检索结果-内蒙古大学图书馆

高糖抑制蛋白KIAA0753和CCSAP表达并通过钙信号阻断小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1的成骨分化

中国药理学通报 2025年第3期41卷 456-465页

作者：王吉春钱正霞李梦雪汪长东重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院麻醉科重庆400016

目的探究高糖对蛋白KIAA0753和CCSAP的影响,以及高糖条件下KIAA0753和CCSAP与成骨分化以及钙信号通路三者之间的联系。方法利用5.5和25 mmol·L^(-1)葡萄糖浓度的成骨培养基诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1),通过Western blo... 详细信息

目的探究高糖对蛋白KIAA0753和CCSAP的影响,以及高糖条件下KIAA0753和CCSAP与成骨分化以及钙信号通路三者之间的联系。方法利用5.5和25 mmol·L^(-1)葡萄糖浓度的成骨培养基诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1),通过Western blot检测KIAA0753和CCSAP蛋白表达情况;转染过表达质粒进入人胚肾细胞(HEK-293T),免疫共沉淀检测蛋白KIAA0753和CCSAP相互作用;利用成骨培养基分别在不同葡萄糖浓度和不同诱导时间处理MC3T3-E1细胞,试剂盒检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,Western blot检测KIAA0753、CCSAP、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)等蛋白的表达情况,然后再设置5.5、25 mmol·L^(-1)和25 mmol·L^(-1)+OE-CCSAP组MC3T3-E1细胞,依次检测KIAA0753、OCN、OPN蛋白的表达情况以及ALP活性;利用高通量基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)中糖尿病鼠模型数据集筛选差异基因进行生物信息学分析;对MC3T3-E1细胞分别设置5.5、25 mmol·L^(-1)和25 mmol·L^(-1)+OE-KIAA0753组,Western blot检测钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡbeta,CAMK2B)、受磷蛋白(phospholamban,PLN)蛋白的表达。结果与5.5 mmol·L^(-1)组相比,25 mmol·L^(-1)抑制成骨细胞中KIAA0753和CCSAP蛋白表达,且蛋白KIAA0753和CCSAP存在相互作用。同时25 mmol·L^(-1)也抑制成骨细胞ALP、OPN、OCN蛋白表达,在25 mmol·L^(-1)的条件下过表达CCSAP上调KIAA0753、OCN、OPN、ALP的表达。糖尿病鼠模型的差异基因主要富集在“信号受体、信号调控”等方面。25 mmol·L^(-1)葡萄糖抑制成骨细胞中CAMK2B、PLN蛋白的表达,且在25 mmol·L^(-1)的条件下过表达KIAA0753上调CAMK2B、PLN蛋白的表达。结论高糖抑制KIAA0753和CCSAP蛋白表达,抑制小鼠胚胎成骨细胞前体细胞成骨分化和钙信号传导,过表达CCSAP挽救高糖对成骨分化的抑制作用以及过表达KIAA0753逆转高糖对钙信号通路的抑制作用。

关键词：糖尿病 KIAA0753 CCSAP 蛋白相互作用成骨分化钙信号

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丹皮酚对人神经母细胞瘤细胞帕金森病模型的保护作用及其初步机制

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解放军医学杂志 2025年第1期50卷 69-75页

作者：孙胜男和璐璐秦劭晨徐磊王利然于保锋马存根樊慧杰柴智山西中医药大学多发性硬化益气活血重点研究室/神经生物学研究中心山西晋中 030619 山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室山西太原 030001 山西中医药大学第一临床学院山西太原 030024 山西中医药大学第二临床学院山西太原 030012

目的探究丹皮酚(PAE)对过表达α-突触核蛋白(α-Syn)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中自噬的影响及其相关作用机制.方法以SH-SY5Y细胞为对照组,含A53T-α-Syn突变的SH-SY5Y细胞为模型组、PAE(150 μg/ml)组、3-甲基腺嘌呤(3-M... 详细信息

目的探究丹皮酚(PAE)对过表达α-突触核蛋白(α-Syn)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中自噬的影响及其相关作用机制.方法以SH-SY5Y细胞为对照组,含A53T-α-Syn突变的SH-SY5Y细胞为模型组、PAE(150 μg/ml)组、3-甲基腺嘌呤(3-MA,1 mmol/L)组和PAE(150 μg/ml)+3-MA(1 mmol/L)组.采用CCK-8法检测各组细胞存活率,光学显微镜下观察细胞形态,Western blotting检测α-Syn和自噬通路相关蛋白Beclin-1、p62、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、Bcl-2表达水平.结果与对照组比较,模型组细胞存活率明显降低(P＜0.01),α-Syn蛋白表达水平明显增高(P＜0.001),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平明显降低(P＜0.01或P＜0.05),自噬底物蛋白p62蛋白表达水平升高(P＜0.05),调节自噬通路相关蛋白p-JNK、Bcl-2蛋白表达水平降低(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,PAE组细胞存活率增高(P＜0.01),α-Syn、p62蛋白表达水平降低(P＜0.01或P＜0.05),LC3-Ⅱ、Beclin-1、p-JNK、Bcl-2蛋白表达水平增高(P＜0.05).与PAE组比较,PAE+3-MA组细胞α-Syn蛋白表达水平增高(P＜0.05).结论 PAE可缓解A53T-α-Syn突变诱导的SH-SY5Y细胞损伤,并通过激活自噬途径清除过表达的α-Syn,其机制可能与上调JNK/Bcl-2介导的自噬途径有关.

关键词：丹皮酚帕金森病 α-突触核蛋白自噬

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多种代谢物调控蛋白质翻译后修饰的新机制研究和药物筛选策略

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中国科学:化学 2025年第4期55卷 986-996页

作者：杨思园朱泽文陈滢旭杨丰瑞吴鑫源王江李文洋杨巍维宋晓玉陆晓杰柳红蒋维雷晓光赵世民上海市代谢重塑与健康重点实验室代谢与整合生物学研究院上海200032 复旦大学上海医学院基础医学院生物化学与分子生物学系代谢分子医学教育部重点实验室上海200032 浙江省系统健康科学重点实验室国科大杭州高等研究院生命与健康科学学院杭州310024 中国科学技术大学合肥微尺度物质科学国家研究中心合肥230026 原创新药研究全国重点实验室中国科学院上海药物研究所上海201203 中国科学院大学北京100049 北京分子科学国家研究中心生物有机与分子工程教育部重点实验室北京大学化学与分子工程学院北京100871

代谢物是生物大分子修饰最主要的供体来源,环境或细胞内应激导致的代谢物改变信号也被整合到生命信号网络中.蛋白质磷酸化、乙酰化和甲基化等经典翻译后修饰(post-translational modification,PTM)以ATP、乙酰辅酶A和S-腺苷甲硫氨酸(SAM... 详细信息

代谢物是生物大分子修饰最主要的供体来源,环境或细胞内应激导致的代谢物改变信号也被整合到生命信号网络中.蛋白质磷酸化、乙酰化和甲基化等经典翻译后修饰(post-translational modification,PTM)以ATP、乙酰辅酶A和S-腺苷甲硫氨酸(SAM)等能量或物质表征代谢物为底物,传递共性代谢物信号;我们的研究发现,代谢物可以通过不同机制调控其作为供体外的其他PTM:巴豆酰辅酶A能作为酰基供体促进细胞周期依赖的EB1蛋白的巴豆酰化修饰,通过调控微管骨架的动态性维系基因组的稳定性;α-KIV和α-KG能够分别调控蛋白质磷酸化修饰和羟基化修饰,介导与自身代谢无关的TCR信号通路和Hedgehog信号通路;此外,天然植物的次生代谢物也能够促进AD相关蛋白的泛素化降解.这些发现为代谢物调控细胞生理病理的研究打开了新的角度和视野.基于代谢物调控翻译后修饰的新机制,我们以病理过程中的关键蛋白为例,高通量筛选了瞬时受体电位香草酸通道3蛋白(TRPV3)和菌源二肽基肽酶4(DPP4)的小分子抑制剂,为创新药的研发和疾病的干预提供了新的思路.

关键词：生物大分子翻译后修饰代谢物调控细胞信号干预

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脑缺血后IκB激酶的自身磷酸化及活性调节(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第4期24卷 25-29+96-97页

作者：沈万华张春翌张光毅徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州 221002 中国

目的:观察脑缺血后IκB激酶的自身磷酸化及活性变化的调节机制。方法:采用IKKα/B抗体进行免疫印迹和免疫沉淀分析,测定IKK蛋白表达,体外激酶活性分析测定IKK的自身磷酸化及活性。结果:IKK蛋白的表达在脑缺血不同时间以及脑缺血复灌不... 详细信息

目的:观察脑缺血后IκB激酶的自身磷酸化及活性变化的调节机制。方法:采用IKKα/B抗体进行免疫印迹和免疫沉淀分析,测定IKK蛋白表达,体外激酶活性分析测定IKK的自身磷酸化及活性。结果:IKK蛋白的表达在脑缺血不同时间以及脑缺血复灌不同时间都没有明显的变化;IKK的活性在缺血30分钟时达到最高;NMDA受体拮抗剂ketamine、非NMDA受体拮抗剂DNQX和NF-κB抑制剂PDTC均能抑制IKK的自身磷酸化及活性。结论:NMDA受体和非NMDA受体介导了脑缺血后IKK的自身磷酸化及活性调控,从而介导其下游因子NF-κB的蛋白表达及活性变化,参与脑缺血的损伤调控。

关键词：脑缺血 IκB激酶核因子-κB 海马 N-甲基-D-天冬氨酸受体活性氧自由基信号传递

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金雀异黄素对脑缺血/再灌注诱导大鼠海马组织STAT3激活的抑制作用(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第11期24卷 69-74+112-113页

作者：李洪春张光毅徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州 221002 中国

目的:观察脑缺血/再灌注(I/R)后海马组织信号转导与转录激活子-3 (STAT3)的激活及金雀异黄素对其的影响。方法:免疫印迹测定STAT3蛋白表达及磷酸化水平,电泳迁移率改变分析STAT3的DNA结合活性。结果:I/R 3h后胞浆STAT3持续磷酸化激活,... 详细信息

目的:观察脑缺血/再灌注(I/R)后海马组织信号转导与转录激活子-3 (STAT3)的激活及金雀异黄素对其的影响。方法:免疫印迹测定STAT3蛋白表达及磷酸化水平,电泳迁移率改变分析STAT3的DNA结合活性。结果:I/R 3h后胞浆STAT3持续磷酸化激活,再灌注3h和72h达两高峰(1.7和 2.5倍);而STAT3、蛋白表达I/R 24h开始升高,72h 达高峰(1.7倍);核内STAT3的磷酸化水平及DNA结合活性缺血后即显著增高,再灌注3h和72h达两高峰(分别为2.6、3.1及3.6、4.4倍),金雀异黄素呈剂量依赖方式明显抑制I/R 72h诱导STAT3的磷酸化及DNA结合活性的升高,但不影响STAT3蛋白表达。结论:脑缺血/再灌注导致STAT3的磷酸化激活及DNA结合活性的增加,蛋白酪氨酸激酶参与STAT3的激活调控。

关键词：信号传递转录因子金雀异黄素脑缺血酪氨酸磷酸化海马

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抗氧化剂对脑缺血复灌损伤的保护作用及与NF-κB的关系(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第11期24卷 63-68+112页

作者：沈万华张春翌张光毅徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州 221002 中国

目的:观察脑缺血后两种抗氧化剂对NF-κB蛋白表达及活性变化和IκB磷酸化水平变化的调节机制。方法:采用四动脉结扎全脑缺血模型,应用p65,p50抗体进行免疫印迹分析,凝胶电泳迁移改变分析法测定NF-κB的DNA结合活性,尼氏染色观察神经元... 详细信息

目的:观察脑缺血后两种抗氧化剂对NF-κB蛋白表达及活性变化和IκB磷酸化水平变化的调节机制。方法:采用四动脉结扎全脑缺血模型,应用p65,p50抗体进行免疫印迹分析,凝胶电泳迁移改变分析法测定NF-κB的DNA结合活性,尼氏染色观察神经元的死亡。结果:NF-κB的蛋白表达和结合活性在脑缺血复灌不同时间呈明显的时间依赖性;NF-κB的活性在缺血/复灌6小时后达到最高;其活性变化均能被吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)所抑制;组织学观察也证明了两种抗氧化剂对脑缺血的保护作用。结论:抗氧化剂对脑缺血/复灌引起的损伤的保护作用是通过降低NF-κB的活性而实现的,而NF-κB的活化和失活主要受抑制蛋白IκBα磷酸化降解调控。

关键词：脑缺血核因子-кB 1-кB 抗氧化剂信号传递吡咯烷二硫氨基甲酸盐乙酰半胱氨酸细胞凋亡

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人白细胞介素18半胱氨酸的定点突变及其对活性的影响

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第1期34卷 57-61页

作者：裴冬生傅奕孙亚锋赵惠仁徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州221002

为研究IL 18结构与功能的关系 ,用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白细胞介素 18(hIL 18) 4个半胱氨酸的突变体hIL 18C74 S、C10 4 S、C112 S和C163 S。将突变体的cDNA与原核细胞表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌JM10 1。经热诱导后 ,4个... 详细信息

为研究IL 18结构与功能的关系 ,用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白细胞介素 18(hIL 18) 4个半胱氨酸的突变体hIL 18C74 S、C10 4 S、C112 S和C163 S。将突变体的cDNA与原核细胞表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌JM10 1。经热诱导后 ,4个突变体在大肠杆菌中均得到了高效表达。表达的蛋白质主要以包涵体的形式存在。包涵体经超声破碎 ,2mol/L尿素洗涤 ,8mol/L尿素溶解 ,SephadexG 10 0柱纯化后 ,纯度可达 90 %以上。以诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)产生IFN γ的能力为指标检测复性突变体的活性。结果显示除C10 4 S外 ,其他 3个突变体的生物活性均低于野生型hIL 18,C74 S、C112 S和C163 S的活性分别是野生型hIL 18活性的 5 %、5 8%和11%。证明Cys74 、Cys163 为hIL 18诱导产生IFN γ的功能所必需

关键词：白细胞介素18 半胱氨酸定点突变突变体

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激动多巴胺受体抑制大鼠纹状体脑片Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第11期22卷 8-12页

作者：侯筱宇唐放鸣张光毅中国 221002 徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州

目的:研究缺氧时纹状体多巴胺能神经毒性的机制。方法:采用大鼠纹状体脑片体外培养模型,以底物磷酸化32P-掺入法测定Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CCDPKⅡ)的活性。结果:缺氧30min,纹状体脑片CCDPKⅡ活性降低75％,慢性利血平化使得缺... 详细信息

目的:研究缺氧时纹状体多巴胺能神经毒性的机制。方法:采用大鼠纹状体脑片体外培养模型,以底物磷酸化32P-掺入法测定Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CCDPKⅡ)的活性。结果:缺氧30min,纹状体脑片CCDPKⅡ活性降低75％,慢性利血平化使得缺氧诱导的酶活性降低程度减轻,与对照组相比大约降低40％。外源性多巴胺显著降低纹状体脑片CCDPKⅡ活性。去除胞外Ca2+后,多巴胺诱导的酶活性降低作用被削弱。阿扑吗啡(非特异性多巴胺受体激动剂)、SKF38393(特异性D1样受体激动剂)和喹吡罗(特异性D2样受体激动剂)均可显著降低CCDPKⅡ的活性。Sch-23390(特异性D1样受体拮抗剂)和吗丁啉(特异性D2样受体拮抗剂)均可拮抗多巴胺所诱导的酶活性的抑制作用。结论:多巴胺参与缺氧诱导的纹状体CCDPKⅡ活性抑制,其作用机制与D1样和D2样受体的激活以及胞外Ca2+的内流有关,从而导致多巴胺介导的纹状体神经损伤。

关键词：多巴胺 Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶低氧钙利血平多巴胺激动剂多巴胺拮抗剂纹状体

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Asp126、Asp130、Asp134对人白介素18功能的影响(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第4期33卷 368-372页

作者：傅奕裴冬生赵惠仁徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心!徐州221002

为研究人白细胞介素 18(hIL 18)中一些氨基酸残基对IL 18功能的影响 ,用重叠延伸PCR定点诱变技术构建hIL 18突变体hIL 18D12 6N、hIL 18D13 0 K、hIL 18D134 K。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达 ,... 详细信息

为研究人白细胞介素 18(hIL 18)中一些氨基酸残基对IL 18功能的影响 ,用重叠延伸PCR定点诱变技术构建hIL 18突变体hIL 18D12 6N、hIL 18D13 0 K、hIL 18D134 K。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达 ,3个突变体占菌体总蛋白质的 15 %～ 31%以上。SDS PAGE证实 ,表达的蛋白质以包含体形式存在。包含体经超声破碎 ,2mol/L尿素洗涤 ,8mol/L尿素溶解 ,SephadexG 75柱纯化后 ,纯度均可达 95 %以上。Western印迹表明 3个突变体与野生型hIL 18具有相同的免疫原性。纯化的突变体蛋白质经复性后 ,以诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)产生干扰素 γ(IFN γ)的能力为指标检测其活性 ,结果显示 3个突变体的生物学活性分别为野生型IL 18的 32 %、8%、10 % ,表明hIL 18中 12 6、130、134位的天冬氨酸 (Asp)对其功能是必需的

关键词：人白细胞介素18 蛋白质结构与功能定点诱变干扰素-γ

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谷氨酸受体可逆磷酸化及其功能

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生物化学与生物物理进展 1999年第4期26卷 315-318页

作者：高灿张光毅徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州221002

谷氨酸受体（ＧｌｕＲｓ）Ｃ端区存在被多种蛋白激酶磷酸化的位点，同时又能被多种蛋白磷酸酶去磷酸化，磷酸化的结果可使Ｃａ２＋内流增加，增强ＧｌｕＲｓ功能；去磷酸化作用则相反．正常情况下ＧｌｕＲｓ可逆磷酸... 详细信息

谷氨酸受体（ＧｌｕＲｓ）Ｃ端区存在被多种蛋白激酶磷酸化的位点，同时又能被多种蛋白磷酸酶去磷酸化，磷酸化的结果可使Ｃａ２＋内流增加，增强ＧｌｕＲｓ功能；去磷酸化作用则相反．正常情况下ＧｌｕＲｓ可逆磷酸化处于一种动态平衡状态，在突触可塑性机制如长时程增强（ＬＴＰ）中起重要作用，而在病理状态如缺血性脑损伤中。

关键词：谷氨酸受体蛋白激酶蛋白磷酸酶磷酸化

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