检索结果-内蒙古大学图书馆

第一军医大学学报 2004年第2期24卷 139-143页

作者：黄宗海杨文宇龚小卫钱勇车小燕第一军医大学珠江医院普外科广东广州510282 第一军医大学病理生理教研室广东广州510515 广州军区广州总医院放射科广东广州510010 第一军医大学珠江医院中心实验室广东广州510282

目的研究腺病毒介导的前药/血管内皮生长因子受体(KDR)启动子-双自杀基因系统对血管内皮细胞的杀伤作用。方法应用PCR扩增出KDR启动子、CD基因、TK基因序列,构建pKDR-CDglyTK质粒;以Adeasy-1系统为载体,采用细菌内同源重组“两步转化法... 详细信息

目的研究腺病毒介导的前药/血管内皮生长因子受体(KDR)启动子-双自杀基因系统对血管内皮细胞的杀伤作用。方法应用PCR扩增出KDR启动子、CD基因、TK基因序列,构建pKDR-CDglyTK质粒;以Adeasy-1系统为载体,采用细菌内同源重组“两步转化法”构建携带KDR启动子调控下的CD与TK的融合基因腺病毒重组质粒pAdKDR-CDglyTK,重组质粒在293细胞中包装成病毒,并进一步扩增、纯化,以不同的感染复数(MOI)体外感染脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),利用重组病毒携带的绿色荧光蛋白(GFP)基因,荧光显微镜下观察重组腺病毒的感染效率,并给予不同浓度的GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),比较GCV(ganciclovir)和/或5-FC联合对转基因HUVEC细胞的杀伤作用。结果成功构建了AdKDR-CDglyTK重组病毒,并高效地转染了HUVEC,其转染效率随重组病毒的MOI增加而升高。被转染的HUVEC对GCV和5-FC高度敏感。另外,MOI一定时,细胞存活率随GCV和5-FC浓度增加递减;GCV和5-FC浓度一定时,细胞存活率随MOI升高而降低。不同前药组细胞存活率结果显示:联合应用GCV+5-FC较单用GCV或5-FC对感染细胞的杀伤作用更强(P<0.05)。结论KDR启动子-双自杀基因系统对脐静脉内皮细胞具有强烈的杀伤作用,其杀伤效率与GCV和5-FC的浓度及重组腺病毒的MOI相关,联?

关键词：靶向性双自杀基因系统脐静脉内皮细胞杀伤作用血管内皮生长因子受体基因治疗 KDR启动子肿瘤

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霍奇金淋巴瘤组织中H/RS细胞与其背景细胞的微切割及其IgH基因重排检测

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第一军医大学学报 2004年第3期24卷 286-289页

作者：周新华赵彤沈新明余江朱梅刚第一军医大学病理学教研室广东广州510515 第一军医大学南方医院普外科广东广州510515

目的从基因水平探讨霍奇金淋巴瘤(HL)组织中H/RS细胞(Hodgkin and Reed-Sternberg cells)是否起源于B细胞、H/RS细胞的克隆性以及与背景淋巴细胞的相互关系。方法对33例经典霍奇金淋巴瘤(cHL)石蜡刮片组织进行IgH基因重排分析,并对其中... 详细信息

目的从基因水平探讨霍奇金淋巴瘤(HL)组织中H/RS细胞(Hodgkin and Reed-Sternberg cells)是否起源于B细胞、H/RS细胞的克隆性以及与背景淋巴细胞的相互关系。方法对33例经典霍奇金淋巴瘤(cHL)石蜡刮片组织进行IgH基因重排分析,并对其中6例重排阳性的病例经B细胞特异性激活蛋白(BSAP)免疫标记,将标记阳性的H/RS细胞和背景淋巴细胞进行微切割后进一步行IgH基因重排分析。结果16例石蜡刮片组织IgH基因重排阳性。对6例经BSAP标记的cHL成功进行了微切割,其中19管H/RS细胞中,有14管出现重排阳性,细胞数目不同的各管阳性率无显著性差异(P=0.290);12管背景淋巴细胞有2管出现重排阳性,H/RS细胞与背景淋巴细胞的阳性率有显著性差异(P=0.002)。结论支持H/RS细胞来源于B细胞的理论,认为部分背景淋巴细胞可能具有瘤性增生活性,参与H/RS细胞的前体细胞组成。

关键词：霍奇金淋巴瘤 H/RS细胞背景细胞微切割 IgH 基因重排检测

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用文献轮廓挖掘鼻咽癌微阵列表达数据

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第一军医大学学报 2004年第7期24卷 798-801页

作者：黄仲曦姚开泰第一军医大学病理教研室肿瘤研究所广东广州510515

目的探索鼻咽癌异常信号通路。方法根据鼻咽癌微阵列表达谱,采用基于文献轮廓的数据挖掘方法,从Medline文献数据库中提取与基因相关的文献并分析词的频率,再根据重复发生和共发生的过滤标准提取功能相关的词,最后根据词的发生频率对... 详细信息

目的探索鼻咽癌异常信号通路。方法根据鼻咽癌微阵列表达谱,采用基于文献轮廓的数据挖掘方法,从Medline文献数据库中提取与基因相关的文献并分析词的频率,再根据重复发生和共发生的过滤标准提取功能相关的词,最后根据词的发生频率对基因进行功能聚类。结果基因表达谱的112个差异表达基因聚成16组功能类别:4组暗示EBV感染、6组显示鼻咽癌变过程、2组参与能量代谢、1组提示蛋白的异常磷酸化、2组与其它疾病相关、1组与肌肉组织活性相关。肿瘤发生发展过程中常见的P53和Rb信号通路的异常在本研究中则未发现。结论鼻咽癌的发生发展可能由特殊的信号通路引起。

关键词：鼻咽癌信号通路微阵列数据挖掘生物信息学

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Rho激酶抑制剂Y - 2 76 32部分预防烧伤血清诱导的内皮屏障功能损害

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中国病理生理杂志 2004年第7期20卷 1157-1162页

作者：郑惠珍黄巧冰赵克森广东医学院生理学教研室广东湛江524023 第一军医大学病理生理教研室全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的 :观察大鼠烧伤血清对内皮屏障功能的影响及Rho激酶特异抑制剂Y - 2 76 32的作用。方法 :原代培养的大鼠皮肤微血管内皮细胞按实验分组分别用大鼠对照血清、烧伤血清、Y - 2 76 32单独处理或联合处理。用扫描电镜观察细胞表面超微结... 详细信息

目的 :观察大鼠烧伤血清对内皮屏障功能的影响及Rho激酶特异抑制剂Y - 2 76 32的作用。方法 :原代培养的大鼠皮肤微血管内皮细胞按实验分组分别用大鼠对照血清、烧伤血清、Y - 2 76 32单独处理或联合处理。用扫描电镜观察细胞表面超微结构 ,罗丹明 -鬼笔毒环肽荧光染色观察肌动蛋白细胞骨架的改变。通过检测荧光标记白蛋白透过内皮单层的通量分析内皮单层通透性 ,以通透系数Pa表示。结果 :正常内皮细胞生长良好 ,表面有许多凹陷和微绒毛 ,细胞侧面的突起细而长 ,与相邻细胞侧面的小突起相互融合 ,紧密连接。烧伤血清刺激 6h ,细胞表面微绒毛被波浪状皱纹取代 ,细胞侧面突起变短 ,细胞间出现缝隙。正常内皮细胞F -actin主要分布在细胞周边 ,形成周边肌动蛋白丝带 ,在融合的内皮细胞单层 ,周边肌动蛋白丝带相互连接成网状。烧伤血清刺激后 ,肌动蛋白细胞骨架重组 ,出现应力纤维 ,同时周边肌动蛋白丝带模糊 ,内皮单层对白蛋白通透性增高。烧伤血清刺激 6h后 ,加Y - 2 76 32孵育 4 5min ,细胞表面微绒毛与波浪状皱纹并存 ,细胞侧面突起细长 ,与相邻细胞相互融合 ,连接紧密。周边肌动蛋白丝带清晰 ,应力纤维消失。内皮单层Pa值虽较单纯烧伤组低 14 16 % ,但P >0 0 5。细胞用Y - 2 76 32预处理

关键词： Rho激酶烧伤内皮血管通透性

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ACM对tbOOH致原代神经细胞损伤及凋亡的影响

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中国老年学杂志 2004年第6期24卷 533-535页

作者：莫永炎邢飞跃陈瑗周玫第一军医大学病理生理学教研室广东广州510515 暨南大学生殖免疫研究中心第一军医大学自由基研究室

目的　探讨星形胶质细胞条件培养液 (ACM)对叔丁基脂氢过氧化物 (tb OOH)诱导的原代神经细胞损伤和凋亡的影响。方法　分离培养 SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞和神经细胞 ,以 ACM和 /或 tb OOH处理神经细胞后 ,采用 MTT法和光镜评估细胞... 详细信息

目的　探讨星形胶质细胞条件培养液 (ACM)对叔丁基脂氢过氧化物 (tb OOH)诱导的原代神经细胞损伤和凋亡的影响。方法　分离培养 SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞和神经细胞 ,以 ACM和 /或 tb OOH处理神经细胞后 ,采用 MTT法和光镜评估细胞的生存力 ,Hoechst332 5法观察细胞凋亡 (率 )的变化 ;共聚焦显微镜检测细胞内 Bcl- 2表达。结果　与 tb OOH处理组相比 ,ACM可降低神经细胞损伤和凋亡 (P<0 .0 5) ,增加细胞内 Bcl- 2表达。结论　 ACM有保护氧自由基 tb OOH诱导的神经细胞损伤和凋亡作用 ,Bcl- 2表达增加可能参与了 ACM的抑制凋亡。

关键词：星形胶质细胞条件培养液叔丁基脂氢过氧化物神经细胞/凋亡 Bcl-2

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TLR4全长及其截断体重组腺病毒的制备和功能鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2004年第3期20卷 352-357页

作者：宋革孙学刚秦清和邓鹏刘靖华姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

制备脂多糖(LPS)Toll样受体4(TLR4)全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(ATLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒并鉴定其功能.用PCR方法扩增TLR4及△TLR4基因片段,酶切后亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成带有目的基因的穿梭载体pAdTrack-TLR4和pAdTr... 详细信息

制备脂多糖(LPS)Toll样受体4(TLR4)全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(ATLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒并鉴定其功能.用PCR方法扩增TLR4及△TLR4基因片段,酶切后亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成带有目的基因的穿梭载体pAdTrack-TLR4和pAdTrack-△TLR4.用BJ5183细菌同源重组法将目的基因重组于腺病毒骨架载体中;将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后,用脂质体法转染HEK-293细胞进行腺病毒的包装扩增.将重组腺病毒感染CHO-K1细胞,采用荧光毒酶报告基因方法检测其对LPS诱导NF-κB激活的影响.酶切及测序表明,TLR4全长及其截断体△TLR4的重组腺病毒载体构建正确.荧光素酶报告基因检测结果表明,TLR4全长及其截断体的重组腺病毒感染细胞对LPS诱导的反应具有不同的影响,Ad-△TLR4明显抑制了LPS引起的NF-κB激活(P＜0.05),Ad-TLR4则使LPS引起的NF-κB活性增强(P＜0.05).LPS对细胞的激活作用依赖于TLR4的结构完整性.

关键词：腺病毒 TLR4基因报告基因 NF-κB

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基于CryptoAPI的生物医学真随机数的生成器

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第四军医大学学报 2004年第19期25卷 1819-1821页

作者：黄枫申洪第一军医大学病理学教研室广东广州510515

目的 :构建基于MicrosoftCryptoAPI的真随机数生成器 .方法 :在Intel815E芯片组的个人电脑上安装IntelSe curityDriver(ISD)后 ,使用MicrosoftVisualC ++6编程 ,通过CryptGenRandom函数获取真随机数 .结果 :生成的 5 0 0个随机数通过了NISTFIPS 14 0 1和 χ2 拟合优度检验 (α =0 .0 5 ) ,表明本方法所生成的随机数满足独立性和分布均匀性的要求 .生成 75 0 0个随机数经域值变换后与随机数表中的同等数目的随机数进行了统计学比较 ,结果显示前者的均值偏移、SD ,SE和CV均小于后者 .结论 :基于CryptoAPI的真随机数生成器可以生成满足独立性和分布均匀性的真随机数 .

关键词： Crypto API Intel RNG Unit 真随机数 NIST FIPS 140-1 随机数表

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人ARPC2基因的克隆与表达

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第一军医大学学报 2004年第6期24卷 628-630,635页

作者：龚小卫彭毅刘靖华李志杰邓鹏秦清和姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中进行表达与纯化,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白.方法采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中.对阳性克隆进行酶切、... 详细信息

目的构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中进行表达与纯化,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白.方法采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中.对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定.转化BL21(DE3)大肠杆菌株,用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白.结果所构建的人ARPC2的His融合蛋白表达载体是正确的,该载体可在大肠杆菌内高效表达,用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36000的融合蛋白.结论成功构建了人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中获得了高效表达和纯化,为进一步研究ARPC2的生理功能提供了重要的实验材料.

关键词： ARPC2 载体构建基因表达蛋白纯化

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肌动蛋白相关蛋白2/3复合体的结构、功能与调节

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生理科学进展 2004年第4期35卷 306-310页

作者：彭毅龚小卫姜勇第一军医大学病理生理学教研室和广东省功能蛋白质组学重点实验室广州510515

微丝参与了细胞形态维持及细胞运动等多种重要的细胞过程.微丝由肌动蛋白单体组装而成,肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/Arp3, Arp2/3)复合体在微丝形成过程中起重要作用.Arp2/3复合体由7个亚单位组成,在细胞内受到多种核化促进因子的调节,并... 详细信息

微丝参与了细胞形态维持及细胞运动等多种重要的细胞过程.微丝由肌动蛋白单体组装而成,肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/Arp3, Arp2/3)复合体在微丝形成过程中起重要作用.Arp2/3复合体由7个亚单位组成,在细胞内受到多种核化促进因子的调节,并与这些因子协同作用来调节肌动蛋白的核化.Arp2/3复合体结构、功能及调节的研究对于阐明微丝形成机制及细胞骨架与某些信号分子的关系有重要意义.

关键词：肌动蛋白相关蛋白2/3复合体微丝核化核化促进因子

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FRET的理论基础及应用

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中国病理生理杂志 2004年第9期20卷 1721-1724,1738页

作者：孙学刚张丽华姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

2001年,和杂志先后公布了人类基因组的工作草图,人类从此进入了功能基因组时代.目前,研究生物大分子,特别是蛋白质的结构、功能、特点及其相互作用已经成为生命科学的工作重点,随着蛋白质研究的进展,一项古老的技术-荧光共振能量转移(fl... 详细信息

2001年,<自然>和<科学>杂志先后公布了人类基因组的工作草图,人类从此进入了功能基因组时代.目前,研究生物大分子,特别是蛋白质的结构、功能、特点及其相互作用已经成为生命科学的工作重点,随着蛋白质研究的进展,一项古老的技术-荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET),在生物学领域又增添了新的活力.

关键词：荧光共振能量转移蛋白质相互作用

来源：评论

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