检索结果-内蒙古大学图书馆

水禽流感病毒分离株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)膜蛋白基因遗传进化分析

微生物学报 2005年第4期45卷 491-495页

作者：张评浒刘晓文钱忠明唐应华刘秀梵薛峰郝贵杰扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

采用常规的血清学收验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行两年多的监测,分离鉴定出多株H6亚型禽流感病毒。对其中的一株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)(简称DkYZ23302)(H6N2)的表面膜蛋白基因进行了序列测定... 详细信息

采用常规的血清学收验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行两年多的监测,分离鉴定出多株H6亚型禽流感病毒。对其中的一株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)(简称DkYZ23302)(H6N2)的表面膜蛋白基因进行了序列测定,并与GenBank中收录的其它序列进行了比较,遗传进化结果表明DkYZ23302的血凝素基因(HA)与近年香港分离的鸭源毒株DkHK346199(H6N1)、中国台湾鸡源毒株CkTaiwanna398的亲缘关系最近;而神经氨酸酶基因(NA)遗传进化分析结果表明DkYZ23302(H6N2)的NA基因起源于禽源H9N2亚型流感病毒,这可能是不同亚型禽流感病毒在水禽体内发生基因重配的结果。DkYZ23302(H6N2)的HA推导的氨基酸剪切位点序列为P-Q-I-E-T-R-D,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列,与对SPF鸡的致病力试验相吻合。

关键词：病毒分离株进化分析基因遗传低致病性禽流感病毒 RT-PCR方法 GenBank 神经氨酸酶基因 H9N2亚型遗传进化膜蛋白基因血凝素基因致病力试验华东地区分离鉴定序列测定亲缘关系中国台湾 NA基因分析结果特征序列

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利用反向遗传操作技术产生ZJI株鹅源新城疫病毒

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微生物学报 2005年第5期45卷 780-783页

作者：刘玉良张艳梅胡顺林吴艳涛刘秀梵龙进学石火英张小荣张如宽扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

利用反向遗传操作技术,将ZJI株鹅源新城疫病毒全基因组cNDA克隆(NDV3GM122)和含该毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCI-NP、pCI-P与pCI-L)共转染BSR-T7/5细胞;同时,将NDV3GM122与含新城疫病毒La Sota毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCIne... 详细信息

利用反向遗传操作技术,将ZJI株鹅源新城疫病毒全基因组cNDA克隆(NDV3GM122)和含该毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCI-NP、pCI-P与pCI-L)共转染BSR-T7/5细胞;同时,将NDV3GM122与含新城疫病毒La Sota毒株NP、P及L基因的3个表达载体(pCIneoNP、pCIneoP与pCIneoL)进行共转染。通过间接免疫荧光实验(Indiectimmunofluorescence assay,IFA)以及接种鸡胚后进行血凝(Hemagglutinin,HA)与血凝抑制(Hemagglutinininhibition,HI)试验、RT-PCR扩增和电镜观察,结果均证实全基因组cDNA克隆NDV3GM122与La Sota毒株表达载体共转染组产生了有血凝性的鹅源新城疫病毒,而NDV3GM122与ZJI株表达载体共转染组暂未检测到有血凝性的病毒。ZJI株鹅源新城疫病毒的拯救成功为对该病毒进行功能基因组研究和疫苗的研制等后续工作打下了基础。

关键词：反向遗传操作技术鹅源新城疫病毒鹅病毒拯救

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鹅源新城疫病毒ZJ1株微型基因组的构建及其初步应用

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微生物学报 2005年第1期45卷 72-76页

作者：张艳梅刘玉良黄勇贾立军刘秀梵卢建红韦栋平吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

在获得鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组序列的基础上 ,用增强型绿色荧光蛋白 (eGFP)报告基因取代鹅源新城疫病毒ZJ1株整个编码区 ,只保留与病毒复制、转录和病毒粒子包装相关的调控序列 ,将其反向克隆入转录载体TVT7R(0 0 )中 ,构建了该... 详细信息

在获得鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组序列的基础上 ,用增强型绿色荧光蛋白 (eGFP)报告基因取代鹅源新城疫病毒ZJ1株整个编码区 ,只保留与病毒复制、转录和病毒粒子包装相关的调控序列 ,将其反向克隆入转录载体TVT7R(0 0 )中 ,构建了该毒株的微型基因组。当转染用辅助病毒ZJ1株感染的HEp_2细胞时报告基因得到表达 ,表明此微型基因组RNA可被辅助病毒提供的NP、P和L蛋白翻译。同时将该病毒NP、P和L蛋白基因分别克隆入真核表达载体pCI_neo中 ,构建了表达该病毒NP、P与L蛋白的辅助质粒 ,用此微型基因组对辅助质粒的表达产物进行了功能鉴定并对该病毒拯救过程中痘苗病毒的最适感染剂量进行了摸索。

关键词：新城疫病毒微型基因组病毒拯救

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用反向遗传操作技术产生致弱的H5亚型重组流感病毒

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微生物学报 2005年第1期45卷 53-57页

作者：卢建红龙进学邵卫星韦栋平刘秀梵张艳梅扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

选择一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒 (AIV) ,缺失其HA基因裂解序列的 4个碱性氨基酸、使HA裂解模式由高致病性的PQRERRRKKR↓GL突变为低致病性的PQRESR↓GL ,将修饰的HA基因克隆入转录表达载体pHW2 0 0 0、构建质粒pHW5 2 4_HA ,将该毒株... 详细信息

选择一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒 (AIV) ,缺失其HA基因裂解序列的 4个碱性氨基酸、使HA裂解模式由高致病性的PQRERRRKKR↓GL突变为低致病性的PQRESR↓GL ,将修饰的HA基因克隆入转录表达载体pHW2 0 0 0、构建质粒pHW5 2 4_HA ,将该毒株和H9N2亚型毒株的NA全基因分别克隆入pHW2 0 0 0 ,构建质粒pHW5 0 6_NA和pHW2 0 6_NA。将pHW5 2 4_HA与pHW5 0 6_NA或pHW2 0 6_NA组合、均用A WSN 33(H1N1)提供 6个内部基因 ,两个组合的 8个质粒分别共转染COS_1细胞 ,产生了H5N1和H5N2两个亚型的基因重排病毒。通过在鸡胚中的连续传代和适应 ,2个重组病毒血凝价上升到 1∶2 9、表面基因稳定、对 6周龄SPF鸡不表现致病性 ,H5N2重组病毒对鸡胚的毒力低于H5N1病毒。

关键词：禽流感病毒 H5亚型反向遗传操作技术基因重排致弱

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抑制差减杂交筛选禽致病性大肠杆菌基因组差异片段及其分析

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微生物学报 2005年第5期45卷 680-684页

作者：陈祥赵娟高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

采用抑制差减杂交技术(Suppression subtractive hybridization,SSH)对禽致病性大肠杆菌E037株(血清型O78)与非致病菌株K-12MG1655以及同一O2血清型高致病菌株E058与低致病菌株E526进行基因组差异片段克隆与分析。从E037株中共检出17个... 详细信息

采用抑制差减杂交技术(Suppression subtractive hybridization,SSH)对禽致病性大肠杆菌E037株(血清型O78)与非致病菌株K-12MG1655以及同一O2血清型高致病菌株E058与低致病菌株E526进行基因组差异片段克隆与分析。从E037株中共检出17个特异性差异片段,E058株中共检出32个特异性差异片段。经同源分析,这些序列可分为4类:质粒相关序列、噬菌体相关序列、已知功能序列、未知功能序列。这些差异片段包含许多重要的大肠杆菌毒力相关基因,如大肠杆菌素、气杆菌素受体、铁基因簇等。49个片段中,14个片段与其它微生物基因组同源性较高。结果表明,大肠杆菌高致病株与低致病菌株或非致病菌株基因组间存在较多差异基因,其中包括毒力、毒力相关基因、代谢以及噬菌体等基因成分。

关键词：禽致病性大肠杆菌抑制差减杂交基因组差异

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表达PWD和ED保护性抗原的两种重组菌的免疫原性研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2005年第3期26卷 8-11页

作者：杨健美陈祥高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

采用已构建的能表达致断奶仔猪腹泻(PW D)和仔猪水肿病(ED)大肠杆菌保护性抗原F edA-S tx 2e B-F aeG融合蛋白的重组菌BL 21(pFSF aeG)和重组菌X 4550(pFSF aeG),经IPTG诱导后制成抗原,经口服及灭活后制成油乳剂苗免疫小鼠后,检测IgG抗... 详细信息

采用已构建的能表达致断奶仔猪腹泻(PW D)和仔猪水肿病(ED)大肠杆菌保护性抗原F edA-S tx 2e B-F aeG融合蛋白的重组菌BL 21(pFSF aeG)和重组菌X 4550(pFSF aeG),经IPTG诱导后制成抗原,经口服及灭活后制成油乳剂苗免疫小鼠后,检测IgG抗体水平的变化。结果表明:重组菌经灭活后免疫小鼠能够诱导产生针对上述3种保护性抗原的特异性抗体IgG。免疫效力试验结果显示,两种重组菌的最佳免疫途径均为灭活后经腹腔免疫。

关键词：大肠杆菌断奶仔猪腹泻仔猪水肿病重组菌抗体检测免疫效力

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A型流感病毒的反向遗传技术研究进展

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中国生物工程杂志 2005年第3期25卷 1-5页

作者：卢建红刘秀梵邵卫星扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

A型流感病毒基因组为单股负义RNA ,分为 8个片段。反向遗传技术即从克隆的cDNA产生病毒的过程 ,是研究RNA病毒、也是研究A型流感病毒基因结构与功能的新技术。介绍了A型流感病毒反向遗传技术的发展 ,完全以质粒为基础的新操作系统及其... 详细信息

A型流感病毒基因组为单股负义RNA ,分为 8个片段。反向遗传技术即从克隆的cDNA产生病毒的过程 ,是研究RNA病毒、也是研究A型流感病毒基因结构与功能的新技术。介绍了A型流感病毒反向遗传技术的发展 ,完全以质粒为基础的新操作系统及其在研究病毒的生命周期、致病性、产生基因修饰的疫苗候选株等方面的应用。

关键词： A型流感病毒基因修饰质粒基因结构 RNA 生病疫苗候选株反向遗传致病性基因组

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鸡痘病毒复制非必需区的选择对重组鸡痘病毒免疫效力的影响

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微生物学报 2005年第3期45卷 359-362页

作者：孙蕾刘武杰陈素娟石火英刘秀梵吴艳涛张体银扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室扬州225009

母源抗体的干扰是重组鸡痘病毒(FPV)活载体疫苗至今未能得到大规模推广应用的主要原因,而选择适当的FPV复制非必需区可能是解决这一问题的方法之一。根据已发表的美国致病株FPV的基因组设计两对引物,用PCR方法扩增FPV假定复制非必需区... 详细信息

母源抗体的干扰是重组鸡痘病毒(FPV)活载体疫苗至今未能得到大规模推广应用的主要原因,而选择适当的FPV复制非必需区可能是解决这一问题的方法之一。根据已发表的美国致病株FPV的基因组设计两对引物,用PCR方法扩增FPV假定复制非必需区的两个侧翼区FPV1和FPV2 ,利用此假定复制非必需区构建FPV表达载体pP12LS及表达ZJ1株新城疫病毒(NDV)F基因的转移载体pP12LSF。pP12LSF与2 82E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞(CEF) ,经数轮蓝斑筛选得到纯化的重组病毒rFPV_FSC。重组FPV在CEF上连续传2 0代仍具有良好的遗传稳定性。对重组FPV进行免疫效力试验,在SPF鸡上,重组病毒rFPV_FSC和与之仅有复制非必需区差异的rFPV_FSB均能抵抗NDV强毒的攻击,提供10 0 %的保护。但在有母源抗体的商品鸡上,rFPV_FSC与rFPV_FSB的免疫效力却有显著差异,保护率分别为10 0 %和6 1 5 4 % ,rFPV_FSC的免疫效力与NDV常规油苗相当。试验结果表明,母源抗体对重组FPV的免疫效力有一定的影响。

关键词：鸡痘病毒复制非必需区免疫效力

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利用8质粒系统拯救A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株禽流感病毒

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微生物学报 2005年第3期45卷 373-376页

作者：石火英卢建红陈素娟孙蕾刘秀梵刘玉良扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

应用反向遗传技术将含有1998年中国大陆分离株H9N2亚型禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的8个基因片段的质粒共转染COS_1细胞,产生了与野生病毒生物学特性相同的H9N2亚型AIV。将A Chicken Shanghai F 98(CK SH F 98)株H9N2亚型AIV的... 详细信息

应用反向遗传技术将含有1998年中国大陆分离株H9N2亚型禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的8个基因片段的质粒共转染COS_1细胞,产生了与野生病毒生物学特性相同的H9N2亚型AIV。将A Chicken Shanghai F 98(CK SH F 98)株H9N2亚型AIV的8个基因组cDNA分别克隆到polⅠ_polⅡ转录表达载体pHW2 0 0 0中,构建成8个转录表达载体重组质粒。将这8个质粒共转染COS_1细胞,2 4h后收获细胞及上清接种SPF鸡胚,4 8h后收取鸡胚尿囊液继续进行鸡胚传代,产生能致死鸡胚的病毒。经血凝、血凝抑制试验、序列分析和电镜观察,证实产生了CK SH F 98(H9N2 )株AIV。

关键词：反向遗传技术 H9N2亚型AIV 质粒转染

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用8质粒病毒拯救系统产生H9N2/WSN重组A型流行性感冒病毒

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病毒学报 2005年第1期21卷 48-53页

作者：卢建红邵卫星刘玉良贾立军韦栋平石火英刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

把禽流行性感冒(流感)病毒A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因cDNA克隆至polⅠpolⅡ双向转录和表达载体pHW2000,用这两种质粒与8质粒病毒拯救系统中流感病毒A/WSN/33(H1N1)6个内部基因cDNA的质粒组合(6+2重... 详细信息

把禽流行性感冒(流感)病毒A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因cDNA克隆至polⅠpolⅡ双向转录和表达载体pHW2000,用这两种质粒与8质粒病毒拯救系统中流感病毒A/WSN/33(H1N1)6个内部基因cDNA的质粒组合(6+2重排),共转染COS 1细胞,产生了能在鸡胚中高滴度增殖的H9N2/WSN重组病毒。用A/WSN/33的8个基因cDNA质粒作对照,也产生了转染子病毒。经过EID50测定和MDCK感染实验,新基因型H9N2/WSN病毒感染鸡胚的能力强(EID50为10-11/0.2ml),而且对鸡胚的毒力弱,在不加胰酶的情况下不使MDCK细胞产生病变。经电镜观察,两个转染子病毒的形态与野生型流感病毒相似。反向遗传操作技术的建立,为对禽流感病毒基因功能和疫苗构建等方面的研究提供了新的手段。

关键词： A型流行性感冒病毒 H9N2亚型禽流感病毒共转染 8质粒系统反向遗传操作技术血凝素神经氨酸酶

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