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HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响

中国兽医科学 2024年第6期54卷 711-717页

作者：傅彦贇石磊杨星竹胡娇胡增垒扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为了评价HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒(NDV)载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响,本研究向NDV载体携带的H7N9 HA蛋白中引入S227N突变,用反向遗传学技术拯救重组NDV,评价重组病毒的生物学特性与对鸡的免疫原性。结果显示,表达HAS... 详细信息

为了评价HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒(NDV)载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响,本研究向NDV载体携带的H7N9 HA蛋白中引入S227N突变,用反向遗传学技术拯救重组NDV,评价重组病毒的生物学特性与对鸡的免疫原性。结果显示,表达HAS227N的重组NDV的毒力弱(MDT>120 h),在鸡胚中的病毒效价高(HA效价:512;EID_(50):10^(9.3)/m L),复制性能较强,这些生物学特征与载体病毒及表达野生型HA蛋白的重组NDV相似。S227N突变不影响HA蛋白在重组NDV感染细胞中的表达。此外,表达HAS227N与野生型HA蛋白的重组NDV均能诱导产生较高的抗NDV血凝抑制(HI)抗体;HA蛋白S227N突变能够提高重组NDV免疫鸡的血清转化率,却不能显著提升针对H7N9的HI抗体效价。上述结果表明,HA蛋白S227N突变对基于NDV载体的H7N9亚型禽流感疫苗的免疫原性没有显著的增强作用。本研究对H7N9亚型禽流感疫苗的设计、优化与效力评估有参考意义。

关键词： H7N9亚型禽流感病毒疫苗新城疫病毒载体 HA蛋白 S227N突变免疫原性

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新型重组H10N3亚型禽流感病毒对公共卫生安全的威胁

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病毒学报 2022年第4期38卷 958-964页

作者：刘开拓高如一王晓泉刘秀梵扬州大学农业科技发展研究院教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009 扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在历史上发生过多次跨种间感染人的事件,对公共卫生安全造成严重威胁。2021年6月1日我国通报了全球首例人感染H10N3事件,引发广泛关注。此次引发人感染的H10N3为新型重组病毒,HA和NA基因分别来自... 详细信息

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在历史上发生过多次跨种间感染人的事件,对公共卫生安全造成严重威胁。2021年6月1日我国通报了全球首例人感染H10N3事件,引发广泛关注。此次引发人感染的H10N3为新型重组病毒,HA和NA基因分别来自于H10N8和H7N3,内部基因全部来源于S基因型H9N2。在我国活禽市场同样分离到多株和人源毒株高度同源的禽源H10N3病毒,表明在发生人感染事件之前H10N3已在我国家禽中流行。新型重组H10N3病毒对鸡为低致病性,通过泄殖腔排毒,仅可通过直接接触方式在鸡群中有限传播;具备双受体结合特性,可通过气溶胶途径在豚鼠中高效传播,引发小鼠致死性感染。新型重组H10N3病毒的生物学特性表明其对公共卫生安全造成较大威胁,需重点关注。

关键词：禽流感病毒 H10N3 H9N2 公共卫生安全

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一株针对H7N9亚型禽流感病毒血凝素蛋白茎部的单克隆抗体的表征

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生物工程学报 2022年第1期38卷 160-173页

作者：赵江艳朱颜笑胡娇胡增垒刘秀梵扬州大学农业农村部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际联合实验室江苏扬州225009

流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)的茎部区相对保守,是广谱疫苗、抗体与病毒检测制剂的重要靶点。前期研究获得了一株与H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白茎部多肽(aa428–452)反应的单克隆抗体(5D3-1B5)。为系统评价其生物学特性,本研究... 详细信息

流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)的茎部区相对保守,是广谱疫苗、抗体与病毒检测制剂的重要靶点。前期研究获得了一株与H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白茎部多肽(aa428–452)反应的单克隆抗体(5D3-1B5)。为系统评价其生物学特性,本研究测定了5D3-1B5的抗体效价(IgG、血凝抑制与病毒中和滴度),鉴定了抗体识别的抗原表位与编码基因的序列及结构,并评价了抗体与不同亚型流感病毒的交叉反应性。结果显示,5D3-1B5不具有针对H7N9病毒的血凝抑制与病毒中和活性,但是与HA蛋白的反应性较强;基于多肽的酶联免疫吸附试验与噬菌体表面展示随机多肽文库筛选的方法,鉴定了5D3-1B5识别的表位是位于HA茎部C螺旋区的^(431)W-^(433)Y-^(437)L基序,且含有该表位突变的重组H7N9病毒失去了与抗体的反应性;测定了抗体可变区的基因序列并定位了轻链与重链可变区的互补决定区;抗体可变区的结构模拟与分子对接则验证了抗体与HA蛋白茎部C螺旋区的结合;值得注意的是,5D3-1B5与group 1和2不同亚型的流感病毒具有广谱反应性。因此,5D3-1B5具有作为流感病毒广谱检测与抗体治疗制剂的应用潜力,研究结果也为认识H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白的抗原表位特征提供了新的信息。

关键词：禽流感病毒血凝素蛋白茎部单克隆抗体抗原表位交叉反应性

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稳定表达H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白的293T细胞株构建及应用

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中国家禽 2023年第10期45卷 59-64页

作者：曹永忠邓婧黄雅薄宗义胡增垒扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 扬州大学农业农村部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

为获得用于评价H7N9亚型禽流感疫苗诱导的抗体Fc免疫效应的靶细胞,研究采用慢病毒包装与感染技术构建一株稳定表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)HA蛋白的细胞株,并以该细胞株为靶细胞建立H7N9亚型禽流感疫苗免疫血清补体介导的细胞毒(AD... 详细信息

为获得用于评价H7N9亚型禽流感疫苗诱导的抗体Fc免疫效应的靶细胞,研究采用慢病毒包装与感染技术构建一株稳定表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)HA蛋白的细胞株,并以该细胞株为靶细胞建立H7N9亚型禽流感疫苗免疫血清补体介导的细胞毒(ADCML)活性的检测方法。结果显示成功包装了一株重组慢病毒,滴度可达108 FU/mL;构建了稳定表达H7N9 AIV HA蛋白的293T细胞株,HA蛋白主要在细胞膜上表达。基于新城疫病毒(NDV)载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫鸡后,诱导产生的HA结合性IgG抗体滴度为2180。以稳定细胞株为靶细胞,载体疫苗血清诱导的细胞死亡水平显著高于空载体与未免疫鸡血清(P<0.001);补体灭活后,载体疫苗血清诱导的细胞死亡水平显著降低(P<0.001)。研究表明,基于NDV载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫鸡血清具有较强的ADCML活性,稳定表达H7N9 AIV HA蛋白的细胞株可作为评价H7N9亚型禽流感疫苗免疫血清Fc免疫效应的靶细胞。

关键词： H7N9亚型禽流感 HA蛋白稳定细胞株疫苗 Fc免疫效应补体抗体保护

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基于增强回归树的麦-玉轮作农田蒸散影响因素分析

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农业机械学报 2023年第1期54卷 317-325页

作者：李成李兆哲王让会丁奠元徐扬扬州大学植物保护学院扬州225009 南京信息工程大学江苏省农业气象重点实验室南京210044 扬州大学水利科学与工程学院扬州225009 扬州大学农学院扬州225009 扬州大学植物功能基因组学教育部重点实验室扬州225009

为探讨华北典型轮作农田蒸散(ET)变化规律,以山东禹城试验站冬小麦-夏玉米(麦-玉)轮作田为研究对象,基于涡度相关技术实测的8年观测数据与增强回归树方法,分析了农田ET逐日变化特征及其对环境因子的响应。结果表明:研究时段内逐日ET变... 详细信息

为探讨华北典型轮作农田蒸散(ET)变化规律,以山东禹城试验站冬小麦-夏玉米(麦-玉)轮作田为研究对象,基于涡度相关技术实测的8年观测数据与增强回归树方法,分析了农田ET逐日变化特征及其对环境因子的响应。结果表明:研究时段内逐日ET变化范围在0~9.6 mm/d之间,且不同阶段(小麦季、玉米季和农闲期)ET总量存在较大差异。一般而言,每年小麦季ET的峰值和总量均明显高于玉米季,而农闲期ET占全年ET总量的比例不足4%。净辐射是影响麦-玉轮作田不同阶段ET变化的首要因素,对各阶段ET的贡献率由高到低依次为小麦季(81.4%)、玉米季(52.7%)、农闲期(36.8%)。除净辐射外,其他环境因子对ET的影响则具有阶段性差异。饱和水汽压差对小麦季和玉米季ET存在一定的影响,而土壤含水率和风速对农闲期ET的贡献率相对较高。研究可为变化环境下农业水资源高效利用以及作物模型优化等提供科学依据。

关键词：农田蒸散麦-玉轮作环境因子增强回归树

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一种水稻叶片基因组DNA简易提取方法

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生物技术通报 2025年第1期41卷 74-84页

作者：金素奎国倩倩刘巧泉高继平扬州大学教育部农业与农产品安全国际联合实验室扬州225009 扬州大学农学院扬州225009

【目的】为了应对日益增加的大规模遗传材料鉴定需求,急需建立一种快速、简易、高效、低成本的基因组DNA提取方法。【方法】根据水稻遗传鉴定的特点,对传统TPS法进行改进和简化。(1)将特制的钢珠加样条与全自动研磨仪结合使用,提高了研... 详细信息

【目的】为了应对日益增加的大规模遗传材料鉴定需求,急需建立一种快速、简易、高效、低成本的基因组DNA提取方法。【方法】根据水稻遗传鉴定的特点,对传统TPS法进行改进和简化。(1)将特制的钢珠加样条与全自动研磨仪结合使用,提高了研磨水稻叶片组织的速度;(2)使用TPS缓冲液室温研磨裂解,无需液氮冷冻研磨;(3)研磨后的组织匀浆仅需75℃水浴20 min即可完成裂解;(4)室温静置5 min后吸取粗提液上清5μL至96孔PCR板内,使用排枪加入95μL灭菌的去离子水进行稀释,即完成基因组DNA的提取过程。【结果】简易TPS法提取基因组DNA的步骤减少至6步以内,省略了DNA沉淀、离心、洗涤、溶解等过程。提取过程简单、快速,可在30 min内完成96个样本的DNA提取。提取过程中使用的试剂种类较少且廉价易得、安全环保。通过优化DNA提取液的用量,用简易TPS法提取的基因组DNA开展的各类常规分子遗传鉴定的效果与CTAB法及传统TPS法相当。【结论】简易TPS法提高了水稻基因组DNA提取的效率,适合高通量的遗传鉴定。

关键词：水稻叶片基因组DNA CTAB法传统TPS法简易TPS法

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HA蛋白位点变异影响H7N9亚型流感病毒特性的研究进展

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畜牧兽医学报 2021年第8期52卷 2093-2106页

作者：严雅瑶顾敏刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009

2013年春,我国首次出现人感染H7N9亚型禽流感疫情,对家禽养殖和公众健康均产生了严重危害,并且在第5波流行期又演变出血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白裂解位点处存在插入突变的高致病性禽流感病毒株。HA作为A型流感病毒表面表达丰度最高... 详细信息

2013年春,我国首次出现人感染H7N9亚型禽流感疫情,对家禽养殖和公众健康均产生了严重危害,并且在第5波流行期又演变出血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白裂解位点处存在插入突变的高致病性禽流感病毒株。HA作为A型流感病毒表面表达丰度最高的糖蛋白,在介导病毒与宿主细胞表面受体的结合、促进病毒囊膜与细胞膜的融合、刺激机体产生中和抗体等方面具有至关重要的作用。本文围绕H7N9病毒,简要综述了HA蛋白的结构与功能,及其关键功能氨基酸位点变异影响病毒生物学特性的研究进展,以期为深入解析HA蛋白在H7N9病毒感染致病中的作用提供重要参考。

关键词：流感病毒 H7N9 HA蛋白功能氨基酸位点感染与致病

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红细胞伪装纳米颗粒:一个具有潜力的药物及疫苗递送系统

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生物工程学报 2023年第1期39卷 159-176页

作者：彭培培胡娇扬州大学兽医学院动物传染病实验室江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际联合实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

红细胞伪装纳米颗粒是一种以红细胞或红细胞膜纳米囊泡为载体在体内递送药物、酶、多肽和抗原等物质的系统,具有生物相容性好、循环周期长、靶向性强等优势。本文从红细胞载体的种类、发展历程、递送策略应用以及其局限性和未来的挑战... 详细信息

红细胞伪装纳米颗粒是一种以红细胞或红细胞膜纳米囊泡为载体在体内递送药物、酶、多肽和抗原等物质的系统,具有生物相容性好、循环周期长、靶向性强等优势。本文从红细胞载体的种类、发展历程、递送策略应用以及其局限性和未来的挑战等方面进行了详细阐述,并展望了其未来的发展方向。

关键词：红细胞红细胞膜递送策略药物疫苗

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黄淮平原地区典型县域耕地土壤肥力评价

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江苏农业学报 2024年第8期40卷 1434-1445页

作者：王雨王桂良沈婉仪赵文慧胡锐钱晓晴农业农村部耕地质量监测与评价重点实验室/扬州大学江苏扬州225009

土壤肥力是土壤基本性质及生产力的综合表现,在江苏省响水县研究区内进行土壤肥力评价有利于了解该县土壤肥力空间分布状况,对黄淮平原耕地资源的合理利用具有重要作用。本研究利用地统计分析法和主成分分析法筛选土壤肥力指标以构建肥... 详细信息

土壤肥力是土壤基本性质及生产力的综合表现,在江苏省响水县研究区内进行土壤肥力评价有利于了解该县土壤肥力空间分布状况,对黄淮平原耕地资源的合理利用具有重要作用。本研究利用地统计分析法和主成分分析法筛选土壤肥力指标以构建肥力评价的最小数据集(MDS),同时运用加权求和法计算出土壤肥力指数(SFQI),建立反映响水县研究区土壤肥力的综合评价体系。结果表明,响水县研究区土壤有机质、全氮、有效铁、有效铜和有效钼含量丰富,均值整体处于一级水平;土壤有效磷含量较为缺乏,整体为四级水平。除pH以外,变异系数均大于10%,各指标块基比均在25%以上,空间自相关性较弱。研究区土壤肥力评价的MDS为pH、容重、全氮、速效钾、有效铜、有效钼,能够较好地反映全量数据集(TDS)对土壤肥力评价的信息。研究区整体土壤肥力处于三级地力水平,呈现西北高东南低的空间分布特征。速效钾和有效钼是研究区的主要限制因子,建议在施用氮、磷、钾肥时提高钾肥比重,增施微量元素肥料,以提高土壤肥力。本研究结果可为黄淮平原耕地土壤肥力评价和耕地土壤培肥提供参考。

关键词：最小数据集主成分分析土壤肥力评价江苏响水

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水稻维生素B_1合成相关基因OsTHIC的功能研究

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生物技术通报 2024年第2期40卷 99-108页

作者：张超王子瑞孙亚丽毛馨晨唐家琪于恒秀江苏省作物基因组学和分子育种重点实验室植物功能基因组学教育部重点实验室扬州大学农学院扬州225009

【目的】维生素B_(1)(vitamin B_(1), VB_(1))是生物所必需的微量元素,其作为多个酶的辅因子,参与重要的细胞代谢途径,而水稻中维生素B_(1)合成途径还有待深入研究。本研究旨在解析水稻维生素B_(1)合成相关基因OsTHIC的生物学功能。【... 详细信息

【目的】维生素B_(1)(vitamin B_(1), VB_(1))是生物所必需的微量元素,其作为多个酶的辅因子,参与重要的细胞代谢途径,而水稻中维生素B_(1)合成途径还有待深入研究。本研究旨在解析水稻维生素B_(1)合成相关基因OsTHIC的生物学功能。【方法】综合运用诱变技术、色素测定、Mutmap+、基因编辑及非靶向代谢组分析等手段克隆目的基因并解析其功能。【结果】从EMS诱变的水稻突变体库中发现一个心叶白化致死突变体wll1(white leaf and lethal 1)。wll1从四叶期开始出现心叶白化表型,白化表型逐渐扩展到其他叶片并导致幼苗死亡。与野生型相比,wll1的叶绿素含量与类胡萝卜素含量显著降低。利用Mutmap+及基因编辑技术,确定目的基因为维生素B_(1)合成相关基因OsTHIC。OsTHIC在叶片具有较高表达量,OsTHIC蛋白定位于叶绿体。wll1及OsTHIC的敲除突变体中维生素B_(1)含量均显著低于野生型,外施维生素B_(1)可以恢复wll1的突变表型。外施维生素B_(1)及OsTHIC突变均会影响维生素B_(1)合成相关基因的表达。非靶向代谢组测序分析表明,野生型与wll1差异代谢物在氨基酸的生物合成、辅因子的生物合成、ABC转运器及氨酰基-tRNA的生物合成等方面显著富集。【结论】OsTHIC通过调控维生素B_(1)含量,参与氨基酸合成等代谢过程,在水稻生长发育过程中发挥重要作用。

关键词： OsTHIC 维生素B_1 叶色 Mutmap+ 水稻

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