检索结果-内蒙古大学图书馆

第一军医大学学报 2003年第10期23卷 1015-1017,1024页

作者：罗勇高建华赵菲第一军医大学南方医院整形外科广东广州510515 第一军医大学病理学教研室广东广州510515

目的探讨瘢痕疙瘩成纤维细胞抗Fas单克隆抗体(mAb)诱导的凋亡,是否能通过正常Fas基因转染使凋亡率得以提高。方法利用分子克隆技术将人Fas cDNA插入真核表达载体pcDNA3.1多克隆位点之间,以脂质体介导法将目的基因导入瘢痕疙瘩成纤维细胞... 详细信息

目的探讨瘢痕疙瘩成纤维细胞抗Fas单克隆抗体(mAb)诱导的凋亡,是否能通过正常Fas基因转染使凋亡率得以提高。方法利用分子克隆技术将人Fas cDNA插入真核表达载体pcDNA3.1多克隆位点之间,以脂质体介导法将目的基因导入瘢痕疙瘩成纤维细胞,Fas mAb诱导凋亡;通过琼脂糖凝胶电泳、HE染色和流式细胞仪检测瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的情况。结果转基因的瘢痕疙瘩成纤维细胞经Fas mAb作用后,在形态学上出现典型的细胞核固缩、碎裂;琼脂糖凝胶电泳显现特征性的“梯状”带;流式细胞仪检测凋亡率明显增加。对照组未见上述结果。结论瘢痕疙瘩成纤维细胞Fas诱导的凋亡异常,是由于Fas凋亡通道的“上游事件”无功能Fas蛋白造成,与通道下游无关。瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡异常可能是Fas基因突变引起,其与瘢痕疙瘩形成有密切关系。

关键词： Fas基因基因转染瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞凋亡实验

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3种局部消融方法治疗小鼠移植性肝癌疗效比较

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第一军医大学学报 2003年第12期23卷 1297-1300页

作者：朱伟良张健张积仁汪森明卜海激第一军医大学珠江医院肿瘤科广东广州510282 第一军医大学病理学教研室广东广州510515

目的观察3种临床常用的局部消融方法治疗小鼠移植性肝癌的疗效,为临床综合治疗不能手术切除的肝癌提供实验依据。方法建立昆明鼠皮下移植性肝癌模型,应用经皮无水乙醇注射治疗(percutaneous ethanol injection therapy,PEIT)、经皮乙酸... 详细信息

目的观察3种临床常用的局部消融方法治疗小鼠移植性肝癌的疗效,为临床综合治疗不能手术切除的肝癌提供实验依据。方法建立昆明鼠皮下移植性肝癌模型,应用经皮无水乙醇注射治疗(percutaneous ethanol injection therapy,PEIT)、经皮乙酸注射治疗(percutaneous acetic acid injection therapy,PAIT)及经皮局部冷冻治疗(percutaneous local cryosurgery therapy,PLCT)3种局部消融方法治疗,比较其疗效。结果PLCT、PAIT、PEIT治疗抑瘤率分别为99.2%、85.3%和72.8%,治疗后肿瘤完全坏死率分别为100%、60%和40%,生存期分别为(88.11±5.67)、(86.67±7.26)和(72.89±12.86)d。结论PEIT、PAIT或者PLCT均可不同程度抑制小鼠皮下瘤生长,延长生存期,其中PLCT的疗效优于PEIT或PAIT。

关键词：局部消融治疗小鼠移植性肝癌经皮乙酸注射经皮无水乙醇注射经皮局部冷冻

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人GST-AWP1融合蛋白的原核表达及其抗体制备

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第2期19卷 168-172页

作者：莫永炎刘亚伟王静珍邓鹏秦清和杨志刚姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1c... 详细信息

为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1cDNA编码区 ,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶 (GST)融合蛋白表达质粒pGEX KG中 .经酶切、序列鉴定分析后 ,用该重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,并经异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导产生GST AWP1融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 5 6kD的融合蛋白 .将此融合蛋白免疫新西兰兔 ,经ELISA和Western印迹检测获得了效价高、免疫活性强的兔抗人多克隆抗体 .结果表明成功构建了GST AWP1融合蛋白表达载体 ,在大肠杆菌高效表达了GST AWP1融合蛋白 ,并获得高效多抗。

关键词：信号传导分子蛋白激酶C相关激酶1相关蛋白原核表达制备 GST-AWP1融合蛋白多克隆抗体

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用文献轮廓挖掘大肠癌转移芯片表达谱

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第一军医大学学报 2003年第11期23卷 1195-1197页

作者：黄仲曦孙青丁彦青姚开泰第一军医大学病理教研室肿瘤研究所广东广州510515

目的寻找新的大肠癌转移相关基因。方法根据大肠癌转移芯片的表达谱,采用基于文献轮廓的数据挖掘方法,从Medline文献数据库中提取基因的相关文献并分析词的频率,再基于重复发生和共发生的过滤标准提取功能相关的词,最后基于词的发生频... 详细信息

目的寻找新的大肠癌转移相关基因。方法根据大肠癌转移芯片的表达谱,采用基于文献轮廓的数据挖掘方法,从Medline文献数据库中提取基因的相关文献并分析词的频率,再基于重复发生和共发生的过滤标准提取功能相关的词,最后基于词的发生频率对基因进行功能聚类,进一步结合文献及已有的分子生物学检测结果进行分析。结果发现两个新的可能与大肠癌转移相关的基因TIAM1和NM23H1。

关键词：大肠癌肿瘤转移基因芯片信息存储信息检索基因表达谱

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次声的物理存在及研究意义

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中华预防医学杂志 2003年第1期37卷 56-58页

作者：邱萍温宁姜勇陈景藻第四军医大学航空临床教研室第四军医大学口腔医学院修复科第一军医大学病理生理教研室西京医院理疗科

当振动体的频率低于20H-z时，能产生一种人耳听不到的声波即次声。大自然的许多活动，如火山爆发、地震、台风、火箭发射、海浪拍击、车辆行使等都有次声的产生。由于次声在空气、水、地面障碍物之间传播时吸收效应很小，作用距离远，... 详细信息

当振动体的频率低于20H-z时，能产生一种人耳听不到的声波即次声。大自然的许多活动，如火山爆发、地震、台风、火箭发射、海浪拍击、车辆行使等都有次声的产生。由于次声在空气、水、地面障碍物之间传播时吸收效应很小，作用距离远，穿透能力强，用通常的隔声和消声技术难以阻挡其作用，防护困难，对人体造成伤害。次声的生物学效应及损害作用目前已引起各国学者的重视，我国也正在逐步开展这个领域的研究。

关键词：次声物理性质生物学效应应用防护现状

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带Tat标记质粒载体的构建及其转导融合蛋白进入细胞的研究

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第3期19卷 354-358页

作者：孙学刚宋革刘靖华李红乐邢飞跃张丽华秦清和姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

采用点突变技术构建了带6×His、Tat和Flag多个标记的pET-HTF的质粒载体,利用基因重组技术构建pET-HTF-EGFP融合蛋白载体.酶切和DNA测序证明,所构建的pET-HTF和pET-HTF-EGFP载体正确.BL21(DE3)表达融合蛋白,用Ni2+分离柱纯化His-Tat... 详细信息

采用点突变技术构建了带6×His、Tat和Flag多个标记的pET-HTF的质粒载体,利用基因重组技术构建pET-HTF-EGFP融合蛋白载体.酶切和DNA测序证明,所构建的pET-HTF和pET-HTF-EGFP载体正确.BL21(DE3)表达融合蛋白,用Ni2+分离柱纯化His-Tat-Flag-EGFP蛋白,并加入培养的NIH3T3细胞.荧光显微镜观察显示,His-Tat-Flag-EGFP融合蛋白进入细胞.带His、Tat和Flag标记的质粒载体pET-14b-HTF表达的融合蛋白能够进入细胞,该载体为进行蛋白质功能研究和基因治疗研究提供了一个重要工具.

关键词： Tat 蛋白转导增强型绿色荧光蛋白

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iNOS红色荧光蛋白报告基因载体的构建及其在细胞中的表达

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中国病理生理杂志 2003年第12期19卷 1709-1712页

作者：刘志锋阚文宏秦清和邓鹏王静珍姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的:构建iNOS启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,为研究细胞内iNOS的基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具.方法:采用基因重组技术构建了含iNOS启动子区的红色荧光蛋白报告基因载体pDsRed1-1-iNOSp;用脂质体瞬时转染NIH3T... 详细信息

目的:构建iNOS启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,为研究细胞内iNOS的基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具.方法:采用基因重组技术构建了含iNOS启动子区的红色荧光蛋白报告基因载体pDsRed1-1-iNOSp;用脂质体瞬时转染NIH3T3细胞,观察iNOS启动子对脂多糖(LPS)刺激的反应.结果:酶切和DNA测序证明所构建的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的;该表达载体在NIH3T3细胞静息状态下表达水平很低,经LPS刺激后,在荧光显微镜下可看到高亮度的红色荧光.结论:所构建的iNOS启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的,对生理相关刺激有很好的反应,可有效地用于iNOS基因表达信号调控机制的研究.

关键词：一氧化氮合酶红色荧光蛋白基因,调节基因,报告

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用T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38相结合的蛋白

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第一军医大学学报 2003年第11期23卷 1131-1133页

作者：李志杰刘靖华龚小卫秦清和黄浩邓鹏王静珍孙学刚赵善超刘亚伟赵克森姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用... 详细信息

目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断,回收PCR产物并进行测序,将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列,得到了46个编码蛋白的序列。结论T7噬菌体展示筛选系统筛选新的结合蛋白简单、快速、有效。

关键词： T7噬菌体筛选 p38 结合蛋白靶蛋白

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巨噬细胞在损伤时间推断中的作用

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法医学杂志 2003年第2期19卷 122-125页

作者：李学锋王慧君第一军医大学病理学教研室法医组广东广州510515

综述了近年来巨噬细胞在损伤时间推断中的法医学作用的研究进展。论述了巨噬细胞源性细胞因子的表达、巨噬细胞表型的变化和巨噬细胞吞噬物的演化等变化与损伤时间的关系,认为巨噬细胞在损伤修复中的特征性变化可作为损伤时间推断的新指... 详细信息

综述了近年来巨噬细胞在损伤时间推断中的法医学作用的研究进展。论述了巨噬细胞源性细胞因子的表达、巨噬细胞表型的变化和巨噬细胞吞噬物的演化等变化与损伤时间的关系,认为巨噬细胞在损伤修复中的特征性变化可作为损伤时间推断的新指标,具有深入研究的必要。

关键词：巨噬细胞损伤时间法医学细胞因子创伤修复

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BDNF重组腺病毒的构建及在大鼠骨髓间质干细胞的表达

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中国病理生理杂志 2003年第4期19卷 438-442,T001页

作者：李红乐李浩威邢飞跃孙学刚邓宇斌张秀明姜勇李树浓中山大学中山医学院病理生理学教研室广东广州510080 第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的 :利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体 (proBDNF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)高效表达。方法 :采用两步亚克隆的方法将proBDN... 详细信息

目的 :利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体 (proBDNF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)高效表达。方法 :采用两步亚克隆的方法将proBDNF和BDNF构建入带有EGFP表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack -CMV中 ,形成转移载体pAdTrack -proBDNF和pAdTrack -BDNF ,采用化学转化法在大肠杆菌BJ5 183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy- 1同源重组 ,得到重组腺病毒载体pAd -proBDNF和pAd -BDNF ;转染 2 93细胞 ,包装成重组病毒颗粒 ;将重组病毒上清感染rMSC ,用荧光显微镜下观察和Western -blotting鉴定重组病毒在rMSC表达 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC在体外诱导向神经样细胞分化 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF的感染的rMSC接种于裸鼠肌肉内 ,两周后荧光显微镜下直接观察。结果 :成功地构建了proBDNF和BDNF重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒 ,重组病毒能在体外培养的rMSC高效表达并不影响其分化潜能 ,体内移植实验表明Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC能在体内表达。结论 :重组腺病毒具有较高的介导proBDNF和BDNF基因表达于rMSC的效率 ,带有报告基因EGFP的Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC可以用于体内移植实验。

关键词： BDNF 重组腺病毒构建大鼠骨髓间质干细胞表达增强型绿色荧光蛋白基因融合脑源性神经营养因子

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