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中国水产学会鱼病专业委员会2015年学术讨论会

作者：王松艳蔡双虎简纪常鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 广东省水产动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

sRNA(small RNA)在许多细菌中是重要的调控分子，它可能与细菌的新陈代谢，适应性和毒力性调控存在复杂的关系.为研究sRNA 在无乳链球菌毒力调控中的作用，在本研究中，对无乳链球菌强毒株进行全基因组测序并应用sRNA predict2 对其sRNA... 详细信息

sRNA(small RNA)在许多细菌中是重要的调控分子，它可能与细菌的新陈代谢，适应性和毒力性调控存在复杂的关系.为研究sRNA 在无乳链球菌毒力调控中的作用，在本研究中，对无乳链球菌强毒株进行全基因组测序并应用sRNA predict2 对其sRNA 进行预测，共获得了34 条候选sRNA.

关键词：无乳链球菌 sRNA 预测鉴定

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急性氨氮胁迫对卵形鲳鲹呼吸代谢的影响

急性氨氮胁迫对卵形鲳鲹呼吸代谢的影响

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2015年全国海水养殖学术研讨会

作者：陈刚李金兰张健东黄建盛周晖王忠良广东海洋大学水产学院湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025 广东省普通高校南海水产经济动物增养殖重点实验室湛江524025 广东海洋大学水产学院湛江524025

运用AQUARE SP间歇流水式呼吸仪,研究了在不同浓度氨氮急性胁迫下,卵形鲳鲹呼吸代谢的变化.试验设T0(对照)、T1、T2、T3四个组,各组平均氨氮浓度(TAN)分别为0.08、1.07、1.98、3.07mg/L(非离子氨NH3-N:0.00、0.05、0.09、0.15mg/L).结... 详细信息

运用AQUARE SP间歇流水式呼吸仪,研究了在不同浓度氨氮急性胁迫下,卵形鲳鲹呼吸代谢的变化.试验设T0(对照)、T1、T2、T3四个组,各组平均氨氮浓度(TAN)分别为0.08、1.07、1.98、3.07mg/L(非离子氨NH3-N:0.00、0.05、0.09、0.15mg/L).结果表明:随氨氮浓度升高,卵形鲳鲹耗氧率(M02)和代谢率(REO)先上升后达到稳定,而血氨(PA)及氧氮比(O∶N ratio)则持续上升,T2、T3组的上述指标显著高于对照组(P＜0.05);肝糖原(LG)呈下降趋势,从T1组开始就与对照组有显著差异(P＜0.05),而排氨率(RN)、氨商(AQ)、蛋白质供能比(PEP)则在氨氮超过1.07mg/L后呈下降趋势,其中T2、T3组显著低于对照组(P＜0.05);肝乳酸(LD)无明显变化趋势;相关性回归分析结果表明除LD外,其它呼吸代谢指标与氨氮浓度相关性较高.

关键词：卵形鲳鲹呼吸代谢氨氮浓度

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鲍消化道中异养菌的耐药性研究

鲍消化道中异养菌的耐药性研究

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中国水产学会鱼病专业委员会2015年学术讨论会

作者：孙永婵王瑞旋杨宝丽赵曼曼曹超鲁义善王江勇广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 中国水产科学研究院南海水产研究所广东省渔业生态环境重点实验室农业部南中国水产科学研究院南海水产研究所广东省渔业生态环境重点实验室农业部南海渔业资源开发利用重点实验室广东广州 510300 广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088

畜牧业和水产养殖业中通常使用抗生素来防治细菌感染病，如使用过量或滥用药物，则很可能引起耐药菌株的出现，从而对养殖环境和养殖品种的质量造成影响。因此，细菌耐药性研究已成为全球关注热点。本研究采用纸片扩散法对分离自不同地... 详细信息

畜牧业和水产养殖业中通常使用抗生素来防治细菌感染病，如使用过量或滥用药物，则很可能引起耐药菌株的出现，从而对养殖环境和养殖品种的质量造成影响。因此，细菌耐药性研究已成为全球关注热点。本研究采用纸片扩散法对分离自不同地区的鲍消化道中266 株异养细菌进行了药物敏感测试分析，以期了解其耐药率概况。

关键词：鲍耐药多重耐药

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鲍消化道中异养菌的耐药性概况

鲍消化道中异养菌的耐药性概况

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2015年全国海水养殖学术研讨会

作者：孙永婵王瑞旋赵曼曼曹超鲁义善王江勇广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 中国水产科学研究院南海水产研究所广东省渔业生态环境重点实验室农业部南中国水产科学研究院南海水产研究所广东省渔业生态环境重点实验室农业部南海渔业资源开发利用重点实验室广东广州510300 广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088

畜牧业和水产养殖业中通常使用抗生素来防治细菌感染病,如使用过量或滥用药物,则很可能引起耐药菌株的出现,从而对养殖环境和养殖品种的质量造成影响.因此,细菌耐药性研究已成为全球关注热点.本研究采用纸片扩散法对分离自不同地区的鲍... 详细信息

畜牧业和水产养殖业中通常使用抗生素来防治细菌感染病,如使用过量或滥用药物,则很可能引起耐药菌株的出现,从而对养殖环境和养殖品种的质量造成影响.因此,细菌耐药性研究已成为全球关注热点.本研究采用纸片扩散法对分离自不同地区的鲍消化道中266株异养细菌进行了药物敏感测试,以期了解其耐药率概况.结果显示:不同地区受试株对多种药物耐药率差异不显著,仅对个别抗生素存在差异.受试株对诺氟沙星耐药率最低,其次为氯霉素和恩诺沙星,耐药率低于10％,对青霉素G、卡那霉素、庆大霉素、利福平耐药率达55％以上.

关键词：鲍消化道异养细菌耐药性分析

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无乳链球菌Sip-GAPDH嵌合核酸疫苗的制备及免疫效果评价

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水产学报 2014年第11期38卷 1926-1936页

作者：王蓓李桂欢鲁义善汤菊芬吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室仲恺农业工程学院

为了研究无乳链球菌Sip-GAPDH嵌合核酸疫苗对罗非鱼链球菌病的免疫保护作用,本研究通过PCR和重叠延伸拼接技术(SOEing)获得融合基因Sip-GAPDH,连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)制备DNA疫苗,通过背鳍肌肉注射方式免疫吉富罗非鱼,免疫后第7... 详细信息

为了研究无乳链球菌Sip-GAPDH嵌合核酸疫苗对罗非鱼链球菌病的免疫保护作用,本研究通过PCR和重叠延伸拼接技术(SOEing)获得融合基因Sip-GAPDH,连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)制备DNA疫苗,通过背鳍肌肉注射方式免疫吉富罗非鱼,免疫后第7、28天取样,采用PCR及RT-PCR方法检测pcDNA-Sip-GAPDH在各个组织(包括肌肉、脑、头肾、脾脏、鳃和肝脏)中的表达情况。采用ELISA、Real-time PCR法和体外攻毒法分别分析各实验组不同时间血清抗体效价、免疫基因(IgM、IL-1β和CD8)表达变化规律和相对保护率,研究该嵌合性疫苗对吉富罗非鱼的保护效果。结果显示,实验组在免疫接种第7和第28天时,注射点周围的肌肉、脑、头肾、脾脏、鳃和肝脏均能检测到嵌合性质粒,实验组罗非鱼血清抗体效价均高于对照组并于21 d时达到峰值(1∶4 096);qPCR数据表明,实验组鱼体胸腺、头肾和脾脏的IgM、IL-1β和CD8基因的mRNA表达量均出现了上调,并且在胸腺、头肾和脾脏中的表达量分别在免疫后第12和第48 h达到峰值;免疫后42 d进行人工攻毒后计算免疫保护率为93.3%。以上研究结果表明,本研究构建的无乳链球菌Sip-GAPDH嵌合核酸疫苗在罗非鱼链球菌病防治中具有潜在的应用价值。

关键词：无乳链球菌罗非鱼 Sip-GAPDH 嵌合基因核酸疫苗免疫保护率

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吉富罗非鱼sIgM基因多克隆抗体的制备及组织定位分析

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水产学报 2014年第9期38卷 1211-1220页

作者：王培王蓓鲁义善蔡佳汤菊芬吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东海洋大学广东省水产经济动物病害控制重点实验室仲恺农业工程学院

为研究sIgM在吉富罗非鱼体内的组织分布及其在亚细胞水平上的定位,本实验利用纯化的SIGM融合蛋白,按照常规方法免疫新西兰大白兔,制备了兔抗吉富罗非鱼SIGM多克隆抗体;并对吉富罗非鱼肠、脾脏及鳃组织进行了免疫组织化学分析以及胶体金... 详细信息

为研究sIgM在吉富罗非鱼体内的组织分布及其在亚细胞水平上的定位,本实验利用纯化的SIGM融合蛋白,按照常规方法免疫新西兰大白兔,制备了兔抗吉富罗非鱼SIGM多克隆抗体;并对吉富罗非鱼肠、脾脏及鳃组织进行了免疫组织化学分析以及胶体金免疫电镜分析。结果显示,ELISA检测所获得的抗血清效价为1∶256 000,该血清能与SIGM融合蛋白发生特异性免疫反应。在肠和鳃组织中,阳性信号存在于富含黏液细胞的上皮细胞层表面,在杯状细胞和黏液细胞中则不存在;在脾脏组织中,阳性信号存在于特定的细胞中。免疫电镜结果显示SIGM主要存在于肠上皮细胞膜附近,并且在肠组织上皮细胞膜表面的微绒毛处含量较多;在鳃上皮组织中,SIGM主要存在于包围鳃丝和鳃小片的上皮细胞及部分红细胞内;而在脾脏组织淋巴细胞内部高尔基体的分泌小泡处存在大量的胶体金颗粒。研究表明,sIgM在鱼体黏膜免疫中具有重要作用,这为探讨鱼类sIgM的特性及功能奠定了基础,并丰富了鱼类黏膜免疫的研究内容。

关键词：吉富罗非鱼 SIGM 多克隆抗体组织定位

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红笛鲷IRAK-4基因cDNA全长的克隆及组织表达分析

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广东海洋大学学报 2015年第1期35卷 18-27页

作者：黄郁葱鲁义善简纪常吴灶和中国科学院南海海洋研究所广东广州510301 中国科学院大学北京100049 广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

白细胞介素-1受体相关激酶4（interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK-4）是一种参与机体先天性免疫和适应性免疫反应过程中的关键分子。采用RT-PCR和c DNA末端快速扩增（RACE-PCR）的方法从红笛鲷（Lutjanus sanguineus）头... 详细信息

白细胞介素-1受体相关激酶4（interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK-4）是一种参与机体先天性免疫和适应性免疫反应过程中的关键分子。采用RT-PCR和c DNA末端快速扩增（RACE-PCR）的方法从红笛鲷（Lutjanus sanguineus）头肾中克隆IRAK-4基因的c DNA全序列（登录号：KF279357）。该序列全长2 015 bp,包含5′非编码区（5′UTR）205 bp,3′非编码区（3′UTR）421 bp,开放阅读框（ORF）1 389 bp,编码462个氨基酸。根据推导的氨基酸序列预测其蛋白分子质量为52.0 ku,理论等电点为5.19。氨基酸序列比对结果显示,红笛鲷IRKA-4基因氨基酸序列与其他物种的同源性为54.2%~85.7%。系统进化分析结果显示,红笛鲷与斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）聚为一支,两者有较近的亲缘关系。用荧光定量PCR分析红笛鲷基因的组织表达差异,红笛鲷IRKA-4基因在各组织中均有不同程度的表达,其中在皮肤、肝脏和胃中表达量最高,其次是胸腺、鳃、心脏、肠、肌肉和脾脏,在头肾、后肾和脑的表达量最低。

关键词：红笛鲷 IRAK-4 基因克隆组织表达

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溶藻弧菌诱导马氏珠母贝血淋巴cDNA差减文库的构建及分析

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水产学报 2014年第1期38卷 127-135页

作者：王忠良简纪常鲁义善王蓓陈刚吴灶和广东海洋大学水产学院广东海洋大学南海水产经济动物增养殖重点实验室广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室仲恺农业工程学院

为了探讨马氏珠母贝免疫防御机制,筛选免疫防御相关功能基因,以致病性溶藻弧菌人工感染的马氏珠母贝血淋巴为材料,采用抑制性差减杂交（SSH）技术,构建了溶藻弧菌诱导的马氏珠母贝血淋巴cDNA差减文库;以马氏珠母贝管家基因β-actin作为... 详细信息

为了探讨马氏珠母贝免疫防御机制,筛选免疫防御相关功能基因,以致病性溶藻弧菌人工感染的马氏珠母贝血淋巴为材料,采用抑制性差减杂交（SSH）技术,构建了溶藻弧菌诱导的马氏珠母贝血淋巴cDNA差减文库;以马氏珠母贝管家基因β-actin作为差减指标检测该文库的差减效率;对选取的600个阳性克隆进行测序及生物信息学分析。结果显示,该文库的差减效率可达210倍;PCR阳性检测显示差减片段为100;50 bp,对随机挑取600个克隆的测序结果显示,共获得414个有效EST序列;通过BLAST同源性比对,有167个EST序列（占40.34%）与NCBI数据库中已知功能蛋白质具较高同源性,其中7个EST序列（占1.69%）与免疫防御相关基因同源;此外,204个EST（占49.28%）在数据库中未发现同源序列。研究表明,SSH技术能有效富集马氏珠母贝血淋巴差异表达基因,研究结果为探索马氏珠母贝免疫基因作用机理和调控机制奠定了基础。

关键词：马氏珠母贝溶藻弧菌抑制性消减杂交 cDNA文库

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罗非鱼免疫学研究进展

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生物技术通报 2014年第11期30卷 32-39页

作者：甘桢王蓓鲁义善汤菊芬简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

罗非鱼是我国主要的养殖鱼类之一,近年来频繁爆发的罗非鱼病害给罗非鱼产业造成了巨大的经济损失。鉴于免疫防治技术在水环境保护、食品安全等方面的优势,探讨鱼体免疫系统特性和免疫应答机制逐渐成为学术界的热点。就罗非鱼的非特异性... 详细信息

罗非鱼是我国主要的养殖鱼类之一,近年来频繁爆发的罗非鱼病害给罗非鱼产业造成了巨大的经济损失。鉴于免疫防治技术在水环境保护、食品安全等方面的优势,探讨鱼体免疫系统特性和免疫应答机制逐渐成为学术界的热点。就罗非鱼的非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫等方面的研究成果作一综述,旨在为今后深入研究罗非鱼病害的免疫防治技术提供一些可行的思路和有效的依据。

关键词：罗非鱼非特异性免疫体液免疫细胞免疫

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溶藻弧菌减毒活疫苗的构建及其免疫保护性

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中国水产科学 2014年第4期21卷 769-776页

作者：庞欢瑛周泽军丁燏闫秀英蔡双虎简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

采用Overlap PCR和同源重组技术,结合氯霉素(Cm)正向筛选和sacB基因蔗糖负向筛选,构建了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)Ⅲ型分泌系统(Type III secretion system,T3SS)注射装置蛋白vscO基因无标记框内缺失突变株ZJ03ΔvscO。在以石斑鱼... 详细信息

采用Overlap PCR和同源重组技术,结合氯霉素(Cm)正向筛选和sacB基因蔗糖负向筛选,构建了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)Ⅲ型分泌系统(Type III secretion system,T3SS)注射装置蛋白vscO基因无标记框内缺失突变株ZJ03ΔvscO。在以石斑鱼(Epinephelus coioides)为模型的感染实验中发现ZJ03ΔvscO的毒力较ZJ03下降约150倍。将ZJ03ΔvscO作为减毒活疫苗通过注射、浸泡的途径免疫石斑鱼(Epinephelus coioides)后,发现其对溶藻弧菌有很好的保护效应,其中注射组的免疫保护率达84%,浸泡组次之(68%)。血清效价分析显示,免疫后第4周注射组和浸泡组的效价均达到最高值,分别为1:2 048和1︰128。上述结果表明,所构建的ZJ03ΔvscO减毒活疫苗可有效提高石斑鱼对溶藻弧菌的免疫力,并且免疫和攻毒的途径可能是影响免疫保护效果的因子。本研究旨在为溶藻弧菌引起的鱼类疾病防治提供技术支撑。

关键词：溶藻弧菌 vscO 减毒活疫苗免疫保护

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