检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2013年第12期29卷 1319-1321,1326页

作者：李虎胡鹏重庆医科大学附属第二医院感染科感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆400010

目的利用计算机软件预测人感染H7N9禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的B细胞表位。方法以HA、NA的氨基酸序列为基础,用Protean、PORTER、MEGA等生物信息学软件综合预测HA、NA蛋白可能的B细胞表位,再结合吴玉章的平均抗原指数方案... 详细信息

目的利用计算机软件预测人感染H7N9禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的B细胞表位。方法以HA、NA的氨基酸序列为基础,用Protean、PORTER、MEGA等生物信息学软件综合预测HA、NA蛋白可能的B细胞表位,再结合吴玉章的平均抗原指数方案进一步筛选。结果 HA蛋白最有可能的B细胞表位位于其N端的第53～57、179～183区段,HA蛋白的其它区段:62～66、98～101、164～166、315～320、424～426、443～445、493～496等也有可能存在B细胞表位。NA蛋白最有可能的B细胞表位位于N端的第321～329、379～386区段,NA蛋白的其他区段:46～48、52～54、74～78、136～141、145～150、160～164、194～197、246～248、333～343、426～431等也有可能存在B细胞表位。结论综合多种方案预测了H7N9病毒HA、NA蛋白的B细胞表位,为人感染H7N9禽流感病毒表位疫苗研究提供了实验基础。

关键词： H7N9 HA NA B细胞表位

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NK与NKT细胞在慢加急性肝衰竭患者外周血中的变化分析

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重庆医学 2013年第31期42卷 3747-3749页

作者：彭辉常琳王磊陈敏重庆医科大学附属第二医院检验科 400010 重庆医科大学病毒性肝炎研究所/感染性疾病分子生物学省部共建教育部重点实验室 400016

目的研究NK及NKT细胞在乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者外周血中的变化。方法用流式细胞仪分别检测25例健康对照者(HC)、40例慢性乙型肝炎(CHB)患者、26例HBV-ACLF患者外周血淋巴细胞中NK、NKT细胞的比例,经统计分析,比较各组... 详细信息

目的研究NK及NKT细胞在乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者外周血中的变化。方法用流式细胞仪分别检测25例健康对照者(HC)、40例慢性乙型肝炎(CHB)患者、26例HBV-ACLF患者外周血淋巴细胞中NK、NKT细胞的比例,经统计分析,比较各组间NK或NKT的差异,同时分析HBV-ACLF组中的NK或NKT细胞与乙型肝炎标志物或肝功能间的相关性。结果 HC、CHB、HBV-ACLF组外周血的NK细胞比例分别为(15.0±6.0)%、(11.4±6.8)%和(8.9±6.7)%,HBV-ACLF组与其他两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);而NKT细胞在HC、CHB、HBV-ACLF组外周血中的比例分别为(1.9±1.3)%、(4.3±3.7)%和(5.4±8.6)%,HBV-ACLF组与HC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HBVACLF患者外周血内NK细胞比例显著性降低,而NKT细胞比例显著性升高,他们可能在HBV-ACLF疾病中发挥着一定的作用。

关键词：杀伤细胞,自然 NKT 慢加急性肝衰竭乙型肝炎病毒

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丙型肝炎病毒F蛋白抑制肝癌细胞增殖功能的研究

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中华肝脏病杂志 2012年第5期20卷 368-371页

作者：周帆刘娇陈庆美单晓亮陈林林权会琴唐霓重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 400010

目的研究HCV F蛋白的生物学功能。方法扩增目的基因片段，通过酶切连接方法将编码HCVF蛋白的基因片段克隆至载体pSEB-3Flag中，用构建好的重组质粒pSEB-3Flag-F转染Huh7、SMMC7721细胞，经Blasticidine抗性筛选，拟建立HCVF蛋白稳定表... 详细信息

目的研究HCV F蛋白的生物学功能。方法扩增目的基因片段，通过酶切连接方法将编码HCVF蛋白的基因片段克隆至载体pSEB-3Flag中，用构建好的重组质粒pSEB-3Flag-F转染Huh7、SMMC7721细胞，经Blasticidine抗性筛选，拟建立HCVF蛋白稳定表达的细胞株，用RT-PCR方法检测HCV-F基因的表达。通过MTS、细胞计数、结晶紫以及流式细胞检测实验观察F蛋白对转染细胞增殖和细胞周期的影响。计量资料分析采用t检验。结果成功建立了HCVF基因稳定表达的细胞株Huh7-F和SMMC7721-F，MTS、细胞计数实验均证实Huh7-F和SMMC7721-F细胞较对照细胞增殖速度减慢，Huh7-F稳定细胞株结晶紫定量爿值为1．072±0．070，对照组为1．387±0．005（f=-6．347，P〈0．05）；SMMC7721-F稳定细胞株4值为1．594±0．007，对照组为1．921±0．090（t=-4．81，P〈0．05）。流式细胞仪检测Huh7-F稳定细胞株48hS期细胞百分比分别为47．1妣±0．040／0，对照组S期细胞数为55．32％±1．45％（f=-7．99，P〈0．05）；SMMC7721-F稳定细胞株S期细胞百分比分别为30．75％±0．09％，对照组S期细胞数为33．23％±0．28％（f=-5．91，P〈0．05）。结论稳定转染HCVF基因可以明显抑制Huh7细胞、SMMC7721细胞的增殖。

关键词：肝炎病毒丙型细胞增殖癌肝细胞

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转化生长因子β1的小干扰RNA对肝纤维化大鼠Smad蛋白表达的影响

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中华肝脏病杂志 2012年第4期20卷 289-293页

作者：孙银春郎清钱克莉肖朗刘杞石小枫重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室 400010 四川省达州市中心医院感染科

目的研究转化生长因子（TGF）β1的小干扰RNA（siRNA）对CCl4诱导肝纤维化大鼠TGFβ1／Smad信号通路的影响。方法以前期研究的TGFβ siRNA治疗前后肝纤维化大鼠肝脏组织作为研究对象，分为正常组，模型组、TGFβ1 siRNA0．125mg／kg组、... 详细信息

目的研究转化生长因子（TGF）β1的小干扰RNA（siRNA）对CCl4诱导肝纤维化大鼠TGFβ1／Smad信号通路的影响。方法以前期研究的TGFβ siRNA治疗前后肝纤维化大鼠肝脏组织作为研究对象，分为正常组，模型组、TGFβ1 siRNA0．125mg／kg组、TGFβ1 siRNA0．25mg／kg组和阴性对照组（0．25mg／kg非特异性靶序列）。用免疫组织化学和Western blot检测Smad2、3、4、7的蛋白表达；Real-time PCR法检测Smad2、3、4、7的mRNA表达。多组间数据比较用方差分析，两两比较采用q检验。结果免疫组织化学结果显示TGF-β siRNA0．25mg／kg组及0．125mg／kg组Smad2／3、4的蛋白表达量较模型组、阴性对照组明显减少（F值分别为115．538，117．178，P〈0．01），TGFβ1 siRNA 25mg／kg组表达量较0．125mg／kg组少（P〈0．05）。TGFβ1 siNA0．25mg／kg组及0．125mg／kg组Smad7的蛋白表达量较模型组、阴性对照组增加（F=125．34，P〈0．01），TGFβ1 siRNA0．25mg／kg组表达量较0．125mg／kg组多（P〈0．05）。Western blot结果与之相似。Real-time PCR结果显示，与模型组和阴性对照组比较，TGFβ1 siRNA可以明显抑制Smad2、3、4基因的表达，且TGFβ1 siRNA0．25mg／kg组Smad2、3、4的mRNA表达量（相对表达量分别为2．870±0．705、2．904±0．414、2．667±0．466）较TGFβ1积NA0．125mg／kg组（相对表达量分别为5．998±0．329、5．827±0．781、5．102±0．102）明显减少（P〈0．05）。TGFβ1 siRNA0．25mg／kg组及0．125rng／kg组Smad7的mRNA表达量较模型组、阴性对照组增加（F=29．615，P〈0．01），TGFβ1 siRNA0．25mg／kg组表达量较0．125mg／kg组多（P〈0．05）。结论TGFβ1 siRNA干扰大鼠TGFβ1表达后，Smad2、3、4表达量明显降低，而Smad7表达仍维持在较高水平，这利于肝纤维化的改善。

关键词：肝硬化转化生长因子β Smad

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KRT8对HBV复制影响的体外研究

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西南大学学报（自然科学版） 2012年第4期34卷 65-70页

作者：钟卿梁文彭明利胡鹏重庆医科大学附属第二医院感染科重庆400010 重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆400010 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400010

目的:研究宿主蛋白KRT8对HBV复制的影响.方法:体外培养稳定表达HBV的肝癌细胞株(HepG2.2.15),分别用干扰KRT8基因的siRNA转染HepG2.2.15细胞和高表达KRT8基因的质粒转染HepG2.2.15细胞.RT-PCR验证转染效率,荧光定量PCR检测转染48小时后... 详细信息

目的:研究宿主蛋白KRT8对HBV复制的影响.方法:体外培养稳定表达HBV的肝癌细胞株(HepG2.2.15),分别用干扰KRT8基因的siRNA转染HepG2.2.15细胞和高表达KRT8基因的质粒转染HepG2.2.15细胞.RT-PCR验证转染效率,荧光定量PCR检测转染48小时后的细胞上清液HBV DNA水平.用拉米夫定抑制HepG2.2.15细胞HBV复制,RT-PCR检测基因表达水平.对数据采用t检验和方差分析,p<0.05为差异有统计学意义.结果:干扰KRT8基因表达后,HepG2.2.15细胞上清液中HBV DNA水平与对照组相比下降34%～38%(p<0.05).高表达KRT8基因后,HepG2.2.15细胞上清液中HBV DNA水平是对照组的28倍(p<0.01).抑制细胞HBV DNA复制后,HepG2.2.15细胞KRT8mRNA水平与对照组相比,下降了24%,但统计学无明显差异.结论:抑制宿主KRT8基因表达具有抗病毒作用.

关键词： KRT8 HBV复制宿主蛋白 RNA干扰

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丙型肝炎病毒核心蛋白稳定表达肝癌细胞株的构建及生物学研究

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生物技术通报 2012年第1期28卷 99-103页

作者：单晓亮刘娇陈庆美周帆陈林林权会琴唐霓重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

旨在构建稳定表达HCV核心蛋白的稳定细胞系Huh7-Core并进行初步的生物学功能研究。利用PCR技术扩增HCV核心蛋白基因,通过酶切连接反应将目的基因克隆至载体pSEB-3Flag中,将重组质粒pSEB-3F-Core和辅助质粒pAmpho共转染Huh7细胞,经过Blas... 详细信息

旨在构建稳定表达HCV核心蛋白的稳定细胞系Huh7-Core并进行初步的生物学功能研究。利用PCR技术扩增HCV核心蛋白基因,通过酶切连接反应将目的基因克隆至载体pSEB-3Flag中,将重组质粒pSEB-3F-Core和辅助质粒pAmpho共转染Huh7细胞,经过Blasticidine抗性筛选,建立稳定表达HCV核心蛋白的肝癌细胞系Huh7-Core。采用RT-PCR、Western blot鉴定Huh7-Core细胞株中核心蛋白的稳定表达并采用MTS、结晶紫试验观察Huh7-Core稳定细胞株的增殖情况。结果显示,成功构建了表达HCV核心蛋白的稳定细胞株Huh7-Core。结晶紫、MTS试验证实Huh7-Core细胞较Huh7-3Flag细胞增殖速度增快,表达HCV核心蛋白的Huh7-Core稳定细胞株构建成功,Core稳定表达后可促进Huh7细胞生长速度。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白生物学功能稳定细胞株细胞增殖

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第三军医大学学报 2012年第17期34卷 1733-1736页

作者：彭辉陈维贤常琳陈敏重庆医科大学附属第二医院检验科重庆400010 重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学省部共建教育部重点实验室重庆400010

目的探讨HBV感染相关的慢加急性肝衰竭患者(HBV-associated acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)外周血中TCRγδT(γδT)细胞的比例及产生IFN-γ、TNF-α及IL-17等促炎细胞因子的能力,分析它们与临床指标间的相关性。方法入选26... 详细信息

目的探讨HBV感染相关的慢加急性肝衰竭患者(HBV-associated acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)外周血中TCRγδT(γδT)细胞的比例及产生IFN-γ、TNF-α及IL-17等促炎细胞因子的能力,分析它们与临床指标间的相关性。方法入选26例HBV-ACLF患者、40例慢性HBV感染患者(CHBV)、25例健康对照者,用流式细胞仪方法检测外周血中γδT细胞的频率及产生炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17细胞的比例,采用SPSS 13.0统计软件分析各组间各细胞比例的差异及细胞比例与临床指标的相关性。结果 HBV-ACLF患者外周血中γδT细胞占总T细胞的比例的中位值为4.8%,低于CHB患者(10.7%)与健康对照者(10.3%),差异有统计学意义(P<0.01)。在体外经刺激后,IFN-γ阳性的γδT细胞在HBV-ACLF组的比例中位值为73.9%、CHBV组为70.9%,高于健康对照组(45.3%,P<0.01);HBV-ACLF患者中TNF-α阳性的γδT细胞中位值为26.7%,显著高于CHBV患者(11.5%)及健康对照组(11.7%,P<0.01);产生IL-17因子的γδT在HBV-ACLF组中中位值为0.7%,高于CHBV组(0.3%)及健康对照组(0.3%,P<0.01)。经Spearman Correlation相关性分析,HBV-ACLF组中TNF-α+γδT细胞的比例与ALT或AST水平呈负相关。结论虽然HBV-ACLF患者外周血中总的γδT细胞比例降低,但产生炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17的能力显著增强,可能参与了HBV-ACLF发病过程中炎症因子急剧升高的过程。

关键词： γδT细胞慢加急性肝衰竭乙型肝炎病毒炎性因子

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丙型肝炎病毒E1蛋白活化MAPK／ERK信号通路促进肝癌细胞增殖

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医学分子生物学杂志 2012年第1期9卷 42-48页

作者：陈庆美刘娇单晓亮周帆权会琴陈林林唐霓重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆市400016

目的研究丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）编码蛋白E1的生物学功能。方法分别构建编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的腺病毒载体Ad—E1、Ad—E2、Ad—NS3、Ad—NS5a、Ad—NS5b；将重组并包装的腺病毒分别感染SMMC-7721细胞... 详细信息

目的研究丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）编码蛋白E1的生物学功能。方法分别构建编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的腺病毒载体Ad—E1、Ad—E2、Ad—NS3、Ad—NS5a、Ad—NS5b；将重组并包装的腺病毒分别感染SMMC-7721细胞，测定感染滴度，通过RT—PCR方法在转录水平鉴定HCVE1、E2、NS3、NS5a、NSSb的表达，用Western印迹在蛋白水平鉴定E1蛋白的表达。腺病毒感染SMMC-7721细胞后，通过细胞增殖实验筛选生物学功能最明显的蛋白。将筛选到的Ad—E1感染SMMC-7721细胞，用MTS、结晶紫、细胞周期实验观察体外过表达E1蛋白对感染细胞增殖的影响；Western印迹检测p-ERK、ERK的表达；RT—PCR检测c—Myc、cyclinD1、c—Jun、***基因的表达。结果成功扩增了能够编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的高滴度腺病毒Ad—E1、Ad—E2、Ad—NS3、Ad—NS5a、Ad—NS5b，并且通过RT—PCR方法在转录水平鉴定了目的基因的表达，Western印迹方法在蛋白水平鉴定了E1蚩白的表达。通过细胞计数、MTS、结晶紫实验证实Ad—E1感染组细胞较对照组增殖速度加快，细胞周期显示Ad-E1感染组细胞34．38％处于S期，明显高于Ad—GFP（27．32％）（P〈0．05）对照组；Ad-E1感染绢p-ERK蛋白表达量增高，同时与细胞增殖相关的MAPK／ERK下游基因转录水平上凋。结论体外过表达HCVE1蛋白可以明显促进SMMC-7721细胞的增殖，其促增殖作用可能与MAPK／ERK信号通路的活化相关。

关键词：丙型肝炎病毒 E1蛋白丝裂原活化蛋白激酶细胞增殖

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转化生长因子β1的小干扰RNA对肝纤维化大鼠Smad蛋白表达的影响

转化生长因子β1的小干扰RNA对肝纤维化大鼠Smad蛋白表达的影响

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第八届全国肝脏疾病临床学术大会暨第四届中国-印度尼西亚肝病峰会

作者：孙银春钱克莉肖朗刘杞石小枫郎清重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室 40010 四川省达州市中心医院感染科

目的：研究转化生长因子(TGF)β 1的小干扰RNA(siRNA)对CCl4诱导肝纤维化大鼠TGF β 1/Smad信号通路的影响。方法：以前期研究的TGF β lsiRNA治疗前后肝纤维化大鼠肝脏组织作为研究对象，分为正常组、模型组、TGF β lsiRNA 0.125 mg/k... 详细信息

目的：研究转化生长因子(TGF)β 1的小干扰RNA(siRNA)对CCl4诱导肝纤维化大鼠TGF β 1/Smad信号通路的影响。方法：以前期研究的TGF β lsiRNA治疗前后肝纤维化大鼠肝脏组织作为研究对象，分为正常组、模型组、TGF β lsiRNA 0.125 mg/kg组、TGF β lsiRNA 0.25 mg/kg组和阴性对照组(0.25 mg/kg非特异性靶序列)。用免疫组织化学和Western blot检测Smad2、3、4、7的蛋白表达;Real-time PCR法检测Smad2、3、4、7的mRNA表达。结果：免疫组织化学结果显示TGF-β lsiRNA 0.25mg／kg组及0.125mg／kg组Smad2/3、4的蛋白表达量较模型组、阴性对照组明显减少(F值分别为115.538，117.178，p<0.01)，TGF-β lsiRNA0.25 mg／kg组较0.125 mg／kg组表达量少(p<0.05)。TGF—β 1 siRNA 0.25 mg／kg组及0.125 mg／kg组Smad7的蛋白表达量较模型组、阴性对照组增加(F=125.34，p<0.01)，TGF-β 1 siRNA 0.25mg／kg组较0.125 mg／kg组表达量多(p<0.05)，Western blot也显示相同趋势。Real-time PCR结果显示与模型组和阴性对照组比较，TGF β 1 siRNA可以明显抑制Smad2、3、4基因的表达，且TGF-β 1 siRNA 0.25 mg/kg组Smad2、3、4的mRNA表达量(分别为5.998±0.329，5.827±0.781，5.102±0.102)较TGF—β 1 siRNA 0.125mg／kg组(分别为2.870±0.705，2.904±0.414，2.667±0.466)明显减少(p<0.05)。TGF-β 1 siRNA 0.25 mg／kg组及0.125mg／kg组Smad7的mRNA表达量较模型组、阴性对照组增加(F=29.615，p<0.01)，TGF-β 1 siRNA 025mg/kg组较0.125 mg／kg组表达量多(p<0.05)。结论：TGF β lsiRNA干扰大鼠TGF β 1表达后，Smad2、3、4表达量明显降低，而Smad7表达仍维持在较高水平，这利于肝纤维化的改善。

关键词：肝纤维化转化生化因子β 小干扰核糖核酸 Smad蛋白蛋白表达

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丙型肝炎病毒核心蛋白对Wnt信号抑制因子SFRPs甲基化修饰的影响

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第三军医大学学报 2011年第20期33卷 2116-2119页

作者：陈庆美刘娇周帆单晓亮陈林林权会琴唐霓重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白是否通过对Wnt信号抑制因子SFRPs的甲基化修饰,从而活化Wnt信号通路。方法将编码HCV核心蛋白的腺病毒(AdCore)或GFP对照腺病毒(AdGFP)感染SMMC-7721细胞,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测SFRPs基因mRNA的表达... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白是否通过对Wnt信号抑制因子SFRPs的甲基化修饰,从而活化Wnt信号通路。方法将编码HCV核心蛋白的腺病毒(AdCore)或GFP对照腺病毒(AdGFP)感染SMMC-7721细胞,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测SFRPs基因mRNA的表达;用5-氮杂-2'-脱氧胞苷(DAC)对AdCore或AdGFP腺病毒感染的SMMC-7721细胞进行去甲基化处理,进一步采用甲基化特异性PCR(MSP)和DNA甲基化测序,检测SFRPs基因启动子区CpG岛的甲基化程度,Western blot检测甲基化转移酶Dnmts的表达。结果在HCV核心蛋白过表达的SMMC-7721细胞系中,SFRP2和SFRP5基因mRNA的表达量与对照组相比明显降低(P<0.05);甲基化分析结果表明:SFRP5基因启动子区CpG岛呈现高甲基化修饰;甲基化转移酶Dnmt1、Dnmt3a表达量增加(P<0.05)。结论 HCV核心蛋白可以促进SFRP5基因启动子区CpG岛的甲基化修饰,参与HCV相关疾病的发生。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白 SFRPs 甲基化细胞系,肿瘤

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