检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2008年第1期35卷 67-72页

作者：蔡双虎吴灶和简纪常鲁义善广东海洋大学水产学院湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025 广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025

Touchdown PCR扩增溶藻弧菌HY9901 AcrA基因部分序列,得一460 bp片段,再以反向PCR和巢式PCR联合扩增其侧翼序列,拼接得一由1101 nt组成,共编码366 aa的完整基因。该基因演绎的氨基酸序列与几种弧菌的同源性都比较高,与创伤弧菌YJ016、... 详细信息

Touchdown PCR扩增溶藻弧菌HY9901 AcrA基因部分序列,得一460 bp片段,再以反向PCR和巢式PCR联合扩增其侧翼序列,拼接得一由1101 nt组成,共编码366 aa的完整基因。该基因演绎的氨基酸序列与几种弧菌的同源性都比较高,与创伤弧菌YJ016、副溶血弧菌RIMD 2210633、灿烂弧菌12B01、霍乱弧菌O1 N16961同源性分别为76%、73%、71%和70%。

关键词：溶藻弧菌 AcrA基因基因克隆

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温度对溶藻弧菌HY9901株致病性相关蛋白的调控

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水生生物学报 2008年第6期32卷 787-793页

作者：庞欢瑛吴灶和简纪常鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025

将溶藻弧菌HY9901株置于15℃、20℃、28℃、37℃四个温度下培养,18h时分别测定细菌含量,胞外蛋白酶(Extracelluar protease,ECPase)表达量以及胞外产物(Extracellular product,ECP)对动物的致死性。结果表明,随着温度升高,菌液浓度、ECP... 详细信息

将溶藻弧菌HY9901株置于15℃、20℃、28℃、37℃四个温度下培养,18h时分别测定细菌含量,胞外蛋白酶(Extracelluar protease,ECPase)表达量以及胞外产物(Extracellular product,ECP)对动物的致死性。结果表明,随着温度升高,菌液浓度、ECPase的活性以及ECP对小鼠和红笛鲷的致死率先升高后下降。28℃培养的细菌浓度、ECPase的活性以及ECP对小鼠和红笛鲷的致死率均为最大。用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析不同温度培养下细菌的ECP和外膜蛋白(Outer membrane protein,OMP),结果显示,不同温度培养的溶藻弧菌ECP和OMP电泳图谱不同。溶藻弧菌主要ECP的分子量为70kD和62kD。ECP 70kD在20℃时的表达量最大,而28℃时ECP62 kD的蛋白浓度最高。45kD OMP随着温度升高,其合成量增大,28℃时达最大值;而40kD和34kD OMP则随着温度的升高而减弱。通过研究电泳纯化的ECP 62kD和ECP 70kD的酶活性和致死试验,证明ECP 62kD具有很强的酶活性和毒性,而ECP 70kD仅具有弱的酶活性和毒性。

关键词：溶藻弧菌胞外产物外膜蛋白胞外蛋白酶温度

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溶藻弧菌asp基因在大肠杆菌中表达活性研究及条件优化

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广东海洋大学学报 2008年第3期28卷 45-49页

作者：蔡双虎鲁义善吴灶和简纪常汤菊芬黄郁葱广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

为进一步研究溶藻弧菌碱性丝氨酸蛋白酶(ASP)蛋白生物学活性和功能,将构建的pET23d-asp在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对表达产物进行纯化分析,并优化表达条件。结果表明:在咪唑洗脱缓冲液浓度为100 mmol/L时,表达的可溶性ASP被大量洗脱,... 详细信息

为进一步研究溶藻弧菌碱性丝氨酸蛋白酶(ASP)蛋白生物学活性和功能,将构建的pET23d-asp在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对表达产物进行纯化分析,并优化表达条件。结果表明:在咪唑洗脱缓冲液浓度为100 mmol/L时,表达的可溶性ASP被大量洗脱,纯化的ASP相对分子质量约为42 000,具有蛋白活性;在诱导温度28℃、异丙基-β-D硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)浓度1 mmol/L及诱导时间16 h时,表达的活性ASP蛋白最多。

关键词：溶藻弧菌 asp基因基因构建基因表达表达条件大肠杆菌

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卵形鲳鲹结节病病原的分离与鉴定

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广东海洋大学学报 2008年第4期28卷 49-53页

作者：黄郁葱简纪常吴灶和鲁义善余坦健广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

从湛江港、阳江闸坡海水网箱养殖的患结节病卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)中分离一株细菌,回归感染结果证明该菌是引起卵形鲳鲹结节病的病原,对卵形鲳鲹半致死浓度为45 g-1。该菌株呈革兰阳性,好氧,具有弱抗酸性,菌体呈短杆状或细长分枝... 详细信息

从湛江港、阳江闸坡海水网箱养殖的患结节病卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)中分离一株细菌,回归感染结果证明该菌是引起卵形鲳鲹结节病的病原,对卵形鲳鲹半致死浓度为45 g-1。该菌株呈革兰阳性,好氧,具有弱抗酸性,菌体呈短杆状或细长分枝状,过氧化氢酶阳性,氧化酶阴性,还原硝酸盐,不水解酪素、黄嘌呤、酪氨酸、淀粉、明胶,以柠檬酸盐为唯一碳源生长。对其16S rDNA序列作Blast分析,构建系统进化树。结果表明,该菌株与诺卡氏菌属的菌株亲缘关系最近,且与鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolea JCM 3360T)的16S rDNA序列同源性高达99%。综合患病鱼的症状及病原菌形态、生理生化特性及16S rDNA序列的结果,该菌被鉴定为鰤鱼诺卡氏菌(***)。

关键词：卵形鲳鲹结节病诺卡氏菌 16S rDNA

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一种复方中草药饲料添加剂在红笛鲷网箱养殖中的应用

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广东海洋大学学报 2008年第4期28卷 59-64页

作者：陆志款简纪常吴灶和鲁义善汤菊芬广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

将黄芪、当归、甘草和山楂等粉碎后按一定比例配伍制成复方中草药饲料添加剂后,按质量分数0.5%、1.0%、1.5%和2.0%添加到基础饲料中,连续投喂红笛鲷(体重234.95±19.26 g,体长24.76±1.42 cm)56 d,研究复合中草药制剂对红笛鲷... 详细信息

将黄芪、当归、甘草和山楂等粉碎后按一定比例配伍制成复方中草药饲料添加剂后,按质量分数0.5%、1.0%、1.5%和2.0%添加到基础饲料中,连续投喂红笛鲷(体重234.95±19.26 g,体长24.76±1.42 cm)56 d,研究复合中草药制剂对红笛鲷生长、成活、免疫和抗病力的影响。结果表明,基础饲料中添加本复方中草药饲料添加剂能够显著促进红笛鲷的生长,增强其血清中的抗菌活力和溶菌酶活力,提高红笛鲷成活率及其对溶藻弧菌的免疫保护率,其中以添加1.5%(质量分数)和连续饲喂28 d效果为最佳(P<0.01)。

关键词：红笛鲷中草药饲料添加剂抗菌活力溶菌酶活力成活率免疫保护率

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苯酚和十二烷基苯磺酸钠对奥尼罗非鱼的急性毒性及安全评价

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广东海洋大学学报 2008年第3期28卷 100-102页

作者：余坦健简纪常黄郁葱简贺君广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室

用苯酚和十二烷基苯磺酸钠对奥尼罗非鱼进行急性毒性实验,以评价其在水环境中对奥尼罗非鱼的影响。研究表明:苯酚对奥尼罗非鱼的24、48、96 h的LC50分别为40.33、34.23、28.07 mg/L,十二烷基苯磺酸钠分别为10.06、9.14、8.48 mg/L;苯酚... 详细信息

用苯酚和十二烷基苯磺酸钠对奥尼罗非鱼进行急性毒性实验,以评价其在水环境中对奥尼罗非鱼的影响。研究表明:苯酚对奥尼罗非鱼的24、48、96 h的LC50分别为40.33、34.23、28.07 mg/L,十二烷基苯磺酸钠分别为10.06、9.14、8.48 mg/L;苯酚对奥尼罗非鱼SC及最大容许浓度MPC分别为2.807、0.281 mg/L,十二烷基苯磺酸钠对奥尼罗非鱼SC为0.848 mg/L,最大容许浓度MPC为0.085 mg/L。

关键词：奥尼罗非鱼急性毒性实验苯酚十二烷基苯磺酸钠

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一株海水氨氧化细菌的系统发育分析

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广东海洋大学学报 2008年第3期28卷 88-92页

作者：黄建军简纪常吴灶和丁燏广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

应用PCR技术扩增16S rRNA基因和amoA(ammonia monooxygenase subunit A)的基因片段,并测定其序列,对一株源于海水养殖水体的高效氨氧化细菌(ammonia-oxidizing bacteria,AOB)进行了系统发育分析。结果表明,经PCR扩增得到了1 098 bp的16S rRNA基因片段和491 bp的amoA基因片段,将其序列用NCBI-Blast软件在GenBank数据库中进行同源性检索后发现,该菌株的16S rRNA基因序列和amoA基因序列分别与亚硝化单胞菌Nitrosomonas ***20的相对应基因片段相似性分别为98.4%和96.7%。在此基础上构建了系统发育树,表明用该菌株的16S rRNA基因片段和amoA基因片段构建的系统发育树均与亚硝化单胞菌属类聚在一起,结合该菌株形态和生理生化特性,鉴定该株氨氧化细菌属亚硝化单胞菌。

关键词：氨氧化细菌 16S rRNA amoA 聚合酶链反应同源性分析

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十二烷基苯磺酸钠对奥尼罗非鱼免疫毒性的研究

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南方水产 2008年第3期4卷 33-37页

作者：余坦健简纪常林兴简贺君黄郁葱广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 福建省康地饲料开发有限公司福建福州350007

用5种浓度的十二烷基苯磺酸钠(sodiumdodecyl benzene sulfonic,SDBS)浸泡刺激奥尼罗非鱼(Tilapianilotica♀×***♂)8周,每2周采血样1次,测定免疫指标。0.05和0.10mg·L-1组对奥尼罗非鱼的氯化硝基四氮唑兰(nitro blue tetrazo... 详细信息

用5种浓度的十二烷基苯磺酸钠(sodiumdodecyl benzene sulfonic,SDBS)浸泡刺激奥尼罗非鱼(Tilapianilotica♀×***♂)8周,每2周采血样1次,测定免疫指标。0.05和0.10mg·L-1组对奥尼罗非鱼的氯化硝基四氮唑兰(nitro blue tetrazolium,NBT)阳性细胞和IgM含量无影响。0.40mg·L-1组在第8周时,IgM含量显著下降,而NBT阳性细胞突然急剧下降,与对照组相比差异极显著。0.70mg·L-1组从第4周起,NBT阳性细胞和IgM含量开始减少,第6周时差异显著。1.00mg·L-1组NBT阳性细胞数在第2周时量就已经有减少,但与对照组相比差异不显著,到第4周时差异极其显著;在第4周时IgM含量有显著差异,第6周后差异极显著。攻毒试验表明,0.40、0.70和1.00mg·L-1组的死亡率均高于对照组。以上结果表明,当SDBS浓度大于0.40mg·L-1时,奥尼罗非鱼免疫功能不同程度受到抑制,对NBT阳性细胞和IgM的影响存在着时间与剂量效应。

关键词：十二烷基苯磺酸钠(SDBS) 奥尼罗非鱼免疫指标 NBT阳性细胞 IgM

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应用RD-PCR技术构建溶藻弧菌的cDNA文库

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水产学报 2007年第6期31卷 731-736页

作者：王蓓吴灶和简纪常鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江 524025

应用限制性显示PCR（RD-PCR）技术构建溶藻弧菌poly（A）化mRNA的cDNA文库,筛选,收集巧妙地解决了由于细菌mRNA poly（A）化位点的高度多态性、用常规方法构建原核cDNA文库所遇到的文库大量重复冗余的难题。并进行筛选、收集cDNA片段进... 详细信息

应用限制性显示PCR（RD-PCR）技术构建溶藻弧菌poly（A）化mRNA的cDNA文库,筛选,收集巧妙地解决了由于细菌mRNA poly（A）化位点的高度多态性、用常规方法构建原核cDNA文库所遇到的文库大量重复冗余的难题。并进行筛选、收集cDNA片段进行测序,根据测序结果进行生物信息学分析和结果验证。实验结果表明,我们成功地构建了溶藻弧菌poly （A）化mRNA的cDNA文库,获得一百多个基因片段并对其中53个基因片段进行测序分析,获得了如细菌Ⅲ型分泌系统易位蛋白、趋药性传感器、类丝氨酸蛋白酶等毒力相关因子的基因片断。并且在一定程度上证实了poly（A）化在细菌中不是个别和偶然的现象。实验结果说明了我们所构建的溶藻弧菌poly（A）化mRNA的cDNA文库质量高,文库基因片段的重复性低,筛选基因片段效率高、目的性强。本文并探讨了限制性显示PCR技术在细菌poly（A）化mRNA的cDNA1文库构建中的应用价值。

关键词：溶藻弧菌 cDNA文库限制性显示PCR

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凡纳滨对虾血清凝集素、溶血素的特性研究

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海洋科学 2006年第6期30卷 1-5页

作者：曹剑香简纪常吴灶和鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）的血清凝集素和溶血素部分特性的研究结果表明，凡纳滨对虾血清凝集素热稳定性较差，温度高于50℃时，活性呈明显减弱至无活性，其最适温度为25～45℃；最适pH为8～9；盐度为24～48时，凝集活性最... 详细信息

对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）的血清凝集素和溶血素部分特性的研究结果表明，凡纳滨对虾血清凝集素热稳定性较差，温度高于50℃时，活性呈明显减弱至无活性，其最适温度为25～45℃；最适pH为8～9；盐度为24～48时，凝集活性最强，当盐度超过48或者低于6时，凝集活性较差；凝集素活性能被浓度高于16mmol／L（包括16mmol／L）EDTA—Na2，D-葡萄糖，D-果糖及D-半乳糖完全抑制。Cu3^2＋使凝集素的活性完全丧失，而Ca^2＋和Mg^2＋能使凝集活性明显增强。45～60℃时，溶血素活性逐渐增强，60℃时达到最高；当pH6～9时，溶血素的活性较强；盐度为18～36时，能增强溶血素的活性；EDTA—Na2对溶血素的活性几乎无影响；Cu^2＋使溶血素丧失活性，Mg^2＋能增强溶血活性，Mn^2＋对溶血素的活性没看影响,而Ca^2＋知Ra^2＋时溶血素有轻微的抑制作用。

关键词：凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) 凝集素溶血素

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