检索结果-内蒙古大学图书馆

目的:获取幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A(HspA)亚单位基因并进行核苷酸序列分析和同源性比较。方法:获取幽门螺杆菌的染色体DNA,PCR技术扩增获取HspA基因,将其定向插入pGEX-4T-1原核表达载体中进行核苷酸序列分析。结果:经酶切鉴定及基因序列证实HpHspA基因克隆成功,DNA序列与Genbank公布的序列比较有13个碱基存在差异,同源性为96%;由碱基序列推定编码的氨基酸残基序列没有发生变异,同源性为100%。结论:成功地将HpHspA基因克隆到了pGEX4T-1原核表达载体,为HspA的表达和研究奠定了实验基础。

关键词：螺杆菌幽门 HspA亚单位克隆生物基因顺序

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禽冠状病毒的分离鉴定及膜蛋白基因的克隆

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新乡医学院学报 2008年第2期25卷 121-124页

作者：杨帆李淑梅陈萍李进芬新乡医学院微生物学教研室河南新乡453003 河南科技学院化工学院河南新乡453003 新乡医学院形态学实验室河南新乡453003

目的分离鉴定禽冠状病毒,对该病毒的M基因序列进行分析。方法采用鸡胚传代分离培养病毒,用血凝特性、鸡胚半数感染量(EID50)、鸡胚矮小化、动物回归试验等方法鉴定病毒,用RT-PCR克隆病毒的膜蛋白基因并对其测序。结果分离病毒的生物学... 详细信息

目的分离鉴定禽冠状病毒,对该病毒的M基因序列进行分析。方法采用鸡胚传代分离培养病毒,用血凝特性、鸡胚半数感染量(EID50)、鸡胚矮小化、动物回归试验等方法鉴定病毒,用RT-PCR克隆病毒的膜蛋白基因并对其测序。结果分离病毒的生物学特性符合禽冠状病毒,膜蛋白基因与标准毒株膜蛋白基因为核苷酸序列同源性为91.9%,氨基酸的同源性为92.5%。结论本研究分离到1株禽冠状病毒,命名为IBV-HN05,该毒株可能是疫苗株的变异株。

关键词：禽冠状病毒分离鉴定膜蛋白基因序列分析

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禽冠状病毒M蛋白B细胞抗原表位的预测

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新乡医学院学报 2008年第6期25卷 561-563页

作者：杨帆邓保国李淑梅邹鹏李进芬新乡医学院微生物学教研室河南新乡453003 河南科技学院化工学院河南新乡453003 新乡医学院基础医学院 2005级本科河南新乡453003 新乡医学院形态学实验室河南新乡453003

目的预测禽冠状病毒（IBV）M蛋白B细胞抗原表位。方法采用SOPMA软件预测IBV M蛋白的二级结构,采用SOSUI软件预测M蛋白的跨膜区,应用Hopp＆Woods方案、Janin方案、Zimmerman方案预测IBV M蛋白B细胞表位抗原。结果IBV M蛋白二级结构主要... 详细信息

目的预测禽冠状病毒（IBV）M蛋白B细胞抗原表位。方法采用SOPMA软件预测IBV M蛋白的二级结构,采用SOSUI软件预测M蛋白的跨膜区,应用Hopp＆Woods方案、Janin方案、Zimmerman方案预测IBV M蛋白B细胞表位抗原。结果IBV M蛋白二级结构主要包括α-螺旋和无规卷曲,含量分别为32.89%、31.11%;M蛋白具有3个跨膜区,位于18～40、48～70、77～99位氨基酸;B细胞识别的表位可能位于第186-196位氨基酸区域内或附近,预测的表位均含有β-转角和无规卷曲结构。结论IBVM蛋白的二级结构和抗原表位比较稳定,可利用地方毒株的M蛋白制备基因工程疫苗和单克隆抗体,应用于该病的诊断和防治。

关键词：禽冠状病毒 M蛋白 B细胞表位预测

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抗菌肽在推进绿色养殖体系建设过程中的优势

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安徽农业科学 2007年第17期35卷 5175-5177页

作者：陈俊杰陈萍河南科技学院动科系河南新乡453003 新乡医学院微生物学教研室河南新乡453003

结合抗菌肽的来源和其独特的抗菌机理,阐述了抗菌肽在推进绿色养殖体系建设过程中的应用潜力。

关键词：抗菌肽抗菌机理应用

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鸡传染性支气管炎分子生物学诊断研究

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安徽农业科学 2007年第16期35卷 4858-4859,4862页

作者：陈俊杰陈萍河南科技学院动科系河南新乡453003 新乡医学院微生物学教研室河南新乡453003

综述寡核苷酸指纹图谱分析、RT-PCR、RFLP、核酸探针、单克隆抗体技术,及基因表达技术在鸡传染性支气管炎(IB)分子生物学诊断方面的研究与应用。

关键词：鸡传染性支气管炎冠状病毒分子生物学诊断方法

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抗人CD25分子单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第3期23卷 264-266页

作者：沈弢张爱华闭兰史良如温州医学院基础医学院微生物学与免疫学教研室浙江温州325035 武汉生物制品研究所卫生部单克隆抗体中试实验室湖北武汉430060

目的:构建和表达抗人CD25分子单链抗体(scFv)蛋白,并测定其生物学活性。方法:用RT-PCR方法从能分泌特异性抗CD25单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因。用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起,构建抗CD25分子scFv的基因... 详细信息

目的:构建和表达抗人CD25分子单链抗体(scFv)蛋白,并测定其生物学活性。方法:用RT-PCR方法从能分泌特异性抗CD25单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因。用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起,构建抗CD25分子scFv的基因。将scFv基因克隆至pMD18T,用限制性内切酶切以及测序鉴定。将scFv基因连接到pBAD/gⅢA表达载体,转化Top10表达菌。阳性克隆用左旋阿拉伯糖诱导4 h,SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度,竞争抑制ELISA实验检测其活性。结果:scFv基因长度约为700 bp。通过DNA序列测定和分析,构建出VL-(GGGGS)3-VH(但其中349位G突变为A,使Linker其中一位Gly→Ser)。其VH隶属于小鼠Ig重链可变区Ⅲ(C)亚类,全长351 bp,可编码117个氨基酸;其VL隶属于小鼠Igκ轻链可变区Ⅳ亚类,全长318 bp,可编码106个氨基酸。TOP10中表达的scFv抗体加上同时融合表达的两个标签6×His和C-mycMr约为31 000,结果符合scFv的Mr。竞争抑制细胞ELISA实验显示表达的scFv具有活性。结论:此scFv基因的表达产物具有一定的特异结合活性。为抗CD25 scFv的临床应用打下了基础。

关键词： CD25 scFv 蛋白表达 ELISA

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雌激素对IM-9细胞增殖及功能的调节作用

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新乡医学院学报 2007年第4期24卷 329-331页

作者：黄青松牛志国郭继强宋向凤新乡医学院微生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院免疫学教研室河南新乡453003

目的探讨17-β-雌二醇(E2)在体外对人B淋巴细胞系IM-9细胞的调节作用。方法四甲基偶氮唑兰(MTT)法检测不同浓度E2对IM-9细胞增殖时间和剂量依赖性的影响;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测免疫球蛋白G(IgG)的分泌。结果48 h后低浓度E2(≤1... 详细信息

目的探讨17-β-雌二醇(E2)在体外对人B淋巴细胞系IM-9细胞的调节作用。方法四甲基偶氮唑兰(MTT)法检测不同浓度E2对IM-9细胞增殖时间和剂量依赖性的影响;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测免疫球蛋白G(IgG)的分泌。结果48 h后低浓度E2(≤10-7mol.L-1)能明显地促进IM-9细胞的增殖(P<0.05),并呈时间-剂量依赖性,而高浓度E2(>10-7mol.L-1)对IM-9细胞有明显的抑制作用(P<0.05),也呈时间-剂量依赖性;RT-PCR扩增IgG显示低浓度的E2(10-10mol.L-1)明显促进IgG分泌(P<0.05),高浓度的E2(10-6mol.L-1,10-4mol.L-1)明显抑制IgG的分泌(P<0.05)。结论E2能调节IM-9淋巴细胞增殖,同时影响免疫球蛋白的分泌。

关键词：雌激素 IM-9细胞免疫球蛋白G

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醋酸铅对小鼠胸腺细胞凋亡及Bax和Bcl-2基因表达的影响

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新乡医学院学报 2007年第2期24卷 130-132页

作者：黄青松邓保国牛志国新乡医学院微生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院免疫学教研室河南新乡453003

目的探讨醋酸铅诱导小鼠胸腺细胞凋亡及对Bax和Bc l-2基因表达的影响。方法以3种不同浓度的醋酸铅灌胃饲养小鼠46 d后,取胸腺组织,用琼脂糖凝胶电泳法检测胸腺细胞凋亡情况,Western blot法检测胸腺组织中Bax和Bc l-2的表达情况。结果铅... 详细信息

目的探讨醋酸铅诱导小鼠胸腺细胞凋亡及对Bax和Bc l-2基因表达的影响。方法以3种不同浓度的醋酸铅灌胃饲养小鼠46 d后,取胸腺组织,用琼脂糖凝胶电泳法检测胸腺细胞凋亡情况,Western blot法检测胸腺组织中Bax和Bc l-2的表达情况。结果铅处理组小鼠胸腺细胞有被降解的凋亡带,并且降解条带的量随着染铅剂量的增加而增加;小鼠胸腺细胞Bax表达量均高于对照组,并且表达量随着染铅剂量增加而升高(P<0.05);而Bc l-2表达量均低于对照组,且表达量随着染铅剂量的增加而递减(P<0.05),Bc l-2/Bax表达比明显降低(P<0.01)。结论醋酸铅可诱发小鼠胸腺细胞凋亡,,促进胸腺细胞中Bax基因的表达,抑制Bc l-2基因的表达,降低Bc l-2/Bax表达比。

关键词：凋亡 Bax Bcl-2 醋酸铅

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