检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2025年第3期57卷 66-73页

作者：徐超谢泉武佳妍王胜男万志敏邵红霞秦爱建叶建强李拓凡扬州大学兽医学院/禽类预防医学教育部重点实验室/江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

旨在为解决国内禽白血病净化周期长以及净化鸡群J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染频发等问题提供新型抗ALV-J策略。本研究利用前期构建好的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与血清4型禽腺病毒(FAdV-4)纤突蛋白Fiber-2融合的重组FAdV-4为载体,并使... 详细信息

旨在为解决国内禽白血病净化周期长以及净化鸡群J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染频发等问题提供新型抗ALV-J策略。本研究利用前期构建好的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与血清4型禽腺病毒(FAdV-4)纤突蛋白Fiber-2融合的重组FAdV-4为载体,并使用CRISPR/Cas9和Cre-LoxP技术构建表达ALV-J囊膜蛋白(Env)的重组FAdV-4,通过间接免疫荧光试验和Western blot验证重组病毒表达的Env蛋白,测定重组病毒在鸡肝癌细胞系(LMH)细胞中的增殖特性。结果:成功拯救了能表达ALV-J Env蛋白的重组病毒FAdV-4-ALV-J-env,该重组病毒在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。本研究构建的重组病毒FAdV-4-ALV-J-env为ALV-J和FAdV-4感染的联防联控提供了二联候选疫苗株。

关键词： J亚群禽白血病病毒 Env蛋白血清4型禽腺病毒重组病毒

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羊种布鲁氏菌链霉素耐受基因筛选及鉴定

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微生物学通报 2025年第2期52卷 690-702页

作者：周师众袁雅琴宁文晴薛天骐杨晓雯丁家波中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(北方)北京100193 扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009 山东农业大学动物医学院山东泰安271018

【背景】布鲁氏菌(Brucella spp.)是一种兼性胞内寄生菌,能够引起世界范围内的人兽共患流行病——布鲁氏菌病(以下简称布病)。链霉素是治疗布病的推荐药物,但我国已有链霉素耐受分离株(根据CLSI推荐的耐药折点)。【目的】筛选并鉴定羊... 详细信息

【背景】布鲁氏菌(Brucella spp.)是一种兼性胞内寄生菌,能够引起世界范围内的人兽共患流行病——布鲁氏菌病(以下简称布病)。链霉素是治疗布病的推荐药物,但我国已有链霉素耐受分离株(根据CLSI推荐的耐药折点)。【目的】筛选并鉴定羊种布鲁氏菌(Brucella melitensis)链霉素耐受的新基因。【方法】利用转录组筛选羊种布鲁氏菌链霉素耐受新基因,并利用同源重组、分子对接等技术预测并鉴定相关基因的功能。【结果】羊种布鲁氏菌(M5疫苗株)在含2×MIC浓度链霉素培养基上,12 h后通过耐受恢复增殖能力。转录组分析表明,细胞膜组成成分在低浓度链霉素耐受中发挥重要作用,核糖体通路相关基因表达量显著性增加[|log2FC|≥2.0,P<0.05],群体感应通路、Ⅳ型分泌系统相关基因表达量显著性降低(|log2FC|≥2.0,P<0.05)。利用同源重组技术缺失组成Ⅳ型分泌系统的元件,发现缺失virB3和virB5基因后,M5疫苗株链霉素MIC值增高,回补后与亲本株差异不显著。分子对接预测发现,VirB3和VirB5能够通过氢键与链霉素结合。【结论】链霉素主要影响羊种布鲁氏菌细胞膜组分涉及的相关通路。羊种布鲁氏菌通过降低Ⅳ型分泌系统组成元件virB3和virB5基因的表达耐受链霉素。本研究为布鲁氏菌耐药株研究提供了新思路,为布鲁氏菌新药研发提供了候选靶点。

关键词：羊种布鲁氏菌链霉素 Ⅳ型分泌系统 VirB操纵子

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一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐药株荧光定量PCR检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2025年第3期56卷 1465-1472页

作者：杨晓雯宁文晴周师众袁雅琴侯雪新丁家波中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(北方) 北京100193 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室北京102206 山东农业大学动物医学院泰安271001 扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室扬州225009

近年来,世界范围内已分离获得布鲁氏菌复方新诺明耐药株,快速检测样品中是否含有耐药株有助于指导临床用药。目前国内外尚无布鲁氏菌复方新诺明耐药株的快速检测方法。本研究旨在建立一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐受株的快速检测方法。... 详细信息

近年来,世界范围内已分离获得布鲁氏菌复方新诺明耐药株,快速检测样品中是否含有耐药株有助于指导临床用药。目前国内外尚无布鲁氏菌复方新诺明耐药株的快速检测方法。本研究旨在建立一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐受株的快速检测方法。基于前期的研究筛选最小抑菌浓度较高的我国羊种布鲁氏菌分离株,利用基因组测序分析全基因组SNPs并筛选SNPs位点,利用MGB探针建立荧光定量检测羊种布鲁氏菌复方新诺明耐药株。研究发现,羊种布鲁氏菌2型标准株可作为耐药株分析的参考株,且64个SNPs和InDels为耐药株特有;12个突变位点可用于建立耐药株快速检测方法;利用染色体1中2014308位点的A/G多态性建立荧光定量检测方法特异性良好,最低能检测2×10^(1)CFU菌量,可用于临床样品是否含有复方新诺明耐药株的检测。本研究建立了一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐药株的荧光定量检测方法,为我国布病耐药株的防控提供科学依据,同时也为临床用药提供参考。

关键词：羊种布鲁氏菌复方新诺明全基因组SNPs MGB探针

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动物源产肠毒素大肠杆菌(ETEC)黏附素研究进展

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微生物学报 2012年第6期52卷 679-686页

作者：周虹朱军朱国强扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室扬州225009

动物源产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是引起动物(尤其是幼龄动物)腹泻的主要病原菌。已知黏附素和肠毒素是ETEC中两种重要的毒力因子,在致病性中两者缺一不可。其中黏附素结合到宿主易感肠上皮细胞是ETEC感... 详细信息

动物源产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是引起动物(尤其是幼龄动物)腹泻的主要病原菌。已知黏附素和肠毒素是ETEC中两种重要的毒力因子,在致病性中两者缺一不可。其中黏附素结合到宿主易感肠上皮细胞是ETEC感染的第一步,也是最重要的关键步骤。动物源ETEC的菌毛黏附素主要包括K88、K99、987P、F18、F17和F41等。人们从20世纪60年代就开始了ETEC菌毛黏附素的相关研究,包括菌毛的基因、结构组成、生物合成、菌毛表达的调控机制以及黏附素和宿主受体相互作用等,这些研究基础有助于我们深入了解ETEC病原菌的感染机理;并且在疾病诊断和新疫苗的开发中具有重大意义。

关键词：产肠毒素大肠杆菌(ETEC) 黏附素菌毛

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肠道免疫的安全靶向载体：大肠杆菌Nissle1917

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微生物学报 2013年第6期53卷 538-544页

作者：夏芃芃朱军朱国强扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室扬州225009

长期以来,如何激发高效的肠道黏膜免疫应答来预防肠道感染始终是较为棘手的问题。本文旨在对大肠杆菌(Escherichia coli)Nissle 1917作为肠道黏膜免疫的安全靶向载体,调理胃肠道菌群紊乱、缓解溃疡性结肠炎以及利用益生菌固有特性或优... 详细信息

长期以来,如何激发高效的肠道黏膜免疫应答来预防肠道感染始终是较为棘手的问题。本文旨在对大肠杆菌(Escherichia coli)Nissle 1917作为肠道黏膜免疫的安全靶向载体,调理胃肠道菌群紊乱、缓解溃疡性结肠炎以及利用益生菌固有特性或优化特性进行治疗的可能性等相关研究进展作一综述。大肠杆菌Nissle1917(EcN)是一株可口服的优良益生菌,也可作为生物载体活苗候选株,兼有较强的肠道局部定殖能力和无免疫原性的特性。该菌株还可以作为载体靶向递呈TAT—凋亡素融合蛋白治疗结肠直肠癌,并在研发靶向递呈防御素治疗溃疡性结肠炎和克罗恩病上具有重要的功能。其基因修饰株能够原位递呈特定的抗原分子,有效激发特异性的黏膜免疫应答。重组大肠杆菌Nissle-HA110-120具有体外表达特异性抗原的能力,但EcN菌体本身不会引起黏膜免疫应答,也不影响对自身抗原的外周免疫耐受。同时,EcN具有很好的安全性,尤其是因炎症导致肠道防御屏障破坏的时候,重组大肠杆菌Nissle-HA110-120在健康或患有急性结肠炎的小鼠体内都没有迁移、克隆扩增和激活特异性CD4+T淋巴细胞的作用。

关键词：大肠杆菌(Escherichia coli)Nissle1917 靶向分子递呈 T细胞应答免疫调节

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猪Toll样受体7基因人工miRNA表达质粒的构建与筛选

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第1期29卷 18-21,26页

作者：宋红芹姜翠翠孙怀昌扬州大学兽医学院禽类预防医学省部共建教育部重点实验室江苏扬州225009

目的构建猪Toll样受体7(TLR7)基因的人工miRNA(amiRNA)特异性表达载体,筛选有效amiRNA。方法 RT-PCR扩增猪TLR7基因的1984～2648 bp序列,构建融合表达载体pTLR7-EGFP。设计针对猪TLR7的5对amiRNA,构建重组干扰质粒pcDNA5-miRTLR7。将pcDNA5-miRTLR7和pTLR7-EGFP共转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR检测amiTLR7的表达,以荧光显微镜观察和流式细胞术分析干扰效率。结果 5个amiTLR7都成功表达,且均能沉默NIH-3T3细胞中TLR7基因的表达,抑制效率为36.99%到97.28%,其中amiTLR7-3效果最佳。结论成功构建了针对猪TLR7基因的amiRNA表达质粒,筛选出了沉默猪TLR7基因的最佳干扰序列。

关键词： Toll样受体7基因人工miRNA RNA干扰筛选

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基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株的构建及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第2期30卷 117-120,130页

作者：王静康喜龙焦扬熊丹宋丽杨芸潘志明焦新安扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室、禽类预防医学教育部重点实验室江苏扬州225009

目的构建基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株。方法以H5N1禽流感病毒血凝素(HA)基因和鼠伤寒沙门菌SL7202基因组为模板,通过重叠PCR扩增出HA1-2-fljB基因片段,将其插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a-HA1-2-fljB,再将其... 详细信息

目的构建基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株。方法以H5N1禽流感病毒血凝素(HA)基因和鼠伤寒沙门菌SL7202基因组为模板,通过重叠PCR扩增出HA1-2-fljB基因片段,将其插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a-HA1-2-fljB,再将其转化表达菌*** BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达。SDS-PAGE和Western blot法鉴定分析融合蛋白HA1-2-fljB。通过刺激HEK293-TLR5细胞,检测融合蛋白的TLR5生物学活性。结果正确构建出重组质粒pET32aHA1-2-fljB,SDS-PAGE显示,融合蛋白HA1-2-fljB相对分子质量(Mr)约为100 000,Western blot法表明融合蛋白具有良好的免疫反应性。TLR5生物活性实验结果显示,与HA1-2蛋白刺激组相比,HA1-2-fljB诱导HEK293-TLR5细胞分泌了高水平的IL-8(P<0.01)。结论成功表达出具有TLR5活性的融合蛋白HA1-2-fljB,为研究H5亚型禽流感新型疫苗奠定了基础。

关键词： H5亚型禽流感鞭毛蛋白血凝素原核表达

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鸡组织滴虫病PCR病原学诊断方法的建立

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中国预防兽医学报 2013年第2期35卷 160-163页

作者：曲昌宝王尚尚侯照峰宿世杰刘丹丹曹李琴陶建平许金俊扬州大学禽类预防医学教育部重点实验室江苏扬州225009

为建立鸡组织滴虫(***)的PCR检测方法,本研究以确诊的感染火鸡组织滴虫的阳性鸡的肝组织DNA为模板,设计针对18S rRNA基因高度保守的特异性引物,建立组织滴虫病的PCR诊断方法。敏感性试验显示阳性样品组织DNA的最低检出限为4 ng/μL。特... 详细信息

为建立鸡组织滴虫(***)的PCR检测方法,本研究以确诊的感染火鸡组织滴虫的阳性鸡的肝组织DNA为模板,设计针对18S rRNA基因高度保守的特异性引物,建立组织滴虫病的PCR诊断方法。敏感性试验显示阳性样品组织DNA的最低检出限为4 ng/μL。特异性试验表明与其他常见鸡寄生虫的DNA样品均无交叉反应。该PCR方法对临床样品的检出率为100%,与组织病理学诊断结果符合率为100%。该诊断方法敏感、特异,可以用于组织滴虫病的临床诊断。

关键词：火鸡组织滴虫 18S核糖体RNA基因 PCR 诊断

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地方蛋鸡群中A亚群禽白血病病毒的分离与全基因组序列分析

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中国兽医科学 2011年第10期41卷 1005-1010页

作者：钱琨朱钰峰沈海玉金文杰秦爱建扬州大学禽类预防医学省部共建教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009

利用DF1细胞培养、ELISA和多聚酶链式反应(PCR)从地方蛋鸡群中分离并鉴定了1株A亚群禽白血病病毒(ALV-A),命名为AH10。依据GenBank中已发表的序列分段扩增获得AH10株的全基因序列。序列对比分析发现,AH10株基因全长7 458 bp,其中gp85与... 详细信息

利用DF1细胞培养、ELISA和多聚酶链式反应(PCR)从地方蛋鸡群中分离并鉴定了1株A亚群禽白血病病毒(ALV-A),命名为AH10。依据GenBank中已发表的序列分段扩增获得AH10株的全基因序列。序列对比分析发现,AH10株基因全长7 458 bp,其中gp85与国内另一蛋鸡A亚群SDAU09C3株同源性最高,氨基酸同源性达到96.5%。此外,AH10株在非编码区5′-LTR区域存在蛋鸡群A亚群禽白血病所共有的19个碱基的插入突变。研究结果进一步完善了我国地方蛋鸡群中禽白血病的流行病学信息。

关键词：禽白血病病毒 A亚群分离鉴定全基因序列分析

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抗鸡β_2微球蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 410-413页

作者：刘秋郁川徐文才史荣华钱琨金文杰秦爱建扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009 扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室江苏扬州225009

为制备抗鸡β2微球蛋白(β2-M)单克隆抗体(MAb),本研究以合成的多肽TF-29作为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选出特异性的抗鸡β2-M杂交瘤细胞株(3D1和6E7),亚类鉴定均为IgG1/κ链;间接ELISA测定3D1和6E7腹水效价分别为1∶25 60... 详细信息

为制备抗鸡β2微球蛋白(β2-M)单克隆抗体(MAb),本研究以合成的多肽TF-29作为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选出特异性的抗鸡β2-M杂交瘤细胞株(3D1和6E7),亚类鉴定均为IgG1/κ链;间接ELISA测定3D1和6E7腹水效价分别为1∶25 600和1∶204 800。应用western blot和间接免疫荧光鉴定MAb的特异性显示,其不仅能够与原核表达产物也能够与真核细胞表达的β2-M特异性结合,还能够与禽类巨噬细胞系HD11中天然的β2-M特异性反应。3D1和6E7也能够特异性识别正常鸡血清与血浆中游离的β2-M。以上结果表明,本研究应用多肽筛选出抗鸡β2-M MAb,其效价稳定并具有良好的特异性,为深入探索鸡β2-M在免疫学中的功能提供实验依据。

关键词：鸡β2微球蛋白多肽单克隆抗体

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