检索结果-内蒙古大学图书馆

单核细胞增生李斯特菌ladR基因在两种原核表达载体中的克隆表达及纯化分析

现代食品科技 2019年第10期35卷 58-65页

作者：陈月桃陈谋通吴清平张菊梅程健恒孙奇凡王涓广东省微生物研究所广东省科学院华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070 华南农业大学食品学院广东广州510642

利用特异性引物扩增ladR基因序列,分别构建单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)ladR基因的两种原核表达载体,即含有6个His标签的pET-28a-ladR表达载体和含有GST标签的pGEX-4T-ladR表达载体。通过诱导时间、温度和浓度优化两... 详细信息

利用特异性引物扩增ladR基因序列,分别构建单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)ladR基因的两种原核表达载体,即含有6个His标签的pET-28a-ladR表达载体和含有GST标签的pGEX-4T-ladR表达载体。通过诱导时间、温度和浓度优化两种表达载体的蛋白表达条件,比较分析两种表达载体的LadR蛋白可溶性表达水平,利用Western-Blot进行LadR蛋白表达验证。本研究成功构建了pET-28a-ladR和pGEX-4T-ladR表达载体,在大肠杆菌BL21中分别表达出His-LadR和GST-LadR融合蛋白。通过凝血酶切除GST标签,纯化后得到LadR蛋白。在最佳表达条件IPTG为0.5 mmol/L,22℃诱导过夜下,pGEX-4T-ladR表达载体中LadR的表达量比pET-28a-ladR(IPTG为1.0 mmol/L,22℃诱导过夜)中His-LadR蛋白的表达量高4.48倍。本研究结果表明,GST标签有利于ladR基因的可溶性表达,为后续的LadR蛋白的功能分析和转录调控机理研究奠定了良好基础。

关键词：单增李斯特菌 LadR蛋白原核表达蛋白纯化

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白木香内生真菌多节孢Nodulisporium sp. A4的化学成分研究

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中国中药杂志 2011年第23期36卷 3276-3280页

作者：李冬利吴正超陈玉婵陶美华章卫民广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地广东广州510070 中国科学院南海海洋研究所广东广州510301

目的:研究来源于药用植物白木香、具有抗肿瘤活性的内生真菌多节孢Nodulisporium sp.A4的化学成分。方法:采用马铃薯葡萄糖(PD)液体培养基培养、乙酸乙酯萃取得到内生真菌A4的发酵液和菌丝体粗提物,采用正相硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱... 详细信息

目的:研究来源于药用植物白木香、具有抗肿瘤活性的内生真菌多节孢Nodulisporium sp.A4的化学成分。方法:采用马铃薯葡萄糖(PD)液体培养基培养、乙酸乙酯萃取得到内生真菌A4的发酵液和菌丝体粗提物,采用正相硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱色谱、制备薄层色谱和重结晶等方法对粗提物进行分离纯化,运用现代波谱技术(NMR,MS)结合文献对照鉴定化合物结构。采用MTT法测定化合物的体外抗肿瘤活性。结果:从内生真菌A4的发酵液中分离获得7个化合物,分别为5-methyl-2-vinyltetrahydrofuran-3-ol(1),6-methyl-2-(5-methyl-5-vinyltetrahydrofuran-2-yl)hept-5-en-2-ol(2),6α-hydroxycyclonerolidol(3),rel-(1S,4S,5R,7R,10R)-10-desmethyl-1-methyl-11-eudesmene(4),酪醇(5),8-甲氧基-1-萘酚(6),1,8-二甲氧基萘(7)。从内生真菌A4的菌丝体中分离获得3个化合物,分别为麦角甾醇(8),过氧化麦角甾醇(9),啤酒甾醇(10)。药理活性评价结果表明在作用浓度为100 mg.L-1时,化合物3和4对肿瘤细胞SF-268和NCI-H460的抑制率分别为89.1%,44.2%和82.3%,79.8%。结论:化合物1为新的天然产物,化合物2,3,7,10为首次从该属真菌中分离得到,化合物3和4对肿瘤细胞SF-268和NCI-H460的增殖具有一定的抑制作用。

关键词：内生真菌化学成分白木香多节孢

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阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶的原核表达及其多克隆抗体制备

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食品工业科技 2013年第2期34卷 198-201页

作者：徐晓可吴清平张淑红张菊梅李程思郭伟鹏广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地广东省微生物研究所广东广州510070

以阪崎肠杆菌(ATCC29544)的基因组DNA为模板通过PCR扩增出α-葡萄糖苷酶基因malA,将其克隆入表达载体PET22b(+),构建重组表达质粒pET22b-malA。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),进行优化表达。采用尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融... 详细信息

以阪崎肠杆菌(ATCC29544)的基因组DNA为模板通过PCR扩增出α-葡萄糖苷酶基因malA,将其克隆入表达载体PET22b(+),构建重组表达质粒pET22b-malA。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),进行优化表达。采用尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融合蛋白,然后再免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过ELISA测定效价,并通过免疫荧光法鉴定与菌体表面结合能力。结果表明克隆的目的基因全长1677bp,与Genebank的malA比较具有100%的同源性。带His标签的融合蛋白以包涵体形式表达,其最优化的表达条件是37℃下用0.8mmol/L IPTG诱导5h。ELISA测定效价为5×105;免疫荧光法鉴定表明多克隆抗体能与阪崎肠杆菌表面结合。本实验为阪崎肠杆菌的免疫磁珠检测奠定了基础。

关键词：阪崎肠杆菌 α-葡萄糖苷酶克隆原核表达多克隆抗体

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冬虫夏草促繁地土壤真菌种群结构的变性梯度凝胶电泳技术分析

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中草药 2013年第4期44卷 478-481页

作者：李挺宋斌王超群李泰辉广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地广东广州510070

目的采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对冬虫夏草促繁地土壤真菌多样性进行初步研究。方法利用PCR方法选择特异性引物ITS3-GC和ITS4扩增ITS rDNA基因的ITS2片段,结合DGGE分离技术,并借助生物信息学软件进行分析。结果所测的土壤样品中真... 详细信息

目的采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对冬虫夏草促繁地土壤真菌多样性进行初步研究。方法利用PCR方法选择特异性引物ITS3-GC和ITS4扩增ITS rDNA基因的ITS2片段,结合DGGE分离技术,并借助生物信息学软件进行分析。结果所测的土壤样品中真菌ITS2基因序列与GenBank已报道的丝盖伞属Inocybe(Fr.)Fr.、口蘑属Tricholoma(Fr.)Staude、根肿黑粉菌属Entorrhiza ***及未确定的子囊菌Ascomycota、土壤真菌等的序列相似性较高,土壤真菌种群结构相似性仅有19.4%～50.1%。结论冬虫夏草促繁地土壤真菌多样性丰富。

关键词：冬虫夏草土壤真菌多样性变性梯度凝胶电泳技术

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用于PCR扩增的细菌DNA提取方法比较

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华南农业大学学报 2013年第3期34卷 439-442页

作者：冯广达陈美标羊宋贞朱红惠广东省微生物研究所/广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070

以14个属的革兰阴性菌和阳性菌为研究对象,采用16S rRNA基因PCR扩增对4种细菌DNA提取法进行了比较.结果表明,对细菌DNA的提取效果排序,依次为冻融法、煮沸法、碱解法、ROSE法.冻融法效果最好,具有成本低、省时省力、无污染等优点,但仍... 详细信息

以14个属的革兰阴性菌和阳性菌为研究对象,采用16S rRNA基因PCR扩增对4种细菌DNA提取法进行了比较.结果表明,对细菌DNA的提取效果排序,依次为冻融法、煮沸法、碱解法、ROSE法.冻融法效果最好,具有成本低、省时省力、无污染等优点,但仍存在少数革兰阳性菌DNA提取失败的现象.因此,在菌株较多的情况下可先采用冻融法提取细菌DNA,对少数提取失败的菌株,弃冻融法得到的上清液,再以SDS法、CTAB法或DNA试剂盒的提取进行补充.采用该操作流程既能节省成本和时间,又减少了提取过程中有机废弃物的产生.

关键词： DNA提取冻融法 16S rRNA基因 PCR

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矿泉水臭氧消毒中溴酸盐的形成与控制

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食品与生物技术学报 2013年第12期32卷 1298-1302页

作者：张永清吴清平张菊梅杨秀华广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东广州510070

为控制矿泉水中溴酸盐含量,采用改变臭氧浓度的方法,对添加溴离子的矿泉水、超纯水和自来水分别进行臭氧氧化5 min,观察臭氧氧化过程中臭氧、溴离子以及水质对溴酸盐生成的影响;同时利用向自来水中添加一定浓度溴离子的方法,研究CT值(Oz... 详细信息

为控制矿泉水中溴酸盐含量,采用改变臭氧浓度的方法,对添加溴离子的矿泉水、超纯水和自来水分别进行臭氧氧化5 min,观察臭氧氧化过程中臭氧、溴离子以及水质对溴酸盐生成的影响;同时利用向自来水中添加一定浓度溴离子的方法,研究CT值(Ozone Concentration×Contact Time,CT)对溴酸盐生成的影响。结果表明,随着臭氧浓度和溴离子浓度的增加,溴酸盐生成量增加。当臭氧质量浓度≥0.4 mg/L,添加相同浓度的溴离子时,矿泉水中生成的溴酸盐量大于自来水和超纯水中溴酸盐量。矿泉水不同,添加相同浓度的溴离子,生成的溴酸盐量也不同,但当臭氧质量浓度≥0.4 mg/L时,溴酸盐量均大于10μg/L。CT值增大导致溴酸盐生成量大幅增加。因此,可以通过降低臭氧浓度和溴离子浓度的方法,减少臭氧消毒中溴酸盐的生成量。

关键词：矿泉水臭氧溴离子溴酸盐

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日化产品中洋葱伯克霍尔德氏菌复合群(Bcc)的分类和神秘伯克霍尔德氏菌的耐药性研究

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微生物学报 2023年第9期63卷 3616-3627页

作者：张淑瑶文霞苏皑庭黄迪陶宏兵陈漪汶谢小保广东省科学院微生物研究所、广东省微生物分析检测中心、华南应用微生物国家重点实验室、农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室、农业农村部农业微生物组学重点实验室、广东省菌种保藏与应用重点实验室广东广州510070 广东迪美生物技术有限公司广东广州510663

【目的】对从2020–2022年不同日化产品中分离的29株洋葱伯克霍尔德氏菌复合群(Burkholderia cepacia complex,Bcc)进行分类和分型,另将2020年前来源于日化产品中6株被鉴定为Burkholderia lata的菌株进行分类更正。探究神秘伯克霍尔德氏... 详细信息

【目的】对从2020–2022年不同日化产品中分离的29株洋葱伯克霍尔德氏菌复合群(Burkholderia cepacia complex,Bcc)进行分类和分型,另将2020年前来源于日化产品中6株被鉴定为Burkholderia lata的菌株进行分类更正。探究神秘伯克霍尔德氏菌(Burkholderia aenigmatica)的耐药性。【方法】本文主要应用多位点分型研究方法(multilocus sequence typing,MLST),PCR扩增atpD、gltB、gyrB、recA、lepA、phaC和trp B 7个管家基因片段,将测序结果与MLST数据库中的数据比对分析,获得菌株各管家基因的编号和ST型(sequence type),对本检测中心分离自日化产品的Bcc进行分型;利用多位点序列分析(multilocus sequence analysis,MLSA),结合MLST中等位基因的核苷酸序列构建进化树,从而对Bcc进行系统发育分析和鉴定。利用最小抑菌浓度法(minimum inhibitory concentration,MIC)测定Bcc对常见防腐剂(1,3-二羟甲基-5,5-二甲基乙内酰脲、卡松、苯甲酸钠、山梨酸钾)和抗生素(头孢他啶、卡那霉素、四环素)的耐药性。【结果】本文29株Bcc菌株共有5个菌种类型(***、***、***、***和***)和15个不同分型,分类过程中发现了7个新等位基因,7个新ST分型(ST2118、ST2120、ST2122、ST2127、ST2128、ST2129和ST2130)并鉴定了其种类。另将2020年前来源于样品中6株被鉴定为Burkholderia lata的菌株用MLST法重新分类鉴定,其鉴定结果均为Burkholderia aenigmatica。11株***分离株中只有1株对头孢他啶耐药,其他菌均对其不耐药,分别有9株和8株***对卡那霉素和四环素耐药。卡松和1,3-二羟甲基-5,5-二甲基乙内酰脲(1,3-dimethylmethylol-5,5-dimethylhydantoin,DMDMH)在最大允许量范围内能有效抑制***的生长,有9株***表现出苯甲酸钠和山梨酸钾的耐药性。【结论】Bcc的分类较为复杂且存在许多未知等位基因和分型,Burkholderia aenigmatica已经成为污染日化产品的主要Bcc菌株。大部分***对氨基糖苷类和四环素类抗生素具有耐药性,大部分来自日化产品中的***对苯甲钠和山梨酸钾均具有耐药性。

关键词：洋葱伯克霍尔德氏菌复合群多位点序列分析神秘伯克霍尔德氏菌耐药性日化产品

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ATP生物发光测定试剂研究进展

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微生物学通报 2012年第11期39卷 1661-1667页

作者：吴慧清李程思吴清平张菊梅广东省微生物研究所、广东省菌种保藏与应用重点实验室、广东省微生物应用新技术公共实验室、广东省华南应用微生物重点实验室省部共建国家实验室培育基地广东广州510070

萤火虫荧光素酶是ATP生物发光试剂的关键组成部分,可通过萤火虫尾提取纯化或基因工程技术制备,酶的活力和纯度决定了ATP生物发光试剂的性能。迄今许多先进技术在ATP生物发光试剂的制备中均有应用,包括酶基因工程改造技术、ATP循环的酶... 详细信息

萤火虫荧光素酶是ATP生物发光试剂的关键组成部分,可通过萤火虫尾提取纯化或基因工程技术制备,酶的活力和纯度决定了ATP生物发光试剂的性能。迄今许多先进技术在ATP生物发光试剂的制备中均有应用,包括酶基因工程改造技术、ATP循环的酶法放大技术、荧光素酶蛋白的活力及发光稳定技术,特异的细胞ATP提取技术等。ATP生物发光试剂的研究焦点主要集中在提高发光试剂的检测灵敏度和性能、增加产品的适应性等方面。

关键词： ATP生物发光试剂萤火虫荧光素酶制备研究

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广藿香内生真菌类群分析及其抗菌活性研究

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中国中药杂志 2017年第4期42卷 657-662页

作者：王营李浩华谭国慧李赛妮严明理章卫民湖南科技大学化学化工学院湖南湘潭411201 广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070

从广藿香的根、茎、叶中共分离得到72株内生真菌,根据ITS序列分析鉴定为25属40个种,其中拟茎点霉属Phomopsis、刺盘孢属Colletotrichum、镰刀菌属Fusarium为优势种群;广藿香内生真菌的分布存在明显的组织特异性,以茎中内生真菌的分布最... 详细信息

从广藿香的根、茎、叶中共分离得到72株内生真菌,根据ITS序列分析鉴定为25属40个种,其中拟茎点霉属Phomopsis、刺盘孢属Colletotrichum、镰刀菌属Fusarium为优势种群;广藿香内生真菌的分布存在明显的组织特异性,以茎中内生真菌的分布最多,占分离菌株总数的78%;活性测试结果显示共有15个属34株内生真菌至少对1种供试菌具有抗菌活性。结果表明广藿香内生真菌多样性丰富,部分菌株具有明显的抑菌活性,值得进一步深入研究。

关键词：内生真菌多样性广藿香抗菌活性

来源：评论

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热裂解气相色谱质谱法分析聚合物中红磷

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分析试验室 2020年第2期39卷 231-235页

作者：刘桃妹叶伟肖亿金梅承芳曾国驱华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东省微生物研究所广东省科学院广州510070

采用单击热裂解(PY)模式和逸出气体分析(EGA)程序升温两种热裂解模式对红磷样品进行定性分析,利用气相色谱分离技术对红磷进行分离,根据红磷的特征质谱31,62,93,124及特征丰度比,质谱法分析不同材料中的红磷含量。单击热裂解模式下,材... 详细信息

采用单击热裂解(PY)模式和逸出气体分析(EGA)程序升温两种热裂解模式对红磷样品进行定性分析,利用气相色谱分离技术对红磷进行分离,根据红磷的特征质谱31,62,93,124及特征丰度比,质谱法分析不同材料中的红磷含量。单击热裂解模式下,材质和添加剂有可能对红磷造成干扰,改进后的EGA热裂解模式能排除红磷检测中材质和添加剂的干扰,并采用改进后的EGA裂解程序测定自制阳性样品中红磷的含量。结果表明:通过优化裂解温度和气相色谱条件可以有效改善红磷的分析结果,红磷质量浓度在100~500 mg/kg范围内具有良好线性,加标回收率在90.7%~97.7%,相对标准偏差(RSD)为1.6%~2.3%,定量限为81.27 mg/kg。

关键词：红磷阻燃剂热裂解气相色谱-质谱

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