检索结果-内蒙古大学图书馆

鹿结核病流行株融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875的原核表达

中国兽医科学 2014年第5期44卷 515-520页

作者：王文玉宋纪伟曾范利时坤李健明张云刘东旭俊伟杜锐吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 吉林市人民医院吉林吉林132001 吉林农业大学中药材学院吉林长春130118 吉林农业大学研究生学院教育部动物生产及产品质量安全重点实验室吉林省药用动物二级实验室吉林长春130118

以本实验室保存的鹿体内分离并鉴定的结核病流行株为模板,利用重叠延伸剪接技术设计融合基因的引物,扩增融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3872-Rv3874-Rv3875;重组表达质粒被转化入大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG... 详细信息

以本实验室保存的鹿体内分离并鉴定的结核病流行株为模板,利用重叠延伸剪接技术设计融合基因的引物,扩增融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3872-Rv3874-Rv3875;重组表达质粒被转化入大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导表达,并采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化。基因测序结果显示,融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875的序列与GenBank中序列的符合率为99.89%。SDS-PAGE分析显示,融合基因在大肠杆菌中成功被诱导表达,获得以可溶形式表达的融合蛋白,该蛋白的分子质量约为60ku。Western-blot鉴定结果显示,纯化好的融合蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,说明该融合蛋白具有良好的反应原性,这一结果为它在鹿结核病血清学诊断中的应用奠定了试验基础。

关键词：鹿结核病融合基因原核表达反应原性

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牛病毒性腹泻病毒E2基因优化表达重组卡介苗的免疫试验

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中国兽医科学 2014年第2期44卷 176-181页

作者：曾范利张云张梦时坤李建明郝俊伟孙凡婷杜锐吉林农业大学中药材学院吉林长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 长春金赛药业有限责任公司吉林长春130012 吉林农业大学研究生学院教育部动物生产及产品质量安全重点实验室/吉林省药用动物二级实验室吉林长春130118

为评价牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2基因优化表达重组卡介苗(rBCG)对小鼠的免疫效果,分别用已构建的pMV361-E2-1、pMV361-E2-2、pMV361-E2-3、pMV361-E2-4、pMV361-E2-5、pMV361-E2-6重组卡介苗,pMV361空载体,卡介苗,BVDV灭活疫苗和生理盐水对小鼠进行免疫接种,检测各免疫组血清中特异性抗体效价、T淋巴细胞增殖程度和CD4+、CD8+和IL-12的水平,以评价其免疫效果。结果显示,6组重组卡介苗均能够引起小鼠产生BVDV特异性抗体,促进致敏T淋巴细胞增殖,免疫小鼠血清CD4+、CD8+和IL-12的水平均高于对照组,pMV361-E2-1重组卡介苗在诱导小鼠产生BVDV抗体方面要优于其他各组基因重组卡介苗。结果表明,BVDV E2基因不同片段的重组卡介苗均可诱导免疫小鼠产生特异性的体液免疫和细胞免疫,这为BVDV基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2基因重组卡介苗免疫

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牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因重组卡介苗初步免疫研究

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 146-149页

作者：李健明杨宇航王慧慧曾范利时坤张妍刘菲杜锐吉林农业大学中药材学院吉林长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 长春西诺生物科技有限公司吉林长春130012 吉林农业大学研究生学院教育部动物生产及产品质量安全重点实验室/吉林省药用动物二级实验室吉林长春130118

为评价表达牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2基因重组卡介苗(rBCG)的初步免疫效果,本研究分别将rBCG-pMV261-E2和rBCG-pMV361-E2免疫实验用大耳白兔,通过间接ELISA方法和T淋巴细胞转化试验分别检测兔体内体液免疫和细胞免疫应答水平。... 详细信息

为评价表达牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2基因重组卡介苗(rBCG)的初步免疫效果,本研究分别将rBCG-pMV261-E2和rBCG-pMV361-E2免疫实验用大耳白兔,通过间接ELISA方法和T淋巴细胞转化试验分别检测兔体内体液免疫和细胞免疫应答水平。结果显示在体液免疫方面,两组rBCG均从第7 d开始产生BVDV抗体,抗体水平逐渐上升,在42 d达到峰值,并且rBCG-pMV361-E2刺激所产生的抗体水平始终高于rBCG-pMV261-E2;而rBCG血清中的抗结核菌抗体水平与正常BCG无显著差异,与BVDV阳性对照组和阴性对照组之间则差异显著;在细胞免疫方面,与阴性对照组相比,两组rBCG与BVDV灭活苗相同,免疫实验兔后淋巴细胞对特异性刺激均有明显的增殖。表明两组rBCG免疫实验兔后均使其产生了体液免疫应答和细胞免疫应答,为进一步研制BVDV新型基因工程疫苗奠定基础。

关键词：牛病毒性腹泻-黏膜病病毒 E2基因重组卡介苗

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鹿结核分枝杆菌流行株Rv3874-Rv3875融合基因的克隆及原核表达

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经济动物学报 2014年第4期18卷 209-213页

作者：曾范利王文玉宋纪伟时坤李健明刘东旭刘杨杜锐吉林农业大学中药材学院吉林农业大学动物科学技术学院吉林市人民医院教育部动物生产及产品质量安全重点实验室吉林省药用动物二级实验室

以吉林农业大学经济动物疾病实验室分离并保存的鹿结核分枝杆菌流行株为模板,利用重叠延伸剪接技术(Splicing by overlap extension,SOE)设计引物,克隆Rv3874-Rv3875融合基因,构建重组表达质粒p GEX-4T-1-Rv3874-75,在大肠杆菌BL21(DE3... 详细信息

以吉林农业大学经济动物疾病实验室分离并保存的鹿结核分枝杆菌流行株为模板,利用重叠延伸剪接技术(Splicing by overlap extension,SOE)设计引物,克隆Rv3874-Rv3875融合基因,构建重组表达质粒p GEX-4T-1-Rv3874-75,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化,表达产物通过SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果表明:测序后融合基因Rv3874-Rv3875的序列与Gen Bank中序列的符合率为100%,重组表达质粒p GEX-4T-1-Rv3874-75在大肠杆菌中成功诱导表达,获得可溶性表达的融合蛋白,经SDS-PAGE分析该蛋白的相对分子质量约49 ku,经Western blot鉴定纯化好的融合蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,具有良好的反应原性。

关键词：鹿结核分枝杆菌流行株融合基因克隆原核表达

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不同毒力结核分支杆菌感染RAW264.7巨噬细胞不同时间细胞因子转录水平标准曲线的建立及应用

引用

中国兽药杂志 2014年第12期48卷 5-10页

作者：张妍宋纪伟曾范利时坤李健明刘杨刘菲孙凡婷杜锐吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林市人民医院吉林吉林132001 吉林农业大学中药材学院长春130118 教育部动物生产及产品质量安全重点实验室吉林省药用动物二级实验室长春130118

为检测不同毒力结核分枝杆菌感染巨噬细胞后细胞因子转录水平的变化,构建IL-6、IL-10、TNF-α重组标准质粒,建立了实时荧光定量PCR标准曲线。应用该方法对不同毒力结核分枝杆菌感染RAW264.7巨噬细胞6个时间点细胞因子的转录水平进行分析... 详细信息

为检测不同毒力结核分枝杆菌感染巨噬细胞后细胞因子转录水平的变化,构建IL-6、IL-10、TNF-α重组标准质粒,建立了实时荧光定量PCR标准曲线。应用该方法对不同毒力结核分枝杆菌感染RAW264.7巨噬细胞6个时间点细胞因子的转录水平进行分析,结果显示H37Rv组、BCG组相比于对照组刺激后均使三种细胞因子的转录水平发生变化,其中IL-6和TNF-α发生明显变化。本试验通过对不同时间点细胞因子转录水平的分析为结核分枝杆菌对巨噬细胞凋亡机制的研究提供新思路。

关键词：结核分枝杆菌 RAW264.7细胞荧光定量PCR 细胞因子

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