检索结果-内蒙古大学图书馆

国际生物制品学杂志 2025年第1期48卷 46-49页

作者：刘玉美齐亭娟张晓蕙丁玲陈若兰栗妍陈国明柳易程黄祎北京生物制品研究所有限责任公司质量检定室北京100176

目的验证重组乙型肝炎(乙肝)疫苗(酿酒酵母)中宿主细胞蛋白残留量ELISA定量检测方法。方法使用*** HCP ELISA Kit检测试剂盒,对重组乙肝疫苗(酿酒酵母)中的宿主细胞蛋白残留量进行检测,并验证该方法的线性、准确度、重复性、定量限、专... 详细信息

目的验证重组乙型肝炎(乙肝)疫苗(酿酒酵母)中宿主细胞蛋白残留量ELISA定量检测方法。方法使用*** HCP ELISA Kit检测试剂盒,对重组乙肝疫苗(酿酒酵母)中的宿主细胞蛋白残留量进行检测,并验证该方法的线性、准确度、重复性、定量限、专属性及中间精密度。结果ELISA检测标准品的曲线线性良好(决定系数≥0.97),最低点吸光度(A_(405/492))值<0.300,最高点A_(405/492)值>1.000;同一检测人员对低、中、高3个浓度的加标样品进行3次重复检测,检测回收率在80%~120%;对中浓度样品重复检测6次,样品回收率在80%~120%,相对标准偏差<10%,表明方法具有良好的准确度和重复性。样品背景溶液和样品稀释液的A_(405/492)值均小于曲线最低点,表明该方法的专属性强;定量限为2 ng/mL;不同实验组在不同时间对中浓度样品重复检测6次,相对标准偏差<10%,中间精密度良好。结论ELISA检测重组乙肝疫苗(酿酒酵母)宿主细胞蛋白残留量具有良好的线性、准确度、重复性、定量限、专属性及中间精密度,可用于乙肝疫苗生产的过程控制。

关键词：酿酒酵母蛋白残留量检测酶联免疫吸附测定

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用于Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗生产的无酚红M199培养基贮存效期验证

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国际生物制品学杂志 2025年第1期48卷 20-25页

作者：刘英微刘哲宇田东阳李建新张萌李娜北京生物制品研究所有限责任公司课题一组北京100176 北京生物制品研究所有限责任公司质量检定室北京100176 北京生物制品研究所有限责任公司疫苗五室北京100176 北京生物制品研究所有限责任公司质量保证部北京100176

目的验证无酚红M199培养基的贮存效期,同时探索无酚红M199效期对无酚红Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated Sabin strain poliovirus vaccine,sIPV)关键质量属性的影响。方法对贮存0、6、12、18、24、30、36及42个月的3批次无酚红M... 详细信息

目的验证无酚红M199培养基的贮存效期,同时探索无酚红M199效期对无酚红Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated Sabin strain poliovirus vaccine,sIPV)关键质量属性的影响。方法对贮存0、6、12、18、24、30、36及42个月的3批次无酚红M199干粉培养基进行外观、澄清度、pH、干燥失重、细菌内毒素、微生物限度等物理化学性质及微生物性质长期监测;检测用贮存36个月并检定合格的无酚红M199制备的sIPV成品关键质量属性;将近效期和远效期无酚红M199制备的各3批sIPV分别贮存于37℃和25℃进行稳定性监测,检测D抗原含量,评价其稳定性;用2组sIPV免疫大鼠,检测大鼠血清抗体效价,评价其免疫原性。结果无酚红M199干粉培养基于2~8℃贮存42个月后的外观、澄清度、pH、干燥失重、细菌内毒素、微生物限度等均合格;用贮存36个月无酚红M199所制备sIPV成品的pH、D抗原、蛋白含量、Vero细胞DNA残留量、牛血清白蛋白残留量、Vero细胞蛋白残留量、游离甲醛含量等各项检定结果均符合中国药典2020年版三部和企业标准要求;用贮存36个月无酚红M199制备的sIPV效价合格、稳定性良好且与远效期无酚红sIPV免疫原性趋势一致,效力(t=-0.15~2.17,P>0.05)和诱导中和抗体水平(t=-1.46~2.02,P>0.05)差异均无统计学意义。结论用贮存至36个月的无酚红M199制备的sIPV成品稳定性较好,近效期和远效期无酚红M199制备的sIPV产品质量属性、免疫原性及稳定性趋势一致,且对产品质量无影响,无酚红培养基的效期初步可定为36个月。

关键词：脊髓灰质炎病毒疫苗,灭活无酚红培养基制剂贮存效期

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口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗Vero细胞DNA残留量检测方法的建立及验证

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微生物学免疫学进展 2025年第1期53卷 42-48页

作者：房世娣刘映彤金红燕强鹏侠郑环环韦钦钦夏丽冯德杰兰州生物制品研究所有限责任公司质量检定室甘肃省疫苗技术创新中心

目的建立口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗中Vero细胞DNA残留量的检测方法，并对该方法进行验证及初步应用。方法以磁珠法提取口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗Vero细胞的残留DNA,将试剂盒自带的定量参考品进行梯度稀释绘制标准曲线，... 详细信息

目的建立口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗中Vero细胞DNA残留量的检测方法，并对该方法进行验证及初步应用。方法以磁珠法提取口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗Vero细胞的残留DNA,将试剂盒自带的定量参考品进行梯度稀释绘制标准曲线，通过参考品循环阈值和浓度对数值之间的线性关系，对供试品的残留DNA进行定量分析。考察该方法的专属性、准确度、精密度、定量限、线性和范围、耐用性，并使用该方法对不同工艺阶段样品的DNA残留量及片段大小进行分析。结果 CHO细胞DNA参考品对试验无干扰；准确度验证：加标供试品的回收率在64.3%～134.4%之间；重复性和中间精密度验证样品加标检测值的RSD均<30%;定量限为0.003 pg/10μL;参考品的检测范围：0.030～3 000.000 pg/μL;标准曲线的R2均>0.99,斜率在-3.1～-3.8,Vero细胞残留DNA检测试剂盒在冻融第1次、冻融第2次、冻融第3次后，供试品加标检测值的RSD分别为8.3%、12.3%、11.6%,验证项目的各项参数均符合可接受标准。结论成功建立了口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗中Vero细胞DNA残留量的检测方法，磁珠法结合荧光定量PCR能够快速、准确地对疫苗生产过程中宿主细胞残留DNA进行准确定量，适用于疫苗不同工艺阶段及成品的质量控制。

关键词：口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗宿主细胞残留DNA 磁珠法荧光定量PCR

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免疫增强剂CVC1302调控体细胞高频突变的机制研究

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华中农业大学学报 2025年第1期44卷 211-216页

作者：杜露平鲁海燕侯立婷于晓明程海卫张元鹏陈瑾郑其升侯继波江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品技术创新中心/江苏省食品质量安全重点实验室南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

为探究CVC1302调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变的免疫机制,本研究将4-羟基-3-硝基苯乙酰基耦联鸡卵白蛋白(NP-OVA)混合免疫增强剂CVC1302后,利用ISA206乳化获得疫苗。BALB/c小鼠分为2组,分别后腿肌肉注射NP-ISA206和NP-CVC1302-ISA... 详细信息

为探究CVC1302调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变的免疫机制,本研究将4-羟基-3-硝基苯乙酰基耦联鸡卵白蛋白(NP-OVA)混合免疫增强剂CVC1302后,利用ISA206乳化获得疫苗。BALB/c小鼠分为2组,分别后腿肌肉注射NP-ISA206和NP-CVC1302-ISA206,每只50μg NP-OVA,免疫后14 d,利用流式分选获得生发中心B细胞,利用巢氏PCR扩增B细胞免疫球蛋白序列可变区VH_(186.2),Western blot检测诱导活化的胞苷脱氨酶(AID)、Pax5表达水平,β-actin作为内参,比较组间AID、Pax5表达差异;利用荧光定量PCR检测AID、Pax5基因转录水平。试验结果显示:CVC1302显著诱导生发中心B细胞免疫球蛋白序列VH186.2突变频率,试验组W33L突变频率为62.2%,而对照组仅为20.25%;CVC1302可提升AID蛋白、Pax5蛋白表达水平,其中试验组AID蛋白相对表达水平为0.72,对照组仅为0.16,试验组Pax5蛋白相对表达水平为0.62,对照组仅为0.26;CVC1302增强AID基因、Pax5基因转录水平,相较于对照组分别提高2.36、4.13倍。推断CVC1302依赖Pax5介导AID表达,调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变。

关键词：免疫增强剂CVC1302 体细胞高频突变免疫机制生发中心B细胞胞苷脱氨酶 Pax5

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猪XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白的制备与鉴定

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中国农业大学学报 2025年第1期30卷 131-141页

作者：杨利杜露平侯立婷张浩明于晓明李兰乔绪稳张元鹏秦竹王义伟郑其升陈瑾程海卫江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心/江苏省食品质量与安全重点实验室南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心江苏泰州225300

为通过将FMDV抗原靶向提呈至猪DC细胞进而提高疫苗免疫效力,本研究利用原核系统表达了猪XCR1目的蛋白,以该蛋白为免疫原免疫羊驼,提取其外周血淋巴细胞的总mRNA并反转录为cDNA,构建噬菌体展示纳米抗体文库,经过3轮亲和筛选获得猪XCR1特... 详细信息

为通过将FMDV抗原靶向提呈至猪DC细胞进而提高疫苗免疫效力,本研究利用原核系统表达了猪XCR1目的蛋白,以该蛋白为免疫原免疫羊驼,提取其外周血淋巴细胞的总mRNA并反转录为cDNA,构建噬菌体展示纳米抗体文库,经过3轮亲和筛选获得猪XCR1特异性纳米抗体;利用SOE-PCR技术将该纳米抗体和猪O型FMDV特异性纳米抗体Nb205连接,构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白。结果表明:1)成功原核表达猪XCR1目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot结果显示,其相对分子量大小约35 ku,符合预期。2)羊驼血清效价为1∶64000,满足建库要求;构建的噬菌体展示文库库容量约为1.91×10^(8)CFU/mL,插入率为91.3%,多样性好;经3轮亲和筛选成功获得了纳米抗体Nb75,间接ELISA结果显示该纳米抗体能特异性与XCR1结合。3)利用SOE-PCR技术成功构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白Nb75-205;SDS-PAGE和Western blot显示,该蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,且呈现二聚体结构,间接ELISA结果显示Nb75-205能同时与XCR1目的蛋白和FMDV抗原结合。综上,本研究采用噬菌体展示技术成功获得猪XCR1特异性纳米抗体,并构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白Nb75-205,且该蛋白为天然二聚体结构,与XCR1目的蛋白和FMDV抗原均具有较好的结合活性,为进一步开展FMDV抗原的猪XCR1靶向提呈研究奠定基础。

关键词：趋化因子受体1 双特异纳米抗体二聚体 FMDV

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重组猪胰蛋白酶双抗体夹心ELISA的建立及验证

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国际生物制品学杂志 2025年第2期48卷 102-107页

作者：张婷婷徐然赵海玉安少朋任丽刘朝阳张芹王鹏上海雅心生物技术有限公司上海201108 上海生物制品研究所有限责任公司质量检定室上海201403 上海生物制品研究所有限责任公司疫苗二室上海201403

目的建立定量检测重组猪胰蛋白酶(recombinant porcine trypsin,RPT)的双抗体夹心ELISA,并进行方法学验证及初步应用。方法通过抗体筛选获得可配对的抗RPT鼠源单克隆抗体对,并确定包被抗体及酶标抗体的最佳工作浓度、封闭液种类和浓度,... 详细信息

目的建立定量检测重组猪胰蛋白酶(recombinant porcine trypsin,RPT)的双抗体夹心ELISA,并进行方法学验证及初步应用。方法通过抗体筛选获得可配对的抗RPT鼠源单克隆抗体对,并确定包被抗体及酶标抗体的最佳工作浓度、封闭液种类和浓度,建立可定量检测RPT含量的双抗体夹心ELISA,确定该方法的线性范围、灵敏度、准确度、精密度和特异性。用建立的方法检测疫苗制品生产过程中病毒背景液中RPT含量,并验证该方法对不同品牌的天然提取猪胰蛋白酶的检出效率。结果确定了包被抗体(RPT-5C2D12)最佳工作浓度为6.000μg/mL、酶标抗体(RPT-1E10A5)最佳稀释比为1∶5000;封闭液为质量分数1%牛血清白蛋白;四参数逻辑拟合的标准曲线决定系数≥0.990,检测范围为0.156~40.000 ng/mL;定量限为0.156 ng/mL;准确度加标回收率为92.3%~106.7%;精密度验证批间变异系数≤6.7%,批内变异系数≤5.9%;除RPT外,与其他对照品蛋白均无交叉反应;3批次疫苗病毒背景液样品的加标回收率在87.4%~98.2%。2种品牌天然提取猪胰蛋白酶相对RPT的平均检出效率分别为59%和68%。结论成功建立了RPT双抗体夹心ELISA,该方法具有良好的线性关系、灵敏度、准确度、精密度及特异性,可用于疫苗类生物制品的猪胰蛋白酶残留量评估。

关键词：胰蛋白酶双抗体夹心法酶联免疫吸附试验

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伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗中2-苯氧乙醇浓度筛选及抑菌效力的研究

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微生物学免疫学进展 2025年第1期53卷 49-55页

作者：陈亚黎卢雪蕊刘富强李盈范金鹏李慧清李国晏兰州生物制品研究所有限责任公司质量检定室甘肃省疫苗技术创新中心国药集团兰州生物制药有限公司血源部

目的评估伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗中防腐剂2-苯氧乙醇(2-phenoxyethanol, 2-PE)的抑菌效力，初步确定添加2-PE的最佳浓度。方法选取不含2-PE、含8 mg/mL 2-PE、含10 mg/mL 2-PE和含12 mg/mL 2-PE共4种防腐剂配方的伤寒Vi多糖蛋白结合... 详细信息

目的评估伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗中防腐剂2-苯氧乙醇(2-phenoxyethanol, 2-PE)的抑菌效力，初步确定添加2-PE的最佳浓度。方法选取不含2-PE、含8 mg/mL 2-PE、含10 mg/mL 2-PE和含12 mg/mL 2-PE共4种防腐剂配方的伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗，采用《中华人民共和国药典》2020版(四部)(简称《中国药典》)方法向疫苗中加入规定浊度的标准测试菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉),在加入后6 h、24 h、7 d、14 d、28 d取样进行标准测试菌的计数，对标准测试菌落数取对数值，与抑菌效力标准比较对数值减少情况，确定配伍防腐剂的最佳浓度。结果含8 mg/mL 2-PE的伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗对铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的抑制作用均达到了《中国药典》规定的“B级别”标准，但对金黄色葡萄球菌的抑制作用未达到《中国药典》规定的最低标准。含10 mg/mL 2-PE和含12 mg/mL 2-PE的伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗抑菌效力均能满足《中国药典》中注射剂抑菌效力的标准，且对真菌的抑制效果完全满足抑菌效力“A级别”标准。结论伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗制剂配方中防腐剂2-PE添加的最佳浓度为10 mg/mL。

关键词：防腐剂 2-苯氧乙醇抑菌效力伤寒结合疫苗浓度筛选方法适用性真菌细菌平板菌落计数法菌悬液

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均相时间分辨荧光技术测定替度格鲁肽生物学活性

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药学学报 2025年第1期60卷 211-217页

作者：张孝明马蚺吕丽静王绿音吕萍梁成罡李晶中国食品药品检定研究院药品监管科学全国重点实验室国家卫生健康委生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 北京石油化工学院北京102617 泰安市食品药品检验检测研究院泰安市纤维检验所山东泰安271000

本研究成功构建了GLP-2R-HEK293细胞,通过试验条件参数优化和方法学验证,建立了基于均相时间分辨荧光免疫分析技术的替度格鲁肽体外生物学活性分析方法,并用该方法开展了替度格鲁肽原液和注射用替度格鲁肽相对效价检测。研究表明,GLP-2R... 详细信息

本研究成功构建了GLP-2R-HEK293细胞,通过试验条件参数优化和方法学验证,建立了基于均相时间分辨荧光免疫分析技术的替度格鲁肽体外生物学活性分析方法,并用该方法开展了替度格鲁肽原液和注射用替度格鲁肽相对效价检测。研究表明,GLP-2R-HEK293细胞中cAMP含量与替度格鲁肽浓度存在量效关系且符合四参数模型。用该方法检测64%、80%、100%、125%、156%共5个相对效价浓度的替度格鲁肽,验证结果符合《中华人民共和国药典》2020版四部通则9401的要求。分别对3批替度格鲁肽原液和3批制剂进行相对效价测定,所得曲线线性、回归性和平行性均通过系统适用性要求,6批样品的相对效价在83%~105%。本研究建立的替度格鲁肽生物学活性检测方法准确度高、精密度好、操作简便、耗时短,可用于替度格鲁肽产品的质量控制。

关键词：替度格鲁肽生物学活性质量控制方法学验证均相时间分辨荧光免疫分析技术

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免疫增强剂CVC1302介导Tfh细胞分化机制分析

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中国农业大学学报 2025年第1期30卷 179-187页

作者：杜露平鲁海燕李明举侯立婷于晓明程海卫张元鹏秦竹李兰张浩明杨利王义伟陈瑾郑其升侯继波江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品技术创新中心/江苏省食品质量安全重点实验室南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心江苏泰州225300 烟台市动物疾病预防与控制中心山东烟台264033

为探究CVC1302调控滤泡辅助性T细胞(Tfh)分化的机制,本研究体外利用GM-CSF刺激培育小鼠骨髓树突状细胞(DC),CVC1302刺激后,分别检测IL-6、IL-21转录及表达水平;利用体外细胞共培养试验,检测Tfh、Th1、Th2和Th17分化关键转录因子Bcl-6、T... 详细信息

为探究CVC1302调控滤泡辅助性T细胞(Tfh)分化的机制,本研究体外利用GM-CSF刺激培育小鼠骨髓树突状细胞(DC),CVC1302刺激后,分别检测IL-6、IL-21转录及表达水平;利用体外细胞共培养试验,检测Tfh、Th1、Th2和Th17分化关键转录因子Bcl-6、T-bet、GATA3和RORγt的转录水平,STAT3信号通路活化水平,Tfh细胞占CD4^(+)T细胞比例及STAT3信号通路抑制后反向验证Tfh细胞占CD4^(+)T细胞比例。结果表明:1)免疫增强剂CVC1302极显著促进小鼠骨髓DC分泌IL-6和IL-21。2)细胞共培养试验显示,CVC1302可显著促进STAT3磷酸化水平,表明STAT3信号通路被激活。3)利用STAT3信号通路抑制剂后,CD4^(+)T细胞分化为Tfh细胞的水平显著降低,表明CVC1302依赖STAT3信号通路激活介导初始CD4+T细胞分化为Tfh细胞。综上,本研究推断CVC1302通过促进DC分泌IL-6和IL-12,并激活STAT3信号通路介导Tfh细胞的分化,旨在为后续免疫增强剂的开发提供思路。

关键词： CVC1302 DC STAT3 Tfh细胞

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鞭毛蛋白的表达及其免疫增强效力评价

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中国动物传染病学报 2025年

作者：侯立婷刘昆昆安俊星于晓明秦竹杜露平张元鹏陈瑾郑其升江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心省部共建国家重点实验室培育基地—江苏省食品质量安全重点实验室南京农业大学动物医学院

本研究旨在研制安全高效的兽用疫苗免疫增强剂，为免疫增强剂的开发奠定基础。首先通过参考伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因序列，设计并构建了全长鞭毛蛋白FliC和删除D2和D3高变区的鞭毛蛋白FliC△D2D3的表达载体。然后利用原核表达系统表达... 详细信息

本研究旨在研制安全高效的兽用疫苗免疫增强剂，为免疫增强剂的开发奠定基础。首先通过参考伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因序列，设计并构建了全长鞭毛蛋白FliC和删除D2和D3高变区的鞭毛蛋白FliC△D2D3的表达载体。然后利用原核表达系统表达这两种蛋白，并进行纯化与鉴定。获得这两种蛋白后，进一步检测这两种蛋白体外对DC2.4细胞的TLR 5的激活和相关细胞因子的表达情况，并对其在PEDV疫苗上的免疫增强效力进行了评价。结果表明，1)两种蛋白在原核表达系统中均以可溶形式表达；2)添加鞭毛蛋白刺激后，DC 2.4细胞中TLR5及相关细胞因子的表达水平显著提高；3)FliC和FliC△D2D3均能显著提高小鼠和仔猪免疫后的PEDV特异性的IgG抗体水平，其中FliC△D2D3的免疫效果优于全长的FliC。该研究不仅有助于了解鞭毛蛋白FliC在免疫调节中的作用，也为基于鞭毛蛋白的免疫增强剂的开发提供了基础。

关键词：鞭毛蛋白FliC、FliC 免疫增强剂 PEDV

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