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HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响

中国兽医科学 2024年第6期54卷 711-717页

作者：傅彦贇石磊杨星竹胡娇胡增垒扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为了评价HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒(NDV)载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响,本研究向NDV载体携带的H7N9 HA蛋白中引入S227N突变,用反向遗传学技术拯救重组NDV,评价重组病毒的生物学特性与对鸡的免疫原性。结果显示,表达HAS... 详细信息

为了评价HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒(NDV)载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响,本研究向NDV载体携带的H7N9 HA蛋白中引入S227N突变,用反向遗传学技术拯救重组NDV,评价重组病毒的生物学特性与对鸡的免疫原性。结果显示,表达HAS227N的重组NDV的毒力弱(MDT>120 h),在鸡胚中的病毒效价高(HA效价:512;EID_(50):10^(9.3)/m L),复制性能较强,这些生物学特征与载体病毒及表达野生型HA蛋白的重组NDV相似。S227N突变不影响HA蛋白在重组NDV感染细胞中的表达。此外,表达HAS227N与野生型HA蛋白的重组NDV均能诱导产生较高的抗NDV血凝抑制(HI)抗体;HA蛋白S227N突变能够提高重组NDV免疫鸡的血清转化率,却不能显著提升针对H7N9的HI抗体效价。上述结果表明,HA蛋白S227N突变对基于NDV载体的H7N9亚型禽流感疫苗的免疫原性没有显著的增强作用。本研究对H7N9亚型禽流感疫苗的设计、优化与效力评估有参考意义。

关键词： H7N9亚型禽流感病毒疫苗新城疫病毒载体 HA蛋白 S227N突变免疫原性

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一株针对H7N9亚型禽流感病毒血凝素蛋白茎部的单克隆抗体的表征

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生物工程学报 2022年第1期38卷 160-173页

作者：赵江艳朱颜笑胡娇胡增垒刘秀梵扬州大学农业农村部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际联合实验室江苏扬州225009

流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)的茎部区相对保守,是广谱疫苗、抗体与病毒检测制剂的重要靶点。前期研究获得了一株与H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白茎部多肽(aa428–452)反应的单克隆抗体(5D3-1B5)。为系统评价其生物学特性,本研究... 详细信息

流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)的茎部区相对保守,是广谱疫苗、抗体与病毒检测制剂的重要靶点。前期研究获得了一株与H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白茎部多肽(aa428–452)反应的单克隆抗体(5D3-1B5)。为系统评价其生物学特性,本研究测定了5D3-1B5的抗体效价(IgG、血凝抑制与病毒中和滴度),鉴定了抗体识别的抗原表位与编码基因的序列及结构,并评价了抗体与不同亚型流感病毒的交叉反应性。结果显示,5D3-1B5不具有针对H7N9病毒的血凝抑制与病毒中和活性,但是与HA蛋白的反应性较强;基于多肽的酶联免疫吸附试验与噬菌体表面展示随机多肽文库筛选的方法,鉴定了5D3-1B5识别的表位是位于HA茎部C螺旋区的^(431)W-^(433)Y-^(437)L基序,且含有该表位突变的重组H7N9病毒失去了与抗体的反应性;测定了抗体可变区的基因序列并定位了轻链与重链可变区的互补决定区;抗体可变区的结构模拟与分子对接则验证了抗体与HA蛋白茎部C螺旋区的结合;值得注意的是,5D3-1B5与group 1和2不同亚型的流感病毒具有广谱反应性。因此,5D3-1B5具有作为流感病毒广谱检测与抗体治疗制剂的应用潜力,研究结果也为认识H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白的抗原表位特征提供了新的信息。

关键词：禽流感病毒血凝素蛋白茎部单克隆抗体抗原表位交叉反应性

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稳定表达H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白的293T细胞株构建及应用

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中国家禽 2023年第10期45卷 59-64页

作者：曹永忠邓婧黄雅薄宗义胡增垒扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 扬州大学农业农村部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

为获得用于评价H7N9亚型禽流感疫苗诱导的抗体Fc免疫效应的靶细胞,研究采用慢病毒包装与感染技术构建一株稳定表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)HA蛋白的细胞株,并以该细胞株为靶细胞建立H7N9亚型禽流感疫苗免疫血清补体介导的细胞毒(AD... 详细信息

为获得用于评价H7N9亚型禽流感疫苗诱导的抗体Fc免疫效应的靶细胞,研究采用慢病毒包装与感染技术构建一株稳定表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)HA蛋白的细胞株,并以该细胞株为靶细胞建立H7N9亚型禽流感疫苗免疫血清补体介导的细胞毒(ADCML)活性的检测方法。结果显示成功包装了一株重组慢病毒,滴度可达108 FU/mL;构建了稳定表达H7N9 AIV HA蛋白的293T细胞株,HA蛋白主要在细胞膜上表达。基于新城疫病毒(NDV)载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫鸡后,诱导产生的HA结合性IgG抗体滴度为2180。以稳定细胞株为靶细胞,载体疫苗血清诱导的细胞死亡水平显著高于空载体与未免疫鸡血清(P<0.001);补体灭活后,载体疫苗血清诱导的细胞死亡水平显著降低(P<0.001)。研究表明,基于NDV载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫鸡血清具有较强的ADCML活性,稳定表达H7N9 AIV HA蛋白的细胞株可作为评价H7N9亚型禽流感疫苗免疫血清Fc免疫效应的靶细胞。

关键词： H7N9亚型禽流感 HA蛋白稳定细胞株疫苗 Fc免疫效应补体抗体保护

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干扰素刺激基因15(ISG15)在天然免疫中的抗病毒作用研究进展

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中国免疫学杂志 2022年第2期38卷 253-256,F0003,F0004页

作者：嵇祝星王晓泉刘晓文刘秀梵(指导) 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225000

干扰素刺激基因15(ISG15)是干扰素刺激下产生的最丰富的产物,也是宿主对病毒感染应答环节中的重要环节。距离ISG15第一次被报道已有42年,越来越多研究揭示了其蛋白复杂和多变的性质,除可对细胞内多种蛋白进行修饰外,也可作为细胞因子分... 详细信息

干扰素刺激基因15(ISG15)是干扰素刺激下产生的最丰富的产物,也是宿主对病毒感染应答环节中的重要环节。距离ISG15第一次被报道已有42年,越来越多研究揭示了其蛋白复杂和多变的性质,除可对细胞内多种蛋白进行修饰外,也可作为细胞因子分泌至细胞外。ISG15存在物种间作用差异。本文介绍ISG15在天然免疫中的抗病毒功能及其发挥这一功能的不同机制,并阐述其研究进展。

关键词： ISG15 抗病毒感染 ISG化修饰天然免疫

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新型重组H10N3亚型禽流感病毒对公共卫生安全的威胁

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病毒学报 2022年第4期38卷 958-964页

作者：刘开拓高如一王晓泉刘秀梵扬州大学农业科技发展研究院教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009 扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在历史上发生过多次跨种间感染人的事件,对公共卫生安全造成严重威胁。2021年6月1日我国通报了全球首例人感染H10N3事件,引发广泛关注。此次引发人感染的H10N3为新型重组病毒,HA和NA基因分别来自... 详细信息

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在历史上发生过多次跨种间感染人的事件,对公共卫生安全造成严重威胁。2021年6月1日我国通报了全球首例人感染H10N3事件,引发广泛关注。此次引发人感染的H10N3为新型重组病毒,HA和NA基因分别来自于H10N8和H7N3,内部基因全部来源于S基因型H9N2。在我国活禽市场同样分离到多株和人源毒株高度同源的禽源H10N3病毒,表明在发生人感染事件之前H10N3已在我国家禽中流行。新型重组H10N3病毒对鸡为低致病性,通过泄殖腔排毒,仅可通过直接接触方式在鸡群中有限传播;具备双受体结合特性,可通过气溶胶途径在豚鼠中高效传播,引发小鼠致死性感染。新型重组H10N3病毒的生物学特性表明其对公共卫生安全造成较大威胁,需重点关注。

关键词：禽流感病毒 H10N3 H9N2 公共卫生安全

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甲型流感病毒所致宿主细胞因子风暴的研究进展

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中国预防兽医学报 2022年第3期44卷 338-343页

作者：嵇祝星刘晓文王晓泉刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225000 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225000

甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)是有囊膜的正粘病毒科成员,其基因组包含8个节段的单股负链RNA。IAV是人呼吸道感染的重要病原,可以导致季节性的流行和大流行。回顾历史,共发生了4次流感大流行,分别是1918年H1N1、1957年H2N2、196... 详细信息

甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)是有囊膜的正粘病毒科成员,其基因组包含8个节段的单股负链RNA。IAV是人呼吸道感染的重要病原,可以导致季节性的流行和大流行。回顾历史,共发生了4次流感大流行,分别是1918年H1N1、1957年H2N2、1968年的H3N2以及2009年的H1N1流感大流行。至今,全球每年有10亿左右人口会感染流感病毒,有294000~518000人死于季节性流感,给人类健康及公共卫生安全带来巨大的威胁。

关键词：甲型流感病毒正粘病毒科呼吸道感染 H1N1 H3N2 公共卫生安全流感大流行

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HA蛋白位点变异影响H7N9亚型流感病毒特性的研究进展

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畜牧兽医学报 2021年第8期52卷 2093-2106页

作者：严雅瑶顾敏刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009

2013年春,我国首次出现人感染H7N9亚型禽流感疫情,对家禽养殖和公众健康均产生了严重危害,并且在第5波流行期又演变出血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白裂解位点处存在插入突变的高致病性禽流感病毒株。HA作为A型流感病毒表面表达丰度最高... 详细信息

2013年春,我国首次出现人感染H7N9亚型禽流感疫情,对家禽养殖和公众健康均产生了严重危害,并且在第5波流行期又演变出血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白裂解位点处存在插入突变的高致病性禽流感病毒株。HA作为A型流感病毒表面表达丰度最高的糖蛋白,在介导病毒与宿主细胞表面受体的结合、促进病毒囊膜与细胞膜的融合、刺激机体产生中和抗体等方面具有至关重要的作用。本文围绕H7N9病毒,简要综述了HA蛋白的结构与功能,及其关键功能氨基酸位点变异影响病毒生物学特性的研究进展,以期为深入解析HA蛋白在H7N9病毒感染致病中的作用提供重要参考。

关键词：流感病毒 H7N9 HA蛋白功能氨基酸位点感染与致病

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A型流感病毒M基因的研究进展

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中国兽医学报 2021年第8期41卷 1639-1644页

作者：乔树苗顾敏刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

M基因是A型流感病毒基因组的第7个节段,全长1027个碱基,进化上可被划分为7个特有宿主谱系:人谱系Hu1、Hu2,禽谱系Av1、Av2,猪谱系Sw1、Sw2和犬/马谱系CE。M基因主要编码基质蛋白M1和离子通道蛋白M2,这2种结构蛋白在A型流感病毒的生命周... 详细信息

M基因是A型流感病毒基因组的第7个节段,全长1027个碱基,进化上可被划分为7个特有宿主谱系:人谱系Hu1、Hu2,禽谱系Av1、Av2,猪谱系Sw1、Sw2和犬/马谱系CE。M基因主要编码基质蛋白M1和离子通道蛋白M2,这2种结构蛋白在A型流感病毒的生命周期中具备多种功能。现简要综述A型流感病毒M基因的遗传进化特点以及M1和M2蛋白的结构与功能,以期为A型流感病毒的相关机制研究提供参考。

关键词： A型流感病毒 M基因遗传进化基质蛋白离子通道

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表达绿色荧光和红色荧光蛋白重组新城疫病毒的构建

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中国家禽 2021年第6期43卷 104-107页

作者：王杨杨薛玲王文莉陈卿胡顺林刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

试验旨在探究以新城疫病毒为载体进行多联疫苗的构建。通过将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和红色荧光蛋白(DsRed)基因用T2A肽串联后克隆入嵌合新城疫病毒AI4-2FHN的P和M基因之间,获得重组质粒pAI4-2FHN-GRFP。该质粒与pCI-NP、pCI-P和p... 详细信息

试验旨在探究以新城疫病毒为载体进行多联疫苗的构建。通过将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和红色荧光蛋白(DsRed)基因用T2A肽串联后克隆入嵌合新城疫病毒AI4-2FHN的P和M基因之间,获得重组质粒pAI4-2FHN-GRFP。该质粒与pCI-NP、pCI-P和pCI-L 3个辅助质粒共转染至稳定表达T7 RNA聚合酶的BSR细胞后,获得可同时表达绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的重组新城疫病毒。拯救病毒在SPF鸡胚中繁殖传代,通过RT-PCR验证,并检测重组病毒的生物学活性和外源蛋白的表达效率。结果显示:重组病毒在鸡胚内传3代后,鸡胚尿囊液HA效价稳定在8 log2,感染细胞24 h、36 h、48 h后在荧光显微镜下观察到EGFP与DsRed的荧光亮度逐渐增强,且相同时间内红色荧光蛋白与绿色荧光蛋白表达量相似。重组病毒的构建为新城疫病毒作载体用于多联多价疫苗的研发提供了参考。

关键词：重组新城疫病毒绿色荧光蛋白红色荧光蛋白串联

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A型流感病毒神经氨酸酶蛋白功能研究进展

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动物医学进展 2021年第10期42卷 66-70页

作者：郑沁玫顾敏刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

A型流感病毒(IAV)的宿主谱广泛,对人类健康和畜禽养殖均构成严重威胁。神经氨酸酶(neuraminidase,NA)作为IAV囊膜表面主要的糖蛋白之一,在病毒的感染过程中至关重要,是常用的抗病毒药物作用靶点。以往关于NA蛋白的研究主要聚焦于其通过... 详细信息

A型流感病毒(IAV)的宿主谱广泛,对人类健康和畜禽养殖均构成严重威胁。神经氨酸酶(neuraminidase,NA)作为IAV囊膜表面主要的糖蛋白之一,在病毒的感染过程中至关重要,是常用的抗病毒药物作用靶点。以往关于NA蛋白的研究主要聚焦于其通过切割宿主细胞表面唾液酸与血凝素(hemagglutinin,HA)之间的α-2,6或α-2,3糖苷键以促进新生病毒粒子释放的功能方面,而近来不断有证据表明,神经氨酸酶蛋白在受体结合和宿主适应性方面同样发挥关键作用。论文综述了神经氨酸酶蛋白的结构特征,并对神经氨酸酶蛋白的酶催化活性、受体结合功能以及与HA蛋白的功能平衡方面进行了总结,以期为深入理解IAV感染的分子机制提供参考。

关键词： A型流感病毒神经氨酸酶受体结合唾液酸血凝素-神经氨酸酶平衡

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