纤维细胞,鉴定后采用EdU增殖实验、细胞周期(流式细胞术)检测验证Hap1敲除后... 详细信息

目的研究亨廷顿蛋白相关蛋白1(Huntingtin-associated protein 1,Hap1)基因对成纤维细胞增殖的影响。方法体外分离培养获得Hap1基因敲除(Hap1^(-/-))的原代成纤维细胞,鉴定后采用EdU增殖实验、细胞周期(流式细胞术)检测验证Hap1敲除后成纤维细胞增殖的改变;将野生型和Hap1^(-/-)成纤维细胞送转录组测序筛选增殖相关基因,实时荧光定量PCR(qPCR)验证相关基因表达水平的改变。对小鼠进行皮肤损伤造模检测Hap1敲减(Hap1^(+/-))小鼠皮肤损伤修复情况;PCNA免疫组化染色检测损伤修复过程中成纤维细胞的增殖水平。结果成功培养原代Hap1^(-/-)成纤维细胞;与野生型成纤维细胞相比,Hap1^(-/-)成纤维细胞EdU阳性比例减少,进入S期的细胞比例减少;原代成纤维细胞转录组测序筛选出Cdc25C、E2f7、E2f8和Ccl5四个差异表达的增殖相关基因,qPCR验证发现E2f7在Hap1敲除后表达增多。小鼠皮肤损伤结果显示,Hap1^(+/-)小鼠伤口面积较相同时间点野生型小鼠伤口面积大且愈合速度减慢,成纤维细胞增殖阳性密度低于野生型小鼠。结论 Hap1可能通过抑制细胞周期负性调节因子E2f7的表达对成纤维细胞增殖起正向调节作用,其缺失将抑制成纤维细胞进入S期,从而减少细胞增殖,影响伤口修复。

关键词：亨廷顿蛋白相关蛋白1 成纤维细胞增殖损伤修复

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成年大鼠脑桥三叉神经束局部脱髓鞘诱发三叉神经痛样行为

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陆军军医大学学报 2024年第17期46卷 1943-1950页

作者：文菊梅齐建国四川大学华西基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室成都610041

目的探究成年大鼠脑桥三叉神经束(pontine trigeminal tract,PTT)局部脱髓鞘能否诱发三叉神经痛样行为。方法利用脑立体定位微量注射技术向250~270 g雄性SD大鼠PTT区域注射1%溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)或1×PBS,... 详细信息

目的探究成年大鼠脑桥三叉神经束(pontine trigeminal tract,PTT)局部脱髓鞘能否诱发三叉神经痛样行为。方法利用脑立体定位微量注射技术向250~270 g雄性SD大鼠PTT区域注射1%溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)或1×PBS,分别建立PTT脱髓鞘模型组(LPC组)和对照组。通过髓鞘荧光染色评估PTT区域脱髓鞘改变情况。采用行为学实验检测大鼠缩头反应机械刺激阈值、单侧眼睑缩窄时间和快速抚面次数。通过腹腔注射给予大鼠卡马西平(50 mg/kg)药物处理,评估其行为学改变。结果以Bregma为坐标原点,于前后径(axterior-posterior,AP)-9.86 mm、内外径(medial-lateral,ML)0 mm和背腹径(dorsal-ventral,DV)0 mm处左侧18°倾斜脑立体定位仪的操作臂,使玻璃微电极下行9.22 mm后,以250 nL/min的速度注射250 nL的1%LPC,能够稳定可靠地建立成年大鼠PTT局部脱髓鞘模型。髓鞘荧光染色结果显示成年大鼠PTT局部脱髓鞘模型中脱髓鞘峰点为造模后第7天。行为学实验发现,与对照组相比,引发LPC组大鼠缩头反应的Air-puff气体刺激阈值和von Frey纤维丝刺激阈值显著降低(P<0.01);微量注射后第7天,LPC组大鼠的左侧单侧眼睑缩窄时间和快速抚面次数在不同强度的机械刺激下均显著增加(P<0.01)。卡马西平可显著减少机械刺激触发的左侧单侧快速抚面次数(P<0.01)。结论成年大鼠PTT局部脱髓鞘可以诱发三叉神经痛样行为。

关键词：三叉神经痛脑桥三叉神经束脱髓鞘溶血磷脂酰胆碱

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人参多糖对移植性人白血病模型小鼠作用观察

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第三军医大学学报 2006年第7期28卷 677-680页

作者：陈地龙李静刘永刚王亚平王建伟郑敏姜蓉重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室

目的建立重度联合免疫缺陷（SCID）小鼠人白血病模型,观察人参多糖在体内对白血病细胞的药理学作用.方法在SCID小鼠尾静脉分别接种K562细胞建立SCID小鼠人白血病模型,应用组织细胞化学、RT-PCR、流式细胞术、组织病理监测在给予人参多... 详细信息

目的建立重度联合免疫缺陷（SCID）小鼠人白血病模型,观察人参多糖在体内对白血病细胞的药理学作用.方法在SCID小鼠尾静脉分别接种K562细胞建立SCID小鼠人白血病模型,应用组织细胞化学、RT-PCR、流式细胞术、组织病理监测在给予人参多糖前后白血病模型SCID小鼠的外周血、骨髓、肝、脾中的白血病细胞.结果 SCID小鼠人白血病模型外周血象在疾病早期无明显变化,第18天白细胞数略有升高,光镜下可检测到1%～4%人白血病细胞,病程后期,白细胞明显增高,血涂片检查人白血病细胞占10%;经GPS注射后,SCID小鼠一般状况明显好于对照组,其肺、肾等脏器的炎症及病理变化减轻.结论人参多糖在体内能有效地治疗髓系白血病,且未发现有明显的毒副作用.

关键词：人参多糖 K562 白血病动物模型

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姜黄素对人脑胶质瘤U251细胞侵袭与迁移的抑制作用

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中国药学杂志 2014年第21期49卷 1908-1912页

作者：蒋杞英王科文文曙光郑州大学基础医学院郑州450052 河南大学医学院组织胚胎学教研室河南开封475004

目的探讨姜黄素对人脑胶质瘤U251细胞侵袭与迁移的抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝法筛选姜黄素实验浓度;采用细胞划痕实验观察姜黄素作用0、6、12和24 h后胶质瘤U251细胞的迁移情况,并且测量24 h后迁移的距离;采用Transwell实验观察... 详细信息

目的探讨姜黄素对人脑胶质瘤U251细胞侵袭与迁移的抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝法筛选姜黄素实验浓度;采用细胞划痕实验观察姜黄素作用0、6、12和24 h后胶质瘤U251细胞的迁移情况,并且测量24 h后迁移的距离;采用Transwell实验观察穿膜细胞数,以判断细胞的侵袭能力;采用Western blotting实验检测胶质瘤U251细胞中侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP2)和基质金属蛋白酶9的表达。结果四甲基偶氮唑蓝法筛选的姜黄素浓度为10和20μmol·L-1;与空白对照组相比,在姜黄素作用24 h后,胶质瘤U251细胞迁移的距离和穿膜细胞数皆明显减少,且与药物浓度呈正相关(P<0.01);与空白对照组相比,姜黄素组胶质瘤U251细胞内基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9蛋白的表达明显下降(P<0.01),在姜黄素10和20μmol·L-1组基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9蛋白的表达差异明显(P<0.05)。结论姜黄素能够抑制人脑胶质瘤U251细胞的迁移与侵袭,可能是通过下调细胞内基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9蛋白的表达引起的。

关键词：胶质瘤姜黄素细胞迁移细胞侵袭基质金属蛋白酶

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部分去背根猫Sema3A及其受体NP-1在脊髓和背根节的表达

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四川大学学报（医学版） 2008年第1期39卷 48-51页

作者：丁艳章为黄倩彭谨赵秀军徐爱丽周雪四川大学华西基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室成都610041 河北医科大学组织胚胎学教研室滨州医学院生理学教研室

目的研究部分去背根对神经生长抑制因子Sema3A在脊髓及其受体NP-1在备用背根节内表达的影响。方法建立猫的单侧备用背根模型,分别在术后7d、14d取L3、L5、L6脊髓节段及手术侧L6背根节进行免疫组织化学ABC法染色,同时设置正常对照组。脊... 详细信息

目的研究部分去背根对神经生长抑制因子Sema3A在脊髓及其受体NP-1在备用背根节内表达的影响。方法建立猫的单侧备用背根模型,分别在术后7d、14d取L3、L5、L6脊髓节段及手术侧L6背根节进行免疫组织化学ABC法染色,同时设置正常对照组。脊髓背角内检测Sema3A免疫阳性产物的平均光密度值(OD值),背根节内计数NP-1阳性中小神经元数。结果在L3脊髓节段,Sema3A的表达术后7d(0.25±0.14)、14d(0.27±0.09)较正常对照组(0.37±0.87)减弱(P<0.05);在L5脊髓节段,Sema3A的表达术后7d(0.26±0.11)较正常组减弱(P<0.05),术后14d(0.33±0.09)时有所恢复;L6脊髓节段各组Sema3A的表达无明显变化。背根节内,术后7dNP-1阳性中小神经元数(30.85±10.26)较正常组(45.06±12.47)减少(P<0.05),14d时阳性中小神经元数(40.73±12.25)较7d时有所增加(P<0.05)。结论脊髓部分去背根后,Sema3A及其受体NP-1表达的时空变化可能与脊髓损伤后可塑性有关。

关键词： Sema3A NP-1 部分去背根猫

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三种结缔组织体外诱导胎儿骨髓间充质干细胞的分化

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基础医学与临床 2008年第6期28卷 604-609页

作者：杨艳段征姜蓉汪维伟重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室重庆400016

目的比较胎儿肠黏膜下层、肠系膜与羊膜的结缔组织体外诱导胎儿骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为上皮细胞作用的差异及其可能机制。方法制备去上皮的3种结缔组织块,检测其中有无EGF和IGF-1表达。将4,6-联脒-2联苯基吲哚(DAPI)标记的P3-BM... 详细信息

目的比较胎儿肠黏膜下层、肠系膜与羊膜的结缔组织体外诱导胎儿骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为上皮细胞作用的差异及其可能机制。方法制备去上皮的3种结缔组织块,检测其中有无EGF和IGF-1表达。将4,6-联脒-2联苯基吲哚(DAPI)标记的P3-BMSCs滴加于3种结缔组织上培养,设结缔组织诱导组、结缔组织与表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)联合组、EGF、IGF-1诱导对照组。于培养第8、10和12d收集组织块,比较各组诱导BMSCs向上皮细胞分化的差异。结果经3种结缔组织和生长因子诱导后的BMSCs均表达CK和EMA;联合诱导组作用强于单用结缔组织组(P<0.05);3种结缔组织中以羊膜的作用最强(P<0.05)。3种组织均表达EGF,肠黏膜下层及肠系膜还表达IGF-1。结论胎儿肠黏膜下层、肠系膜与羊膜的结缔组织以及EGF、IGF-1在体外均有诱导BMSCs分化为上皮的作用;EGF和IGF-1可协同增强3种结缔组织的诱导作用;结缔组织中的EGF或IGF-1可能是其诱导作用的内源性因素。

关键词：胎儿结缔组织骨髓间充质干细胞诱导分化

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H-89和wortmannin对霍乱毒素促进受损视网膜节细胞再生作用的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2005年第1期26卷 34-37页

作者：李雯梁玉香李海标中山大学基础医学院组织胚胎学教研室广东广州510080

【目的】研究蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89和磷酸肌醇3-激酶(PI3-K)特异抑制剂wortmannin对霍乱毒素(CTx)促进受损视网膜节细胞(RGCs)再生的影响,探讨CTx促进受损视网膜节细胞(RGCs)再生的作用机制。【方法】成年金黄地鼠近侧切断视神经(O... 详细信息

【目的】研究蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89和磷酸肌醇3-激酶(PI3-K)特异抑制剂wortmannin对霍乱毒素(CTx)促进受损视网膜节细胞(RGCs)再生的影响,探讨CTx促进受损视网膜节细胞(RGCs)再生的作用机制。【方法】成年金黄地鼠近侧切断视神经(ON),移植一段自体坐骨神经(SN)与ON近侧残端缝接,玻璃体内注射给药。20只动物分4组,每组5只。注射CTx为CTx组,注射CTx和H-89为CTx+H组、注射CTx和wortmannin为CTx+W组、不给药组为对照组。用粒蓝(GB)逆行标记再生的RGCs,取视网膜于荧光镜下记数。【结果】动物存活4周后,对照组、CTx组和CTx+H组再生节细胞平均数(个/视网膜)分别为:(1431±352),(2567±883)和(1606±293)个/视网膜(n=5)。CTx+H组与对照组比较差异无显著性(P<0.05),而与CTx组比较有显著性差异(P<0.05),表明H-89可抑制CTx的促再生作用;CTx+W组再生节细胞数为:(1872±262)个/视网膜(n =5),与对照组和CTx组比较差异均有显著性(P <0.05),提示wortmannin对CTx有部分的抑制作用。【结论】CTx可能是通过PKA-CREB通路实现对受损RGCs的促再生作用,PI3-K-Akt通路可能是PKA-CREB通路的下游分支。

关键词： CT RGC 对照组视网膜节细胞霍乱毒素注射 PI3-K PKA 动物磷酸肌醇

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锌离子与锌转运体6在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布

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复旦学报（医学版） 2009年第1期36卷 65-69页

作者：张丽红于丹王辛郑玮荣明王占友中国医科大学基础医学院组织胚胎学教研室辽宁沈阳110001

目的研究游离锌离子和锌转运体6(zinc transporter 6,ZnT6)在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布。方法应用浸入式金属自显影技术(AMG)和免疫组织化学染色标记游离锌离子、ZnT6和淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP),通过免疫荧... 详细信息

目的研究游离锌离子和锌转运体6(zinc transporter 6,ZnT6)在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布。方法应用浸入式金属自显影技术(AMG)和免疫组织化学染色标记游离锌离子、ZnT6和淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP),通过免疫荧光染色和共聚焦激光扫描显微镜观察ZnT6和β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)在老年斑内的定位,并分析锌离子、ZnT6与APP和Aβ分布的相关性。结果游离锌离子、ZnT6和APP免疫阳性反应产物均定位于老年斑内,老年斑主要分布于小脑分子层,浦肯野细胞层和颗粒层分布较少;ZnT6和Aβ荧光双标的结果进一步证实两者共存于老年斑内。结论APP/PS1转基因小鼠小脑Aβ老年斑内有大量的ZnT6蛋白表达,并聚集着大量的锌离子,提示锌离子可能参与小脑Aβ老年斑的形成,而ZnT6在老年斑内锌离子的聚集过程中起着重要的调节作用。

关键词：锌离子锌转运体6(ZnT6) β淀粉样蛋白(Aβ) β淀粉样蛋白前体蛋白(APP) APP/PS1 转基因小鼠小脑

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自噬与心肌衰老及心血管疾病关系的研究进展

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临床心血管病杂志 2009年第5期25卷 323-326页

作者：吴快英王海杰谭玉珍宜春学院医学院组织胚胎学教研室江西宜春336000 复旦大学上海医学院人体解剖与组织胚胎学系

真核细胞降解细胞内物质主要通过2条途径蛋白酶体降解和自噬(autophagy)降解。蛋白酶体主要降解细胞内短寿命蛋白质;细胞内几乎全部的长寿蛋白质、多数大分子物质以及所有的细胞器都通过自噬作用被运输到溶酶体内降解,以实现细胞本身的... 详细信息

真核细胞降解细胞内物质主要通过2条途径蛋白酶体降解和自噬(autophagy)降解。蛋白酶体主要降解细胞内短寿命蛋白质;细胞内几乎全部的长寿蛋白质、多数大分子物质以及所有的细胞器都通过自噬作用被运输到溶酶体内降解,以实现细胞本身的代谢需要和细胞器的更新。因此,自噬对维持细胞内环境稳定具有重要意义。近10年来,人们对自噬的了解逐渐深入,并于2005年创办了杂志《Autophagy》,这表明白噬与疾病的关系已成为当前研究的热点。本文就自噬与心肌衰老的关系、自噬在正常心血管功能和心血管疾病中的作用作一综述。[第一段]

关键词：自噬作用心肌细胞衰老心血管疾病

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人参总皂甙对骨髓巨噬细胞的影响及与造血调控的关系

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解剖学杂志 2004年第2期27卷 109-113,F002页

作者：李静王亚平重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室重庆400016

目的 :研究人参总皂甙 (TSPG)对骨髓巨噬细胞 (BMMφ)生物学活性的影响及其与造血调控关系。方法 :采用骨髓造血祖细胞体外培养 ,造血生长因子生物活性检测 ,免疫细胞化学 ,核酸探针原位杂交等技术。结果 :经TSPG诱导制备的BMMφ的培... 详细信息

目的 :研究人参总皂甙 (TSPG)对骨髓巨噬细胞 (BMMφ)生物学活性的影响及其与造血调控关系。方法 :采用骨髓造血祖细胞体外培养 ,造血生长因子生物活性检测 ,免疫细胞化学 ,核酸探针原位杂交等技术。结果 :经TSPG诱导制备的BMMφ的培养上清可提高髓系造血祖细胞的集落产率 ;经TSPG诱导后 ,BMMφ表达EPO ,IL 3 ,IL 6,GM CSF的蛋白水平有不同程度提高 ;EPOmRNA ,GM CSFmRNA的表达水平和强度明显提高。结论 :TSPG可以刺激造血诱导微环境中的巨噬细胞 ,从基因水平和蛋白水平 2级层次上促进造血调控因子的合成和分泌 ,进而促进CFU Mix ,CFU E ,CFU GM的增殖分化。

关键词：人参总皂甙骨髓巨噬细胞造血调控造血祖细胞细胞培养生物学活性造血生长因子

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