检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2015年第9期31卷 1170-1174页

作者：张曼曼张蓓蓓王林李向阳华慧汤仁仙张鹏郑葵阳徐州医学院病原生物学与免疫学教研室感染与免疫实验室江苏徐州221004

目的探讨Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)、核因子κBp65(NF-κBp65)在高脂饮食(HFD)诱导的肥胖小鼠肾脏组织中的表达。方法 45只健康C57BL/6雄性小鼠随机分为HFD组(n=39)和对照组(n=6)。HFD组给予高脂高糖饲料,对照组给予... 详细信息

目的探讨Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)、核因子κBp65(NF-κBp65)在高脂饮食(HFD)诱导的肥胖小鼠肾脏组织中的表达。方法 45只健康C57BL/6雄性小鼠随机分为HFD组(n=39)和对照组(n=6)。HFD组给予高脂高糖饲料,对照组给予普通饲料,均喂养20周。每周测量小鼠体质量,取体质量增长值最高的13只为饮食诱导肥胖(DIO)组,称量内脏脂肪质量。检测血清肌酐、尿素氮(BUN)及内毒素水平。HE染色、显微镜观察肾脏形态。实时定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠肾脏组织TLR2、TLR4、My D88、NF-κBp65及TNF-αmRNA水平,Western blot法检测小鼠肾脏组织TLR4、My D88、NF-κBp65蛋白水平。结果成功构建DIO小鼠模型;与对照组相比,DIO小鼠血内毒素水平升高,血肌酐、BUN水平无显著性差异,2组小鼠肾脏结构未见明显异常;与对照组小鼠相比,DIO小鼠肾脏TLR4、My D88、NF-κBp65、TNF-αmRNA水平升高,TLR2 mRNA水平无显著性差异;DIO小鼠肾脏TLR4、My D88、NF-κBp65蛋白水平升高。结论 TLR4及相关炎性信号分子在饮食诱导肥胖小鼠肾脏组织表达水平增加。

关键词：肥胖肾脏 Toll样受体4 髓样分化因子88 炎症反应

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医学微生物学综合实验考核与理论考试成绩的相关性分析

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右江民族医学院学报 2016年第1期38卷 116-117页

作者：覃艳春黄衍强韦连登黄干荣谢振峰右江民族医学院病原生物学与免疫学教研室桂西微生物感染研究重点实验室广西百色533000

目的探讨医学微生物学综合实验考核与理论考试成绩的相关关系。方法选取我校2009~2012级临床专业学生2 358名学生医学微生物学的综合实验考核成绩与理论考试成绩作为研究资料,计算两类成绩的相关系数r值与概率P值。结果 2009~2012级我... 详细信息

目的探讨医学微生物学综合实验考核与理论考试成绩的相关关系。方法选取我校2009~2012级临床专业学生2 358名学生医学微生物学的综合实验考核成绩与理论考试成绩作为研究资料,计算两类成绩的相关系数r值与概率P值。结果 2009~2012级我校学生医学微生物学综合实验考核成绩和理论考试成绩的相关系数（r）分别为0.18、0.14、0.14、0.15,经SPSS 13.0统计分析显示实验考核成绩和理论考核成绩之间有直线相关关系（P〈0.001）;通过不同组段分析还显示综合实验考核高分组有3.5%的学生理论考核进入低分组,综合实验考核低分组也有5.5%学生进入到高分组。结论综合实验考核成绩好的学生理论成绩也比较好,反之亦然;有部分学生虽然综合实验考核成绩好,但是如果不注意掌握好的学习方法,在理论考试中也会得低分,综合实验考核成绩低的学生经过努力也会在理论考试中取得高分。

关键词：医学微生物学综合实验考核理论考试

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小鼠肝内胆管上皮细胞的分离与鉴定

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动物医学进展 2015年第7期36卷 43-46页

作者：王艳红张波李波张蓓蓓于倩颜超华慧汤仁仙郑葵阳徐州医学院病原生物学与免疫学教研室感染与免疫实验室江苏徐州221004

为建立一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞(MIBECs)分离培养方法,用Ⅳ型胶原酶进行门静脉灌注,取出肝内胆管,用DNaseⅠ、pronase E和Ⅳ型胶原酶分类消化,小鼠肝内胆管组织细小、均匀的细胞团培养于含100mL/L胎牛血清(FBS)和10ng/mL表... 详细信息

为建立一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞(MIBECs)分离培养方法,用Ⅳ型胶原酶进行门静脉灌注,取出肝内胆管,用DNaseⅠ、pronase E和Ⅳ型胶原酶分类消化,小鼠肝内胆管组织细小、均匀的细胞团培养于含100mL/L胎牛血清(FBS)和10ng/mL表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素转铁蛋白硒(ITS)的DMEM/F12培养基中。细胞贴壁后,利用细胞角蛋白19免疫荧光法鉴定目的细胞。在培养的过程中,用CCK8测定细胞的生长曲线。结果显示,成功分离出MIBECs,细胞纯度约95%。细胞培养3d^7d内呈对数生长状态。以上结果表明本分离培养方法是一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞分离纯化培养技术。

关键词：小鼠肝内胆管上皮细胞分离鉴定培养

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低温对中国河南株旋毛虫肌幼虫生存能力和感染力的影响

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蚌埠医学院学报 2016年第10期41卷 1261-1264页

作者：李江艳朱伟李倩王小莉杨小迪夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院科研中心安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的:了解低温(-18℃、-72℃)冻存对中国河南株旋毛虫肌幼虫(肌幼虫)生存能力和感染力的影响。方法:将含有肌幼虫的小鼠骨骼肌肌肉经-18℃、-72℃冻存处理不同时间后观察肌幼虫活力;55只小鼠分别经口感染300条经过-18℃、-72℃处理不同... 详细信息

目的:了解低温(-18℃、-72℃)冻存对中国河南株旋毛虫肌幼虫(肌幼虫)生存能力和感染力的影响。方法:将含有肌幼虫的小鼠骨骼肌肌肉经-18℃、-72℃冻存处理不同时间后观察肌幼虫活力;55只小鼠分别经口感染300条经过-18℃、-72℃处理不同时间的肌幼虫,感染小鼠35 d后收集肌幼虫,测定生殖力指数(RCI)。结果:肌幼虫经-18℃冻存0、6、12、24、36、48 h的死亡率分别为0.00%、6.30%、18.23%、35.81%、74.60%及100.00%;经-72℃冻存0、15、30、45、60 min的死亡率分别为0.00%、21.21%、57.11%、86.24%及100.00%;肌幼虫死亡率随-18℃、-72℃冻存处理时间的延长而升高(P<0.01)。经过-18℃冻存处理6、12、24、36 h后感染小鼠的肌幼虫RCI分别为(126.38±6.90)、(68.58±4.83)、(12.58±1.77)、(5.77±0.77),与未冻存(0 h)组肌幼虫的RCI(163.70±10.70)差异均有统计学意义(P<0.01);通过-72℃冻存处理15、30、45 min后感染小鼠的RCI分别为(18.19±2.15)、(8.83±1.39)、(3.10±0.26),与未冻存(0 min)组肌幼虫的RCI(163.70±10.70)差异均有统计学意义(P<0.01);肌幼虫的RCI均随-18℃、-72℃冻存处理时间延长而下降(P<0.01)。结论:低温冻存可导致中国河南株肌幼虫存活能力和感染能力下降,-18℃冻存48 h或-72℃冻存60 min可完全灭活小鼠肌肉内的中国河南株肌幼虫。

关键词：线虫病旋毛虫肌幼虫低温生存能力感染力

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山东沂源硬蜱携带无形体的调查及进化分析

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动物医学进展 2015年第12期36卷 103-107页

作者：刘相叶武志强刘转转汤仁仙颜超郑葵阳徐州医学院病原生物学与免疫教研室感染与免疫实验室江苏徐州221004 Department of Biology Colorado State University

为了解山东省沂源县境内硬蜱携带无形体的流行及菌株变异情况,于2015年5月~7月从该地区山羊体表共分离到54份126只不同生活史阶段的长角血蜱,分组研磨提取DNA后,利用套式PCR扩增无形体的16SrRNA（ribosomal RNA）基因片段并测序及进行... 详细信息

为了解山东省沂源县境内硬蜱携带无形体的流行及菌株变异情况,于2015年5月~7月从该地区山羊体表共分离到54份126只不同生活史阶段的长角血蜱,分组研磨提取DNA后,利用套式PCR扩增无形体的16SrRNA（ribosomal RNA）基因片段并测序及进行序列的遗传进化分析。结果显示,54份样品PCR阳性扩增率为48.1%;序列分析表明,该地区无形体存在6个变异株,分为4类,其中3类与该地区以往报道的嗜吞噬细胞无形体序列保持密切的遗传关系,还有1类与日本长角血蜱体内检出的牛无形体序列遗传关系较近。由此可见,山东沂源地区长角血蜱存在较高的嗜吞噬细胞无形体感染率,并且变异株较多;应该加强该地区对人粒细胞无形体病的宣传力度,防止该病大规模暴发。

关键词：长角血蜱嗜吞噬细胞无形体流行进化分析

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结核分枝杆菌抗原和TCRγδ抗体诱导人γδT细胞分化并产生IL-17

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第2期31卷 226-230页

作者：陈立夏惠汪洪涛盛玲玲徐志庆孙垚唐洁李柏青蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原（MTB—HAg）和抗T细胞受体γδ单克隆抗体（TCRγδ／5mAb）在刺激人γδT细胞诱导分化产生IL-17中的作用。方法健康人外周血单个核细胞经过免疫磁珠分选得到纯化的γδT细胞后，加入MTB-HAg或包被的TCRγ... 详细信息

目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原（MTB—HAg）和抗T细胞受体γδ单克隆抗体（TCRγδ／5mAb）在刺激人γδT细胞诱导分化产生IL-17中的作用。方法健康人外周血单个核细胞经过免疫磁珠分选得到纯化的γδT细胞后，加入MTB-HAg或包被的TCRγδ 5mAb，再加或不加CD28mAb进行刺激，同时加或不加IL-17极化细胞因子组合（CK）（IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23），极化诱导培养10—12d。然后收集诱导极化培养的γδT细胞，经佛波醇酯和离子霉素再刺激6h后，用ELISPOT法检测产生IL—17的细胞数。结果经刺激和诱导分化培养的γδT细胞用ELISPOT法检测产生IL-17的细胞数发现，TCRγδ 8mAb联合CK组与TCRγδ／8mAb组相比明显增加，TCRγδ mAb联合CD28mAb组与TCRγδ mAb同时联合CD28mAb和CK组相比明显减少。TCRγδ 8mAb同时联合CD28mAb和CK组与TCRγδ mAb联合CK组相比明显增多。MTB—Hag同时联合CD28mAb和CK组与TCRγδ mAb同时联合CD28mAb和CK组相比显著减少，但与MTB—HAg联合CD28mAb组相比明显增多。结论诱导Th17分化的CK（IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23）也能诱导人γδT细胞分化产生IL-17，TCRγδ 8mAb刺激γδT细胞增殖后诱导分化产生IL—17的活性比MTB—HAg更强。另外，CD28在TCRγδ 8mAb激活γδT细胞诱导产生IL-17的过程中也有重要作用。

关键词：结核分枝杆菌耐热抗原 γδT细胞 IL-17

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特异性的shRNA抑制c－Jun蛋白表达对HepG2细胞增殖和迁移的影响

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徐州医学院学报 2015年第10期35卷 648-653页

作者：罗文雅周凯胡磊李向阳孔凡运尤红娟汤仁仙徐州医学院病原生物学与免疫学教研室感染与免疫实验室江苏徐州221004

目的：构建c－Jun特异性的shRNA及研究其抑制c－Jun蛋白表达对人类肝癌细胞HepG2增殖和迁移的影响。方法根据c－Jun编码序列设计并构建shRNA质粒，利用LipofectamineTM 2000转染HepG2细胞，荧光显微镜观察转染效率。 Western blot检测其... 详细信息

目的：构建c－Jun特异性的shRNA及研究其抑制c－Jun蛋白表达对人类肝癌细胞HepG2增殖和迁移的影响。方法根据c－Jun编码序列设计并构建shRNA质粒，利用LipofectamineTM 2000转染HepG2细胞，荧光显微镜观察转染效率。 Western blot检测其对c－Jun蛋白表达的影响。 CCK－8增殖实验、平板克隆形成实验观察HepG2细胞的增殖情况，transwell和划痕愈合实验方法观察细胞的迁移情况。结果构建了c－Jun小干扰质粒shRNA－1和shRNA－2。荧光显微镜观察到shRNA质粒在HepG2细胞转染效率约在80％。 Western blot显示shRNA－2小干扰质粒对c－Jun抑制效果要强于shRNA－1小干扰质粒。功能实验结果显示，与阴性对照组相比，shRNA－2能显著抑制HepG2细胞的增殖、克隆形成及其迁移能力（P均＜0．05）。结论成功构建了对c－Jun有效shRNA干扰质粒，下调c－Jun的表达能够明显抑制肝癌细胞的增殖和迁移，为进一步研究c－Jun在肝癌中的作用及相关机制提供了工作基础。

关键词： RNA小干扰 HepG2细胞增殖迁移

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山东沂源羊体寄生长角血蜱携带病原调查研究

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徐州医学院学报 2015年第12期35卷 837-840页

作者：刘相叶郑辰李向阳颜超华慧汤仁仙郑葵阳徐州医学院病原生物学与免疫学教研室、感染与免疫实验室江苏徐州221004

目的：了解山东省沂源县境内寄生于山羊体表的长角血蜱携带病原体的情况。方法2014年9月—2015年7月从该地区山羊体表采集不同生活史时期的长角血蜱。利用PCR扩增特异性基因的方法，分别检测长角血蜱感染嗜吞噬细胞无形体、巴贝斯虫、... 详细信息

目的：了解山东省沂源县境内寄生于山羊体表的长角血蜱携带病原体的情况。方法2014年9月—2015年7月从该地区山羊体表采集不同生活史时期的长角血蜱。利用PCR扩增特异性基因的方法，分别检测长角血蜱感染嗜吞噬细胞无形体、巴贝斯虫、伯氏疏螺旋体以及巴尔通体的情况。结果山东沂源地区长角血蜱中嗜吞噬细胞无形体的感染率为48．1％，巴贝斯虫的感染率为40．7％，其中24．1％的长角血蜱存在嗜吞噬细胞无形体和巴贝斯虫的双重感染，但所有长角血蜱体内未检测到伯氏疏螺旋体和巴尔通体。结论山东沂源羊体寄生的长角血蜱存在较高的嗜吞噬细胞无形体和巴贝斯虫感染率。因此，该地区应加强对人粒细胞无形体病和巴贝斯虫病的防控。

关键词：长角血蜱嗜吞噬细胞无形体巴贝斯虫伯氏疏螺旋体巴尔通体

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华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆、表达及免疫原性分析

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徐州医学院学报 2015年第6期35卷 351-354页

作者：张波张蓓蓓李波华慧李向阳刘转转颜超付琳琳汤仁仙郑葵阳徐州医学院病原生物学与免疫学教研室感染与免疫实验室江苏徐州221004

目的：克隆表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白（ Clonorchis sinensisfatty acid binding protein，CsFABP），并对其免疫原性进行分析。方法根据编码CsFABP的已知基因序列设计合成一对引物，应用RT－PCR技术扩增编码CsFABP的基因片段。将... 详细信息

目的：克隆表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白（ Clonorchis sinensisfatty acid binding protein，CsFABP），并对其免疫原性进行分析。方法根据编码CsFABP的已知基因序列设计合成一对引物，应用RT－PCR技术扩增编码CsFABP的基因片段。将扩增的CsFABP的基因片段克隆到原核质粒pET30a（＋）中，转化入大肠埃希菌（ E． coli） DH5α中，经含卡那霉素琼脂平板筛选，小量抽提质粒，经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。将阳性重组质粒转化入*** BL21中，经异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达，表达产物经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS－PAGE）、考马斯亮蓝染色、Western blot分析鉴定。结果经酶切、菌液PCR以及测序确认，成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，并在*** BL21中高效表达。 Western blot试验证实表达的Cs-FABP能被特异的兔抗华支睾吸虫免疫血清识别。结论本研究成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，获得的CsFABP表达蛋白质具有一定的反应原性。

关键词：华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白原核表达免疫原性

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刚地弓形虫抑制蛋白的原核表达与免疫反应性分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第1期33卷 21-24页

作者：原飞刘转转张波曹建平郑葵阳王德广徐州医学院解剖教研室徐州221004 徐州医学院感染与免疫实验室徐州221004 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025

目的克隆并表达刚地弓形虫抑制蛋白(Tg PRF)基因,并分析其免疫反应性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据Tg PRF的基因编码序列设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入p ET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(***)DH5α,经双酶切、... 详细信息

目的克隆并表达刚地弓形虫抑制蛋白(Tg PRF)基因,并分析其免疫反应性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据Tg PRF的基因编码序列设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入p ET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(***)DH5α,经双酶切、PCR和测序鉴定阳性菌落。p ET30a(+)-Tg PRF转化至*** BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。重组蛋白经镍亲和层析法纯化后,以兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析r Tg PRF蛋白的免疫反应性。结果 Tg PRF基因RT-PCR扩增产物约为492 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示,重组质粒p ET30a(+)-Tg PRF构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约35 000的可溶性重组蛋白。Western blotting结果显示,r Tg PRF蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论本研究克隆的Tg PRF基因序列能在原核表达系统中表达,且具有免疫反应性。

关键词：刚地弓形虫抑制蛋白基因克隆原核表达免疫反应性

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