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2016第十一届全国免疫学学术大会

作者：冯沛然黄建芳向军俭郝代玲王敏珍暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632

目的：制备PD-L1的mAb并应用于肿瘤检测与抑瘤研究。方法：应用杂交瘤细胞技术制备PD-L1的mAb并用腹水方式产生大量PD-L1 mAb;用Western-blot方法检验制备的PD-L1 mAb与人肿瘤细胞裂解液中的PD-L1结合、间接荧光标记方法通过流式细胞仪... 详细信息

目的：制备PD-L1的mAb并应用于肿瘤检测与抑瘤研究。方法：应用杂交瘤细胞技术制备PD-L1的mAb并用腹水方式产生大量PD-L1 mAb;用Western-blot方法检验制备的PD-L1 mAb与人肿瘤细胞裂解液中的PD-L1结合、间接荧光标记方法通过流式细胞仪分析制备的PD-L1 mAb与人肿瘤细胞膜表面的PD-L1结合、肿瘤免疫组化方法鉴定PD-L1 mAb;通过用表达PD-1的T细胞细胞对不同程度表达PD-L1蛋白的肿瘤进行杀伤，并与加入PD-L1抗体，检测其T细胞毒性、肿瘤细胞凋亡情况、细胞因子表达变化，研究PD-L1抗体是否能增强T细胞的杀伤活性。

关键词： PD-L1 单克隆抗体免疫检验点免疫治疗

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EGFL6基因沉默对人黑素瘤细胞增殖及侵袭的影响

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肿瘤 2015年第4期35卷 370-376页

作者：吕成定吴斌华翁锐强杨晶邓宁广东省分子免疫与抗体工程重点实验室暨南大学抗体工程研究中心广东广州510632

目的：通过特异性小干扰RNA（small interference RNA,si RNA）抑制人黑素瘤A375细胞中表皮生长因子样结构域蛋白6（epidermal growth factorlike-domain 6,EGFL 6）基因表达,探讨EGFL 6基因沉默对人黑素瘤细胞增殖及侵袭的影响。方法... 详细信息

目的：通过特异性小干扰RNA（small interference RNA,si RNA）抑制人黑素瘤A375细胞中表皮生长因子样结构域蛋白6（epidermal growth factorlike-domain 6,EGFL 6）基因表达,探讨EGFL 6基因沉默对人黑素瘤细胞增殖及侵袭的影响。方法：设计合成靶向EGFL 6基因的siRNA（命名为EGFL6-siRNA）,通过脂质体转染法将该siRNA转染入黑素瘤A375细胞,然后采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测黑素瘤A375细胞中EGFL6 mRNA及蛋白的表达水平,细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）法和Transwell实验分别检测A375细胞增殖和侵袭能力的变化。结果：在成功转染EGFL6-siRNA 48 h后,A375细胞中EGFL6 mRNA及蛋白表达水平均明显下降（P值均〈0.01）。EGFL6-siRNA转染组A375细胞在转染后24~72 h各时间点的细胞增殖能力均受到明显抑制（P值均〈0.01）,且细胞侵袭能力显著降低（P〈0.01）。结论：特异性siRNA能够有效地沉默人黑素瘤A375细胞中EGFL 6基因的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭。

关键词：黑素瘤 RNA干扰基因表达细胞增殖细胞迁移分析表皮生长因子样结构域蛋白6

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VEGF/bFGF复合多肽疫苗对雌性小鼠的毒性及其生殖的影响

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中国病理生理杂志 2015年第7期31卷 1184-1188页

作者：翁锐强潘磊彭卉彤吕成定邓宁暨南大学生命科学技术学院抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广东广州510632

目的:初步探究血管内皮生长因子(VEGF)/碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)复合多肽疫苗(VEGF/b FGF complex peptide vaccine,VBP3)对雌性小鼠的毒性及其生殖的影响。方法:通过镍离子亲和层析柱纯化VBP3蛋白,将纯化获得的VBP3免疫雌性BALB/... 详细信息

目的:初步探究血管内皮生长因子(VEGF)/碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)复合多肽疫苗(VEGF/b FGF complex peptide vaccine,VBP3)对雌性小鼠的毒性及其生殖的影响。方法:通过镍离子亲和层析柱纯化VBP3蛋白,将纯化获得的VBP3免疫雌性BALB/c小鼠,酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测小鼠血清抗体效价和特异性,监测亲本小鼠体重,测定亲本小鼠脏器重量并对小鼠脏器进行HE染色观察;将免疫小鼠与未免疫雄性小鼠交配后,测定F1代小鼠存活率、体重、相关脏器重量,并对相关脏器进行HE染色观察。结果:间接ELISA检测结果显示免疫小鼠血清中抗VEGF、抗b FGF抗体滴度分别为1∶3 000、1∶20 000,且免疫组F1代小鼠能检测出低滴度的抗b FGF抗体,但抗VEGF抗体不能检出。在小鼠生产率实验中,免疫组与对照组崽鼠数目未见明显差异,但免疫组F1代小鼠存活率较对照组降低(P<0.05)。在亲本小鼠中,免疫组小鼠各脏器重量与对照组比较均未有差异,而在F1代小鼠中,2个组别的小鼠肝脏重量存在差异,但其它脏器重量未有差异;HE染色显示,在亲本小鼠中,2个组别小鼠的各脏器形态未有明显差异;在F1代小鼠中,免疫组F1代小鼠的肝脏与对照组相比存在形态差异。结论:VEGF/b FGF复合多肽疫苗未对亲本小鼠主要脏器造成直接损伤,但对亲本小鼠的生殖及F1代小鼠健康具有一定的影响。

关键词：血管内皮生长因子碱性成纤维细胞生长因子多肽疫苗

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直接竞争ELISA检测大米样品中的重金属镉

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免疫学杂志 2015年第6期31卷 528-532页

作者：刘艳梅钟辉黄建芳谈思怡刘诗琴邵晨晨向军俭暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州市疾病与食品安全免疫学快速检测重点实验室广州510632

目的直接竞争ELISA方法检测大米样品中重金属镉。方法用纳米Ti O2对微波消解处理的大米样品中的重金属镉进行富集,通过比较不同p H值和不同洗脱体积来优化纳米Ti O2富集方法,再用直接竞争ELISA检测重金属镉的含量。结果在p H为9时,纳米T... 详细信息

目的直接竞争ELISA方法检测大米样品中重金属镉。方法用纳米Ti O2对微波消解处理的大米样品中的重金属镉进行富集,通过比较不同p H值和不同洗脱体积来优化纳米Ti O2富集方法,再用直接竞争ELISA检测重金属镉的含量。结果在p H为9时,纳米Ti O2对重金属镉有良好的吸附性,20 mg/ml的EDTA·2Na可将纳米Ti O2吸附的镉定量洗脱。用纯化后的镉单克隆抗体建立直接竞争ELISA检测方法,并进行灵敏度和特异性分析,其灵敏度（IC50）为19 ng/ml,检测限（IC10）为2.1 ng/ml,检测范围（IC20~IC80）为3.6~98.2 ng/ml。用优化后的直接竞争ELISA对富集洗脱后的镉溶液进行检测,检测效果满足国家检测标准。结论本研究对6份市售大米样品采用微波消解和富集,通过直接竞争ELISA检测其镉含量,所得结果与仪器法测定结果一致,可用于实际样品的快速检测。

关键词：重金属镉单克隆抗体直接竞争ELISA 纳米TiO2富集

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抗人PD-L1单克隆抗体的制备及其抗体特性的研究

抗人PD-L1单克隆抗体的制备及其抗体特性的研究

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第十届全国免疫学学术大会

作者：冯沛然黄建芳向军俭暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室

背景:PD-L1(1(Programmed Death-Ligand 1,程序性死亡配体)表达在活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞表面。在癌组织上可见异常高表达,如肺癌、肝癌、乳腺癌、鳞状细胞癌及卵巢癌组织等。在肿瘤邻近的正常组织中低水平表达,提示... 详细信息

背景:PD-L1(1(Programmed Death-Ligand 1,程序性死亡配体)表达在活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞表面。在癌组织上可见异常高表达,如肺癌、肝癌、乳腺癌、鳞状细胞癌及卵巢癌组织等。在肿瘤邻近的正常组织中低水平表达,提示它参与肿瘤发生发展,并在削弱抗肿瘤免疫反应中有重要作用。PD-1作为PD-L1的配体主要表达于活化T细胞,PD-1与PD-L1结合后,可抑制T细胞的增殖以及IL-2和IFN-γ等细胞因子的产生,并抑制B细胞的增殖、分化和Ig的分泌。由于PD-1/PD-L1在肿瘤免疫中发挥着重要作用,因此阻断此通路成为肿瘤免疫治疗的一个新方法,而阻断其通路可采用抗PD-1和抗PD-L1的单克隆抗体。目的 :制备PD-L1的m Ab杂交瘤细胞系并对其分泌的抗体特性进行研究。方法 :用重组人PD-L1胞外段免疫Balb/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,通过克隆筛选方法选择能稳定分泌抗PD-L1抗体的杂交瘤细胞株并进行腹水型抗体的制备,用间接ELISA和Western-blot等方法研究其分泌抗体与PD-L1的结合特性。结果 :共制备出4株高亲和力、高特异性的抗人PD-L1 m Ab,杂交瘤细胞培养上清效价1×104,腹水效价达到2×***-blot结果显示制备的抗PD-L1 m Ab能与PD-L1特异性结合。结论 :制备的抗PD-L1杂交瘤细胞株能稳定分泌抗PD-L1抗体,其与PD-L1的特异性结合有望成为一种阻断型抗体,通过阻断PD-1/PD-L1通路激活体内以T细胞为主的抗肿瘤免疫反应。PD-L1抗体在对在自身免疫病、肿瘤生长、病毒感染的免疫检测中有着广阔的应用前景。

关键词： PD-L1 杂交瘤免疫检测肿瘤免疫

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抗人PD-L1单克隆抗体的制备及其抗体特性的研究

抗人PD-L1单克隆抗体的制备及其抗体特性的研究

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：冯沛然黄建芳向军俭暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室

背景：PD-L1(1(Programmed Death-Ligand 1,程序性死亡配体)表达在活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞表面。在癌组织上可见异常高表达,如肺癌、肝癌、乳腺癌、鳞状细胞癌及卵巢癌组织等。在肿瘤邻近的正常组织中低水平表达,提... 详细信息

背景：PD-L1(1(Programmed Death-Ligand 1,程序性死亡配体)表达在活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞表面。在癌组织上可见异常高表达,如肺癌、肝癌、乳腺癌、鳞状细胞癌及卵巢癌组织等。在肿瘤邻近的正常组织中低水平表达,提示它参与肿瘤发生发展,并在削弱抗肿瘤免疫反应中有重要作用。

关键词： PD-L1 杂交瘤免疫检测肿瘤免疫

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原核表达MurA蛋白并制备其多克隆抗体用于免疫磁珠快速检测单增李斯特菌

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微生物学通报 2014年第6期41卷 1234-1242页

作者：童吉宇李志清闻一鸣李雨辰向军俭广东省分子免疫与抗体工程重点实验室暨南大学抗体工程研究中心广东广州510632

【目的】制备MurA多抗,结合免疫磁珠与选择平板进行单增李斯特菌的快速检测,建立单增李斯特菌的免疫磁珠快速检测方法。【方法】构建MurA的原核表达载体,转化大肠杆菌进行优化表达。镍柱纯化表达产物,质谱鉴定重组蛋白,再免疫小鼠,制备... 详细信息

【目的】制备MurA多抗,结合免疫磁珠与选择平板进行单增李斯特菌的快速检测,建立单增李斯特菌的免疫磁珠快速检测方法。【方法】构建MurA的原核表达载体,转化大肠杆菌进行优化表达。镍柱纯化表达产物,质谱鉴定重组蛋白,再免疫小鼠,制备其多克隆抗体。用所获多抗制备免疫磁珠,建立单增李斯特菌免疫磁珠-选择性培养基检测方法,并对人工污染牛奶样品进行检测。【结果】在大肠杆菌中高效表达了分子量约为72 kD的可溶性融合蛋白,质谱鉴定其为MurA蛋白;免疫小鼠获得的抗血清效价达1:10 000,与伤寒沙门氏菌、副溶血弧菌、大肠杆菌及属内其它病原菌均无交叉;所建立的免疫磁珠-选择性培养基检测法可检出浓度为103 CFU/mL及以上的单增李斯特菌,仅与英诺克李斯特菌存在一定交叉反应;牛奶样品单次仅需9 h增菌就能被检出,较常规增菌时间缩短39 h;检测限为0.4 CFU/mL。【结论】表达并纯化得到高纯度的单增李斯特菌MurA蛋白,制备的鼠源多克隆抗体亲和力高,特异性好;建立了快速检测单增李斯特菌的免疫磁珠联合选择性培养基法,在灵敏度不变的情况下,实现24 h内成功对牛奶样品的检测,较国标法减少42 h以上。

关键词：单增李斯特菌 MurA 多克隆抗体免疫磁珠

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重金属免疫学快速检测技术研究进展

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食品科学 2014年第17期35卷 306-311页

作者：刘艳梅钟辉向军俭广东省分子免疫与抗体工程重点实验室暨南大学抗体工程研究中心广东广州510632

重金属免疫学检测技术作为一种新型检测技术,与传统检测方法相比具有灵敏、快速、携带方便、费用低等优点,可用于现场快速检测。本文概述近年来重金属免疫学检测技术的最新研究进展,并对该类方法的发展趋势和应用前景进行展望。

关键词：重金属单克隆抗体免疫检测酶联免疫吸附反应胶体金免疫层析法荧光偏振免疫分析法

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二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定

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免疫学杂志 2014年第6期30卷 550-559页

作者：张晋霞姜浩武亢中奎潘磊王金胜刘羿辰邓宁暨南大学生命科学技术学院暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632

目的为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。方法将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中... 详细信息

目的为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。方法将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并进行镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化。间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK8法和划痕实验检验其肿瘤抑制作用。结果成功构建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表达载体,并获得4株高表达酵母工程菌,经1%甲醇诱导96 h表达量即可恒定,表达量可达158 mg/L。SDS-PAGE及Western blot结果显示,目的蛋白大小约Mr35 000左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF特异性结合。CCK8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌细胞株A549的增殖,最大抑制率为43.4%。划痕实验表明ds-Diabody可以抑制肿瘤细胞的迁移。结论研究结果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在毕赤酵母中可获得高效表达,且具有很好的生物学活性。

关键词： bFGF ds—Diabody 毕赤酵母肺癌细胞

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VEGF/bFGF复合多肽抗体的制备及对卵巢癌细胞增殖抑制作用

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免疫学杂志 2014年第6期30卷 512-515,538页

作者：潘磊张晋霞王金胜翁锐强邓宁暨南大学生命科学技术学院抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632

目的研究VEGF/bFGF复合多肽(VBP3)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管新生和人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制的影响。方法通过镍离子柱亲和层析和离子交换层析方法纯化出诱导表达的VBP3蛋白,免疫Balb/c小鼠制备抗bFGF和抗VEGF的多克隆抗体,... 详细信息

目的研究VEGF/bFGF复合多肽(VBP3)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管新生和人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制的影响。方法通过镍离子柱亲和层析和离子交换层析方法纯化出诱导表达的VBP3蛋白,免疫Balb/c小鼠制备抗bFGF和抗VEGF的多克隆抗体,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测抗体效价和特异性。成管试验研究抗体对HUVEC细胞的成管影响,CCK-8检测抗体对SKOV3增殖抑制的影响。Western blot检测抗体对bFGF和VEGF下游信号通路中Erk1/2和Akt磷酸化的影响。结果 SDS-PAGE鉴定出了纯度较高的VBP3蛋白;ELISA方法检测出了高滴度的抗体;HUVEC的成管实验结果表明VBP3多克隆抗体在一定程度上抑制了HUVEC的成管;CCK-8检测出抗体体外抑制了SKOV3细胞增殖,在抗体质量浓度为100μg/ml时抑制率达到39.20%。Western blot结果表明抗bFGF和抗VEGF多克隆抗体显著抑制FGFR和VEGFR下游信号通路中Erk1/2和Akt的磷酸化。结论 VBP3可能作为一种多肽疫苗抑制肿瘤的生长。

关键词： bFGF VEGF 复合多肽血管新生增殖抑制

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