检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2025年第5期58卷 1032-1042页

作者：洪润婧周红蔺辉星范红结南京农业大学动物医学院

【目的】通过建立检测胞内劳森菌（Lawsonia intracellularis,LI）的夹心ELISA方法，进行猪增生性肠炎（porcine proliferative enteropathy,PPE）灭活疫苗研制中抗原含量的测定。【方法】以LI为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗LI多克隆... 详细信息

【目的】通过建立检测胞内劳森菌（Lawsonia intracellularis,LI）的夹心ELISA方法，进行猪增生性肠炎（porcine proliferative enteropathy,PPE）灭活疫苗研制中抗原含量的测定。【方法】以LI为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗LI多克隆抗体；同时免疫6周龄BALB/c小鼠，通过杂交瘤细胞技术制备抗LI单克隆抗体。用Western Blot、间接免疫荧光试验（IFA）和免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）对制备的抗体进行鉴定。将单克隆抗体作为捕获抗体，多克隆抗体作为检测抗体，建立检测LI的夹心ELISA方法，优化反应条件，并对该方法进行特异性、敏感性和重复性评价。用优化后的检测方法对灭活后的LI进行定量检测。【结果】制备的多克隆抗体效价达1:409 600。经三轮亚克隆后共筛选出3株阳性杂交瘤细胞，分别命名为1B7、3C7、4F10，腹水效价均为1:204 800。3株单克隆抗体均与LI发生特异性反应，与肠致病性大肠杆菌（*** O157:H7）、猪霍乱沙门氏菌（Salmonella cholerasuis,***）、鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium,***）均无交叉反应。夹心ELISA方法经优化后条件为:捕获抗体为4F10；捕获抗体与检测抗体的工作浓度分别为1.25和0.625μg·m L-1；包被液为磷酸盐缓冲液，包被条件为4℃14 h；封闭液为1%明胶，封闭条件为37℃1.5 h；抗原孵育条件为37℃1 h；检测抗体孵育条件为37℃0.5 h；酶标抗体稀释度为1:16 000，孵育条件为37℃1.5 h；显色条件为室温孵育10 min。该方法对其他常见的肠道病原菌检测均为阴性，对LI的最低检测限为1×10～5个/m L，且批内、批间变异系数均小于10%。LI浓度在1×10～5—1×10～8个/m L范围内与P/N值呈线性关系，标准方程:y=2.7349x-11.643（R2=0.9966）。使用该方法对该实验室制备的PPE灭活疫苗进行抗原定量，结果显示灭活前后抗原含量基本不变，且两组疫苗样品定量结果批内重复性良好。120份猪临床粪便样品检测结果显示，用夹心ELISA方法共检出62份阳性样品，58份阴性样品；用巢式PCR方法共检出67份阳性样品，53份阴性样品。二者的阳性符合率为86.6%，阴性符合率为92.5%，总符合率为89.2%,kappa值为0.78。【结论】成功制备针对LI的多克隆抗体与单克隆抗体，建立并优化了检测LI抗原的夹心ELISA检测方法。该方法特异性与重复性良好，对LI的检测限为1×10～5个/m L。可用于PPE灭活疫苗制备过程中抗原的定量检测及PPE临床样品的检测。

关键词：胞内劳森菌单克隆抗体夹心ELISA 抗原定量

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热浪对乌龟幼龟免疫功能和抗氧化防御系统的影响

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水生态学杂志 2025年

作者：王月妍伍亮李文慧许梅刘志冲梁艺博刘莹莹张志强安徽农业大学动物科技学院水产动物健康养殖工程技术研究中心安徽农业大学动物医学院

为探究高温热浪强度和持续时长与幼龟表型可塑性和生理适应性的关系，将出壳后乌龟（Mauremys reevesii）在28 ℃、32 ℃和36 ℃条件下分别饲养7 d和14 d，测定了其形态表型、免疫功能、应激反应和肝脏酶活力的变化。随高温热浪时间延长... 详细信息

为探究高温热浪强度和持续时长与幼龟表型可塑性和生理适应性的关系，将出壳后乌龟（Mauremys reevesii）在28 ℃、32 ℃和36 ℃条件下分别饲养7 d和14 d，测定了其形态表型、免疫功能、应激反应和肝脏酶活力的变化。随高温热浪时间延长，32 ℃能促进幼龟生长（P<0.05），36 ℃组血清杀菌能力显著升高（P<0.05），但植物血凝素（phytohemagglutinin-P，PHA-P）最大反应值的出现时间均有所延迟，嗜异性粒细胞与淋巴细胞的比值均无明显变化（P>0.05）。第7天32 ℃组超氧化物歧化酶（SOD）活力显著高于28 ℃和36 ℃组（P<0.05），第14天28 ℃组乳酸脱氢酶（LDH）活力显著高于32 ℃和36 ℃组（P<0.05）；随高温热浪时间延长，28 ℃和36 ℃组的碱性磷酸酶（AKP）活力明显增加（P<0.05），32 ℃和36 ℃组乳酸脱氢酶（LDH）活力显著下降（P<0.05），MDA含量、SOD活力和过氧化氢酶（CAT）活力均无组间差异（P>0.05）。为抵御热浪侵袭，幼龟对PHA-P反应的最大值的出现时间有所延迟，天然免疫能力增高显著，但应激水平不受影响，抗氧化酶活力动态改变，这些被激活的生理活动有助于幼龟当前存活，但可能会危害其未来健康。

关键词：气候变暖乌龟幼龟植物血凝素血清杀菌能力酶活力白细胞

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滑液囊支原体DnaK蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的初步鉴定

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农业生物技术学报 2025年第3期33卷 689-696页

作者：刘凯赵云海何肖肖马海云王青刘玉东包世俊甘肃农业大学动物医学院

热休克蛋白(DnaK)是生物在受不利因素影响下产生的具有高度保守性的应激蛋白，具有载体和佐剂双重作用，然而目前对滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae, MS) DnaK蛋白研究较少。本研究为制备MS DnaK蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibody... 详细信息

热休克蛋白(DnaK)是生物在受不利因素影响下产生的具有高度保守性的应激蛋白，具有载体和佐剂双重作用，然而目前对滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae, MS) DnaK蛋白研究较少。本研究为制备MS DnaK蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibody, MAb)并对其抗原表位进行初步鉴定，构建重组质粒进行重组蛋白表达，并纯化出滑液囊支原体重组蛋白DnaK (rMSDnaK蛋白)，以rMSDnaK蛋白免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)。选择抗体水平高的小鼠，分离其脾脏，将脾细胞与骨髓瘤细胞融合，通过有限稀释法和间接ELISA法筛选出状态良好的阳性杂交瘤细胞，将其注射至昆明鼠腹腔后收集并纯化腹水。经SDS-PAGE鉴定，rMSDnaK成功表达。采用间接ELISA法筛选出1株可分泌抗DnaK抗体且稳定性良好的杂交瘤细胞株，命名为6G6。对MAb 6G6亚型进行鉴定，结果为IgG3亚类。纯化后的MAb经间接ELISA法测定效价为1∶102 400。Western blot结果显示，MAb 6G6仅与rMSDnaK蛋白发生反应。间接免疫荧光结果显示，MAb 6G6仅与MS发生荧光反应。Western blot结果证明，制备的截短体MS DnaKΔ3-3能够与rMSDnaK蛋白反应，证明单克隆抗体识别的抗原表位区域是C端506～596位氨基酸。本研究成功制备出抗MS DnaK单克隆抗体并对其进行抗原表位鉴定，为后续建立检测MS的双抗夹心ELISA法提供生物材料。

关键词：滑液囊支原体(MS) DnaK蛋白单克隆抗体抗原表位鉴定

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牛源诺卡菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医学报 2025年第1期45卷 39-45页

作者：赵岩任美奕仝静迪苏娅澜宋德源姜国均程佳高健刘明超河北农业大学动物医学院中国农业大学动物医学院

诺卡菌（Nocardia）是一种革兰阳性菌，能感染奶牛乳腺引起乳房炎，导致奶牛乳腺组织出现化脓性肉芽肿病变等临床症状。为建立一种快速而准确的牛源诺卡菌检测方法，通过对NCBI上已登记的诺卡菌16S rRNA基因序列进行比对，筛选出一段保... 详细信息

诺卡菌（Nocardia）是一种革兰阳性菌，能感染奶牛乳腺引起乳房炎，导致奶牛乳腺组织出现化脓性肉芽肿病变等临床症状。为建立一种快速而准确的牛源诺卡菌检测方法，通过对NCBI上已登记的诺卡菌16S rRNA基因序列进行比对，筛选出一段保守序列，并针对该序列设计了1对引物及TaqMan荧光定量探针。经过验证，结果显示本研究建立的TanMan荧光定量PCR检测方法的Ct值与重组质粒在1×1010～1×10～2拷贝/μL范围内具有良好的线性关系，其回归方程为y=-3.536x+43.78,相关系数R2=0.997 5,斜率为-3.536,扩增效率（E）=91%,且满足90%

关键词：诺卡菌乳房炎 TaqMan荧光定量PCR 奶牛

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一株牛肠病毒F型的全基因组分析及抗体检测间接ELISA方法的建立

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畜牧兽医学报 2025年第2期56卷 814-825页

作者：刘健于泽海张玫瑜李丹王君刘芳琴张群徐守振青岛农业大学动物医学院青岛266109

本研究从牛肠病毒(BEV)阳性粪便中通过接种BHK细胞进行蚀斑纯化分离得到一株F型肠道病毒,经过RT-PCR鉴定正确后送生物公司进行全基因测序以及进行TCID_(50)的测定,以MEGA11.0等生物信息学软件对BEV全基因进行分析并构建遗传进化树。以... 详细信息

本研究从牛肠病毒(BEV)阳性粪便中通过接种BHK细胞进行蚀斑纯化分离得到一株F型肠道病毒,经过RT-PCR鉴定正确后送生物公司进行全基因测序以及进行TCID_(50)的测定,以MEGA11.0等生物信息学软件对BEV全基因进行分析并构建遗传进化树。以原核表达方式得到含BEV分离株VP3基因的重组蛋白,作为包被抗原,建立检测抗体的间接ELISA方法,并对建立的ELISA方法的特异性、灵敏性、重复性进行测定与用于临床样品的检测。结果显示,BEV分离株的TCID 50为10-6.26·mL^(-1),病毒分离株全长为7439 nt,ORF大小为6504 bp,编码2168个氨基酸,与F型肠道病毒BEV4遗传关系最近且核苷酸相似性最高,故分离到的病毒为F型肠道病毒,暂命名为BEV-QD,与其他F型毒株相比,BEV-QD株存在氨基酸的突变以及缺失并且大多集中在P2、P3区。本次建立的抗体检测间接ELISA方法重复性良好;阳性血清稀释1600倍后结果仍呈现阳性,灵敏性良好;与BVDV等阳性血清不发生特异性结合,特异性良好;检测40份临床样品中,13份为阳性,阳性率为32.5%。本研究分离到一株F型牛肠病毒突变株,建立了一种抗体间接ELISA方法。为牛肠病毒的检测和防控提供了基础手段。

关键词：牛肠道病毒分离鉴定 TCID_(50) 全基因组分析 ELISA

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鹅星状病毒2型单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

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南京农业大学学报 2025年第2期48卷 401-409页

作者：王雯佟贺杨兴淼曹瑞兵南京农业大学动物医学院江苏南京210095

[目的]本研究旨在制备抗鹅星状病毒(goose astrovirus,GAstV)单克隆抗体并鉴定其识别的抗原表位,为快速检测GAstV感染和研究P2蛋白的结构与功能奠定基础。[方法]通过原核表达系统表达并纯化GAstV-2 P2蛋白,用其免疫6周龄BALB/c雌鼠,利... 详细信息

[目的]本研究旨在制备抗鹅星状病毒(goose astrovirus,GAstV)单克隆抗体并鉴定其识别的抗原表位,为快速检测GAstV感染和研究P2蛋白的结构与功能奠定基础。[方法]通过原核表达系统表达并纯化GAstV-2 P2蛋白,用其免疫6周龄BALB/c雌鼠,利用杂交瘤技术,经过细胞筛选和亚克隆,获得3株能稳定分泌抗P2蛋白的单克隆抗体,利用Western blot(WB)和间接免疫荧光(IFA)鉴定单抗特异性,用获得的单抗对GAstV感染阴、阳性肾脏切片进行免疫组化检测,用间接ELISA测定单抗效价和亚型,同时构建P2蛋白的不同截短体来鉴定单抗识别抗原表位。[结果]本研究共获得3株能稳定分泌抗P2蛋白抗体的杂交瘤细胞,命名为1B10、3C6、5B1。单抗效价分别为1∶2048000、1∶512000、1∶256000,亚型鉴定结果显示,3株单抗的重链均为IgG2b,轻链均为Kappa型。WB和IFA结果显示,3株单抗均可以特异性结合鹅星状病毒。免疫组化结果显示,5B1和3C6可以应用于免疫组化的检测。抗原表位鉴定结果显示,1B10识别_(109)TSTTSTGGLITELRN_(123),3C6识别_(206)LTDPEEDDDPLS_(217),5B1识别_(96)LNPELETAVLRV_(107)。[结论]本研究成功制备能识别不同抗原表位的3株单克隆抗体,为快速检测GAstV感染和研究P2蛋白的结构与功能奠定物质基础。

关键词：鹅星状病毒 P2蛋白原核表达单克隆抗体抗原表位

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厚朴酚对感染大肠杆菌北京鸭肠道健康的影响

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中国农业大学学报 2025年第4期30卷 154-165页

作者：严丹安柯颖张子越施博智夏兆飞中国农业大学动物医学院北京100193

为探究厚朴酚(MAG)对感染大肠杆菌(***)北京鸭肠道健康的影响,本研究选取1 d雄性北京鸭240只,随机分为6组:空白组(NCG组),攻毒组(*** O78,PCG组),低(*** O78+100 mg/kg MAG,MLG组)、中(*** O78+200 mg/kg MAG,MMG组)、高(*** O78+300 mg/kg MAG,MHG组)剂量厚朴酚组,抗生素组(*** O78+30 mg/kg维吉尼亚霉素,AG组),每组5个重复,每个重复8只,试验周期28 d。试验利用酶联免疫吸附法(ELISA)、病理组织学切片技术(HE染色)、实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)完成肠道健康指标检测。结果表明:1)与PCG组相比,3剂量组与AG组北京鸭9、14和28 d因***感染引起生长性能降低无显著改善(P>0.05)。2)与PCG组相比,3剂量组及AG组北京鸭9、14和28 d空肠绒毛结构相对完整、排列相对整齐,绒毛长度(VH)、绒毛长度/隐窝深度(V/C)显著增加(P<0.05),隐窝深度(CD)显著减小(P<0.05)。3)与PCG组相比,MMG组北京鸭9 d血清二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-LA)浓度显著降低(P<0.05)。4)与PCG组相比,MLG组和MMG组北京鸭9 d空肠白介素-10(IL-10)的mRNA表达量显著增加(P<0.05),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达量显著减少(P<0.05)。5)与PCG组相比,MLG组北京鸭9、14和28 d空肠闭合小环蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)、闭合蛋白-1(Claudin-1)的mRNA表达量显著增加(P<0.05);MLG组和MMG组北京鸭14和28 d空肠黏蛋白2(MUC2)的mRNA表达量显著增加(P<0.05)。综上,饲粮添加MAG可在一定程度上改善感染大肠杆菌北京鸭肠道形态,稳固肠道屏障,保护肠道健康;MAG推荐添加剂量为100和200 mg/kg。

关键词：厚朴酚大肠杆菌北京鸭肠道健康

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我国奶牛乳房炎链球菌对常用抗菌药物耐药性的Meta分析

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中国人兽共患病学报 2025年第2期41卷 208-217页

作者：司星星徐祥瀚王晓明王丽平黄金虎南京农业大学动物医学院南京210095

目的旨在掌握我国奶牛乳房炎链球菌对常用抗菌药物的耐药情况、地区差异及变化规律,为我国奶牛乳房炎链球菌抗菌药物的合理使用和新药开发提供科学的指导意见。方法采用Meta分析方法,针对2000-2023年奶牛源链球菌对20种不同抗菌药物... 详细信息

目的旨在掌握我国奶牛乳房炎链球菌对常用抗菌药物的耐药情况、地区差异及变化规律,为我国奶牛乳房炎链球菌抗菌药物的合理使用和新药开发提供科学的指导意见。方法采用Meta分析方法,针对2000-2023年奶牛源链球菌对20种不同抗菌药物的耐药率数据进行搜集和整理,通过文献的排除和纳入,进行质量评价后,共计纳入文献67篇、链球菌3154株,对20种抗菌药物进行总体以及采集地区和时间亚组进行Meta分析。结果我国奶牛源链球菌对抗菌药物表现出不同程度的耐药,耐药率在30%以上的有:青霉素(60%,95%CI=0.48~0.72)、链霉素(57%,95%CI=0.46~0.68)、复方新诺明(56%,95%CI=0.28~0.82)、林可霉素(51%,95%CI=0.26~0.76)、四环素(49%,95%CI=0.40~0.59)、多西环素(42%,95%CI=0.24~0.60)、克林霉素(41%,95%CI=0.28~0.54)、氨苄西林(39%,95%CI=0.27~0.52)、红霉素(37%,95%CI=0.28~0.45)、卡那霉素(36%,95%CI=0.20~0.54)、阿莫西林(30%,95%CI=0.10~0.53)。从采集地区看,东北地区和西南地区的奶牛源链球菌对抗菌药物的耐药率普遍较高。从菌株分离时间看,奶牛源链球菌对四环素、多西环素和林可霉素等抗菌药物的耐药率升高趋势显著;而对链霉素、庆大霉素和恩诺沙星等抗菌药物的耐药率下降趋势较为显著。结论奶牛源链球菌对部分抗菌药物耐药性较为严重,不同地区的耐药性因养殖和管理不同而存在差异,仍需加强抗菌药物耐药率的监测、加强耐药机制的研究,规范抗菌药物的使用。

关键词：奶牛乳房炎链球菌耐药性 Meta分析

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水蒸气蒸馏提取肉桂精油工艺及成分的分析

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中国粮油学报 2025年第1期40卷 149-155页

作者：刘婷朱慧才让东珠成述儒罗志皓易雪娇张涛陈欢甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730030 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

为提高肉桂精油提取率,本实验选用水蒸气蒸馏法,首先通过单因素实验,研究分析4个因素(蒸馏时间、料液比、浸泡时间、料液中氯化钠的体积分数)对肉桂精油提取率的影响;然后利用响应面设计对肉桂精油提取工艺进行优化;最后借助气相色谱-... 详细信息

为提高肉桂精油提取率,本实验选用水蒸气蒸馏法,首先通过单因素实验,研究分析4个因素(蒸馏时间、料液比、浸泡时间、料液中氯化钠的体积分数)对肉桂精油提取率的影响;然后利用响应面设计对肉桂精油提取工艺进行优化;最后借助气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对其成分、含量进行测定分析。结果表明:提取率的回归方程相关系数R 2=0.98,方程回归模型极显著(P<0.01),回归模型拟合性较好,肉桂精油最佳提取条件为:蒸馏时间3 h,料液比1∶13,浸泡时间40 min,氯化钠的体积分数3.6%,且在该条件下提取率约为3.30%;最佳工艺提取的肉桂精油共检测出75种成分,占总精油的87.32%,其主要成分为反式肉桂醛。

关键词：肉桂精油水蒸气蒸馏提取率响应面设计成分分析

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基于不同ST型肺炎克雷伯菌感染的小鼠乳腺炎模型的差异分析

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中国畜牧兽医 2025年第1期52卷 422-431页

作者：任美奕梁洪秀李璨冯鸣鹊谢琴娜宋德源刘明超高健程佳河北农业大学动物医学院保定071001 中国农业大学动物医学院北京100193

[目的]肺炎克雷伯菌感染是奶牛乳腺炎的常见病因,其诱导的临床型乳腺炎发病急、临床症状重,牛奶产量和质量降低,给奶牛场造成巨大的经济损失。本研究旨在探究奶牛乳腺炎源性不同序列型(sequence type, ST)肺炎克雷伯菌的毒力作用,筛选... 详细信息

[目的]肺炎克雷伯菌感染是奶牛乳腺炎的常见病因,其诱导的临床型乳腺炎发病急、临床症状重,牛奶产量和质量降低,给奶牛场造成巨大的经济损失。本研究旨在探究奶牛乳腺炎源性不同序列型(sequence type, ST)肺炎克雷伯菌的毒力作用,筛选肺炎克雷伯菌发挥感染作用的潜在关键毒力基因。[方法]采用多位点序列分型(multi-locus sequence typing, MLST)分析山东、湖北2个大型奶牛场的129株临床乳腺炎源性肺炎克雷伯菌的ST型分布,并选择3种检出率较高的ST型肺炎克雷伯菌感染小鼠建立乳腺炎模型,探究小鼠乳腺的形态学损伤及炎性因子表达变化。通过分析肺炎克雷伯菌的感染特性与毒力基因分布,筛选与肺炎克雷伯菌感染相关的关键毒力基因。[结果]129株肺炎克雷伯菌共分为79种ST型,其中ST107占比最高,为19.37%;其次为ST2324(7.75%)和ST13(3.87%)。与ST107和ST13型相比,感染后24 h, ST2324型肺炎克雷伯菌诱导小鼠临床评分和乳腺载菌量均显著升高(P<0.05);乳腺内腺泡轮廓消失和大量炎性细胞浸润,乳腺中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞色素C(Cyt C)mRNA表达量均显著升高(P<0.05)。毒力基因检测结果显示,3种不同ST型分离株共检测到74个毒力基因,其中ST2324型分离株中检出了ST13和ST107型分离株没有检出的毒力基因manB、pla和pilW。[结论]本研究从129株肺炎克雷伯菌中共检出79种ST型,其中ST2324、ST107和ST13检出率较高,ST2324型肺炎克雷伯菌对小鼠致病性最强,且携带的毒力基因manB、pla和pilW与肺炎克雷伯菌的高致病性密切相关。本研究结果为进一步解析肺炎克雷伯菌感染奶牛乳腺炎的机制提供了理论参考。

关键词：奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌序列型(ST) 毒力基因

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