检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2007年第4期27卷 104-109页

作者：宋敬东王健伟韩金祥洪涛山东省病毒学研究所暨山东省医学病毒学重点实验室卫生部生物技术药物重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室中国医学科学院病原生物学研究所北京100730

人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)是宫颈癌的主要致病因子,宫颈癌已成为继乳腺癌之后引起女性死亡的第二大癌症,在一些发展中国家宫颈癌已居女性癌症死亡率首位。另外,HPV还与很多其他癌症及皮肤、黏膜疣等常见疾病有关。因此,... 详细信息

人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)是宫颈癌的主要致病因子,宫颈癌已成为继乳腺癌之后引起女性死亡的第二大癌症,在一些发展中国家宫颈癌已居女性癌症死亡率首位。另外,HPV还与很多其他癌症及皮肤、黏膜疣等常见疾病有关。因此,研究和开发预防和治疗宫颈癌及HPV相关疾病的疫苗十分必要,综述了HPV预防性疫苗和治疗性疫苗的研究进展,以期为HPV疫苗的研究提供参考。

关键词：人乳头瘤病毒病毒样颗粒宫颈癌疫苗

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昆虫细胞偏爱密码子优化的HPV16L1基因在昆虫和哺乳动物细胞中的表达

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中国病原生物学杂志 2007年第4期2卷 247-251页

作者：宋敬东王健伟王敏郭丽屈建国鲁茁壮韩金祥洪涛山东省病毒学研究所暨山东省医学病毒学重点实验室/卫生部生物技术药物重点实验室/山东省现代医用药物与技术重点实验室山东济南250062 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052

目的获得有效表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1基因的重组杆状病毒和腺病毒,为研究HPV的免疫保护机制提供材料。方法按照昆虫细胞密码子偏爱优化并合成HPV16L1基因,利用Bac-to-Bac昆虫表达系统获得表达HPV16L1基因的重组杆状病毒,利用AdE... 详细信息

目的获得有效表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1基因的重组杆状病毒和腺病毒,为研究HPV的免疫保护机制提供材料。方法按照昆虫细胞密码子偏爱优化并合成HPV16L1基因,利用Bac-to-Bac昆虫表达系统获得表达HPV16L1基因的重组杆状病毒,利用AdEasy腺病毒载体系统获得表达HPV16L1基因的重组腺病毒载体。通过间接免疫荧光和Western blot对HPV16L1基因表达进行鉴定,利用负染电子显微镜观察病毒样颗粒(VLP)的形成。结果获得了稳定表达HPV16L1蛋白的重组杆状病毒和重组腺病毒载体,在Sf9细胞和293细胞中可有效表达能被抗HPV16L1单克隆抗体识别的L1蛋白,分子质量单位为56ku,在Sf9细胞中可观察到VLP的形成。结论按照昆虫细胞密码子偏爱进行优化的HPV16L1基因,在昆虫细胞和哺乳动物细胞内均可有效表达。

关键词：人乳头瘤病毒u 16型重组腺病毒重组杆状病毒表达密码子优化病毒样颗粒

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截短型A组轮状病毒VP6在***中的高效表达

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山东大学学报（医学版） 2006年第5期44卷 433-437,442页

作者：王志宇王健伟何深一吴围屏韩金祥洪涛山东省病毒学研究所/山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室山东大学医学院病原生物学研究所山东济南250012

目的：研究A组轮状病毒（RV）组特异性抗原（VP6）片段的表达，为RV免疫检测技术提供材料。方法：以***6为模板，通过PCR扩增得到VP6的截短突变体编码基因VP6．1，将其插入谷胱甘肽巯基转移酶（GST）融合表达载体pGEX-5X，在***中用异丙... 详细信息

目的：研究A组轮状病毒（RV）组特异性抗原（VP6）片段的表达，为RV免疫检测技术提供材料。方法：以***6为模板，通过PCR扩增得到VP6的截短突变体编码基因VP6．1，将其插入谷胱甘肽巯基转移酶（GST）融合表达载体pGEX-5X，在***中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（WIG）诱导表达。对表达产物进行***和Western blot分析。通过改变宿主菌、培养基、IPTG浓度和培养温度等条件，提高目的蛋白的可溶性表达水平，使用GST-Sepharose 4B亲合层析进行初步纯化。结果：选定VP6氨基酸12-143片段为目的蛋白，PCR扩增其396bp的编码基因片段，构建出***6．1。将该重组质粒转化***后，***和Western blotting分析均显示，含有截短VP6蛋白的重组融合蛋白GST：：VP6-1在***中获得高效表达，约占菌体总蛋白的30％。该蛋白主要以包涵体形式存在，经条件优化，最终通过低浓度IPTG、低温诱导提高重组蛋白的可溶性表达水平，GST亲和层析可对其进行初步纯化。结论：VP6．1蛋白在***中可被高效表达和纯化，为下一步制备抗VP6的特异性单克隆抗体并用于免疫检测打下基础。

关键词：轮状病毒属原核细胞基因表达

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RNA干扰机制的研究进展

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生物技术通讯 2006年第3期17卷 409-411页

作者：宋敬东王健伟吴围屏韩金祥洪涛山东省病毒学研究所/山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室山东济南250062

RNA干扰(RNAi)广泛存在于各种生物体中,是参与细胞防御与分化调控的重要机制之一。RNAi的作用由双链RNA启动,通过在转录、转录后和翻译等多个水平上对同源基因表达的特异阻断和抑制来实现,清晰地阐明其作用机制将为功能基因组学、发育... 详细信息

RNA干扰(RNAi)广泛存在于各种生物体中,是参与细胞防御与分化调控的重要机制之一。RNAi的作用由双链RNA启动,通过在转录、转录后和翻译等多个水平上对同源基因表达的特异阻断和抑制来实现,清晰地阐明其作用机制将为功能基因组学、发育生物学,以及抗肿瘤、抗病毒的新策略研究提供重要的理论依据。本文综述了近年来有关RNAi机制的研究进展。

关键词：转录基因沉默转录后基因沉默翻译水平沉默短干扰RNA 微小RNA

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截短型A组轮状病毒VP6在***中的高效表达

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山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会

作者：王志宇王健伟何深一吴围屏韩金祥洪涛山东省病毒学研究所／山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室山东省病毒学研究所／山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室山东大学医学院病原生物学研究所山东省病毒学研究所／山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室山东省病毒学研究所／山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室山东省病毒学研究所／山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室

目的 A组轮状病毒(RV)的组特异性抗原(VP6)片段,为发展RV免疫检测技术提供材料。方法以pcDNA3．1-VP6为模板,通过PCR扩增得到VP6的截短突变体编码基因VP6-1,将其插入谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合表达载体pGEX-5X,在***中用异丙基-β-D... 详细信息

目的 A组轮状病毒(RV)的组特异性抗原(VP6)片段,为发展RV免疫检测技术提供材料。方法以pcDNA3．1-VP6为模板,通过PCR扩增得到VP6的截短突变体编码基因VP6-1,将其插入谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合表达载体pGEX-5X,在***中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。通过改变宿主菌、培养基,IPTG浓度和培养温度等条件,提高目的蛋白的可溶性表达水平,使用GST-Sepharose 4B亲合层析进行初步纯化。结果选定VP6氨基酸12-143片段为目的蛋白,PCR扩增其396bp的编码基因片段,构建出pGEX-5X-VP6-1。将该重组质粒转化E-coli后,SDS-PAGE和 Western blotting分析均显示,含有截短VP6蛋白的重组融合蛋白GST::VP6-1在***中获得高效表达,可占菌体总蛋白的30％。该蛋白主要以包涵体形式存在,经条件优化,最终通过低IPTG浓度、低温诱导提高了重组蛋白的可溶性表达水平,GST亲和层析可对其进行初步纯化。结论:VP6-1蛋白在***中可被高效表达和纯化,为下一步制备抗VP6的特异性单克隆抗体并用于发展免疫检测方法打下了基础。

关键词：轮状病毒组特异性抗原原核表达纯化

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荧光定量RT-PCR在轮状病毒检测中的应用

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山东大学学报（医学版） 2006年第3期44卷 217-221页

作者：王志宇王健伟何深一孟红韩金祥洪涛山东大学医学院寄生虫学教研室山东济南250012 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 山东省医学科学院基础医学研究所山东济南250062 山东省病毒学研究所/山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室山东济南250062

目的:建立轮状病毒的荧光定量RT-PCR检测方法,用于检测临床腹泻样本。方法:使用Taqman探针技术,建立轮状病毒VP6特异的荧光定量RT-PCR体系。与WHO推荐的轮状病毒检测方法ELISA平行检测,对该体系的检测范围、灵敏度、特异性等参数进行评... 详细信息

目的:建立轮状病毒的荧光定量RT-PCR检测方法,用于检测临床腹泻样本。方法:使用Taqman探针技术,建立轮状病毒VP6特异的荧光定量RT-PCR体系。与WHO推荐的轮状病毒检测方法ELISA平行检测,对该体系的检测范围、灵敏度、特异性等参数进行评价。并将该体系用于临床腹泻样本。结果:该荧光定量RT-PCR体系具有高度灵敏度和特异性,线性范围宽,最低可检出1TCID50/ml。对113份临床腹泻样本的平行检测结果显示,该荧光定量RT-PCR体系与ELISA的检出率差异无统计学意义(χ2=0.41,P>0.5),可同样用于临床样本检测。结论:成功建立了轮状病毒荧光定量RT-PCR体系,该体系灵敏、特异、重复性好,可用于临床检测。

关键词：实时逆转录聚合酶链反应轮状病毒属聚合酶链反应

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SARS病毒刺突蛋白与TAP标签在Vero细胞内的融合表达研究

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山东大学学报（医学版） 2005年第8期43卷 661-666页

作者：郭岚王健伟韩金祥于修平洪涛山东大学医学院病原生物学研究所山东济南250012 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 山东省病毒学研究所/山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室山东济南250012

目的:探讨SARS冠状病毒(SARS-CoV)刺突蛋白(Spikeprotein,S蛋白)与钙调蛋白结合肽(calmodulinbindingpeptide,CBP)-蛋白A串连亲和纯化(tandemaffinitypurification,TAP)标签在Vero细胞内的融合表达及亚细胞定位,为其细胞结合蛋白的筛选奠定基础。方法:从质粒pGEM-4Z-S中扩增S片段,在5'端加入Kozak序列,并与TAP标签基因共同插入pcDNA3.1(-)中,构建出真核表达载体pcDNA3.1-S-TAP(C)。将构建好的质粒瞬时转染Vero细胞,并共感染重组痘苗病毒vTF7-3,用间接免疫荧光及Western-blotting技术检测融合蛋白的表达及亚细胞定位。结果:成功构建出真核表达载体pcD-NA3.1-S-TAP(C),瞬时转染Vero细胞后S-CBP-蛋白A融合蛋白[S-TAP(C)]得到表达,重组痘苗病毒vTF7-3可有效增强该融合蛋白的表达水平,且检测到S-TAP(C)融合蛋白表达于细胞膜上。结论:S蛋白与TAP标签融合蛋白表达于细胞膜上,且vTF7-3的感染有助于靶蛋白表达水平的提高。

关键词： SARS冠状病毒刺突蛋白 TAP标签 Vero细胞表达

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小鼠CD4、CD8膜外区编码cDNA的克隆与表达

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安徽医科大学学报 2005年第1期40卷 1-4页

作者：王海萍赵丽王健伟贾友苏韩金祥洪涛安徽医科大学组胚教研室合肥230032 中国疾病预防控制中心病毒预防控制所山东省病毒学研究所/山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室济南250062

　目的　克隆并表达小鼠CD4和CD8基因,以期制备其抗体为疫苗研究服务。方法　从小鼠脾细胞中提取总RNA,利用RT PCR技术克隆CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,利用谷光苷肽硫基转移酶 (GST)融合表达载体pGEX CS对其进行表达,利用... 详细信息

　目的　克隆并表达小鼠CD4和CD8基因,以期制备其抗体为疫苗研究服务。方法　从小鼠脾细胞中提取总RNA,利用RT PCR技术克隆CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,利用谷光苷肽硫基转移酶 (GST)融合表达载体pGEX CS对其进行表达,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和Westernblot对重组蛋白进行鉴定。结果　以小鼠脾细胞总RNA为模板,分别扩增出小鼠CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,将其插入表达载体pGEX CS,得到重组质粒pGEX CSCD4、pGEX CSCD8α和pGEX CSCD8β。将所获表达载体转化***21,用IPTG诱导表达,SDS PAGE检测表明小鼠CD4、CD8α、CD8β片段均得到成功表达,其表达量可占菌体蛋白总量的 30%左右,且均可与抗GST抗体反应。结论　成功克隆、表达了小鼠CD4、CD8α和CD8β,为进一步制备抗体从而用于免疫学研究打下了基础。

关键词：抗原,D4 抗原,CD8 逆转录聚合酶链反应

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轮状病毒微量核酸检测技术研究进展

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医学分子生物学杂志 2005年第3期2卷 210-213页

作者：黄海燕韩金祥王健伟山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室济南市250062 山东省病毒学研究所山东省医学病毒学重点实验室

同经典的免疫学检测方法相比,现代分子生物学技术用于检测轮状病毒具有更高的灵敏性,特异性和样品检测的广泛性。本文主要介绍了聚丙烯酰胺凝胶电泳法,RT-PCR相关的扩增技术和核酸杂交技术,限制性片段长度多态性分析(RFLP),着重讨论了... 详细信息

同经典的免疫学检测方法相比,现代分子生物学技术用于检测轮状病毒具有更高的灵敏性,特异性和样品检测的广泛性。本文主要介绍了聚丙烯酰胺凝胶电泳法,RT-PCR相关的扩增技术和核酸杂交技术,限制性片段长度多态性分析(RFLP),着重讨论了新兴的实时荧光定量PCR,基因芯片技术,核酸序列依赖性扩增(NASBA)技术等。并对各种方法的灵敏性,特异性等进行了比较。

关键词：轮状病毒核酸检测

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线虫抗凝肽的研究进展

线虫抗凝肽的研究进展

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华东六省一市生物化学与分子生物学2005年交流会

作者：姜月华王海萍王健伟韩金祥洪涛山东省病毒学研究所暨山东省医学病毒学重点实验室/卫生部生物技术药物重点实验室 250062 山东省病毒学研究所暨山东省医学病毒学重点实验室/卫生部生物技术药物重点实验室 250062 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 100052

线虫抗凝肽(NAP)是自犬钩口线虫成虫分离得到的一系列具有抗凝作用的小分子多肽类物质,含有约为75～85个氨基酸,拥有22﹪的共同序列.NAP抗凝作用强,药效持久,成本低,临床应用前景好,现已进入Ⅲ期临床试验评估阶段.本文就其研究进展做一... 详细信息

线虫抗凝肽(NAP)是自犬钩口线虫成虫分离得到的一系列具有抗凝作用的小分子多肽类物质,含有约为75～85个氨基酸,拥有22﹪的共同序列.NAP抗凝作用强,药效持久,成本低,临床应用前景好,现已进入Ⅲ期临床试验评估阶段.本文就其研究进展做一综述.

关键词：线虫抗凝肽凝血因子Ⅶ 凝血因子X 临床试验

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