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第十五届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：朱光旭王小华周芳李自安刘菊芬阮光萍白盈盈康华利庞荣清潘兴华 650032昆明成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省干细胞工程实验室昆明市干细胞与再生医学研究重点实 400013重庆重庆市公安局渝中区分局物证鉴定所 400037重庆第三军医大学新桥医院全军心血管疾病研究所 650032昆明成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室云南省干细胞工程实验室昆明市干细胞与再生医学研究重点实 400037重庆第三军医大学新桥医院全军心血管疾病研究所

目的：体外培养骨髓脂肪祖细胞(BMAPs),比较其与骨髓间充质干细胞(BMSCs)在形态、表型、成脂肪分化能力及相关基因表达方面的差别. 方法：脱臼处死SD大鼠,取骨髓制作细胞悬液,EBM-2培养基差速贴壁法培养第三次贴壁细胞,取3到5代细胞... 详细信息

目的：体外培养骨髓脂肪祖细胞(BMAPs),比较其与骨髓间充质干细胞(BMSCs)在形态、表型、成脂肪分化能力及相关基因表达方面的差别. 方法：脱臼处死SD大鼠,取骨髓制作细胞悬液,EBM-2培养基差速贴壁法培养第三次贴壁细胞,取3到5代细胞用于实验.流式细胞分析检测CD34、CD44、CD45以及CDg0表达;STEMPRO Adipogenesis Differentiation Kit检测细胞成脂肪分化能力;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)检测过氧化物酶体增殖激活受体γ(Ppaγ),脂肪酸结合蛋白4(Fabp4),脂蛋白脂肪酶(Lpl),CCAAT/增强子结合蛋白α[(Cebpa),葡萄糖转运蛋白4(S1c2a4)以及前脂肪细胞因子1(pread1)mRNA表达. 结果：传代接种培养24h,BMSCs形态上呈宽大、扁平状,而BMAPs大部呈长三角状,接种48h后BMSCs排列更为有序,而BMAPs多交织成网状.BMAP表达CD34、CD44、CD45以及CD90,BMSC仅表达CD44以及CD90.诱导培养后第4天,BMAPs成脂率显著高于BMSCs组(P＜0.01),到第8天,BMAPs与BMSCs组相差更为显著(P＜0.01).在未进行诱导分化前,Cebpa、Ppaγ和Fabp4mRNA,特别是Fabp4mRNA在BMAPs的表达已显著高于BMSCs组(P＜0.01),诱导分化第4、8天,Cebpa、Fabp4、Lp1、Ppaγ和Slc2a4mRNA在BMAPs表达均显著高于在BMSCs的表达(P＜0.01). 结论：本次实验培养的细胞具有干细胞的生物学特性,同时也高表达脂肪分化相关的特异性基因,因此认为实验所培养的细胞可以定义为BMAPs.

关键词：骨髓脂肪祖细胞骨髓间充质干细胞体外培养生物学特征

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淋巴瘤样丘疹病皮损中表皮及真皮内不同表型肿瘤细胞克隆来源相关性的探讨

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四川大学学报（医学版） 2015年第2期46卷 185-190页

作者：温蓬飞王婷婷王琳王锐男唐源吴文超刘小菁张文燕四川大学华西医院皮肤性病科成都610041 四川大学华西口腔医学院口腔疾病研究国家重点实验室成都610041 四川大学华西医院病理科成都610041 四川大学华西医院再生医学中心心血管疾病研究室成都610041

目的通过对8例淋巴瘤样丘疹病(LyP)A型和C型患者表皮内的MF样细胞和真皮内的R-S样细胞DNA水平的对比性研究,探讨二者克隆来源的相关性。方法对8例LyP(A型4例、C型4例)的病理组织行免疫表型检测、应用激光捕获显微切割技术(LCM)结合PCR... 详细信息

目的通过对8例淋巴瘤样丘疹病(LyP)A型和C型患者表皮内的MF样细胞和真皮内的R-S样细胞DNA水平的对比性研究,探讨二者克隆来源的相关性。方法对8例LyP(A型4例、C型4例)的病理组织行免疫表型检测、应用激光捕获显微切割技术(LCM)结合PCR技术对表皮内的MF样细胞和真皮内的R-S样细胞进行T细胞受体(TCR)γ基因重排的对比研究。随机选取1例检测为阳性的PCR产物送测序,进行序列比对。结果8例中有6例(75%)检测到TCRγ基因克隆性重排。LyP A型及C型检出率分别为50%(2/4)、100%(4/4)。LyP表皮内MF样细胞及真皮内R-S样细胞TCRγ基因重排检出率分别为75%(6/8)、75%(6/8)。随机选取的1例MF样细胞和R-S样细胞均有阳性条带的产物的同源性比对分析显示二者同源性达106/108(98%)。结论LyP表皮内MF样细胞和真皮内R-S样细胞很可能来自同一克隆。

关键词：淋巴瘤样丘疹病 MF样细胞 R-S样细胞克隆来源对比研究

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血管平滑肌细胞传代培养对内皮祖细胞吞噬Ac-LDL能力的影响及意义

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西南国防医药 2015年第8期25卷 813-816页

作者：朱光旭周芳朱向情杨建勇阮光萍庞荣清黄岚康华莉潘兴华成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心云南省干细胞工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室昆明市干细胞与再生医学重点实验室昆明650032 第三军医大学新桥医院全军心血管疾病研究所

目的建立细胞共培养体系,探讨共培养的传代血管平滑肌细胞(SMCs)对内皮祖细胞(EPCs)吞噬Ac-低密度脂蛋白(Ac-LDL)能力的影响及意义。方法应用含15%FBS、细胞生长因子100μg/ml的DMEM/F12培养基培养EPCs,组织块法培养SMCs,分别应用Dil标... 详细信息

目的建立细胞共培养体系,探讨共培养的传代血管平滑肌细胞(SMCs)对内皮祖细胞(EPCs)吞噬Ac-低密度脂蛋白(Ac-LDL)能力的影响及意义。方法应用含15%FBS、细胞生长因子100μg/ml的DMEM/F12培养基培养EPCs,组织块法培养SMCs,分别应用Dil标记乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)与FITC标记荆豆凝集素Ⅰ(FITC-UEA-Ⅰ)荧光双染以及α-SM-actin免疫荧光,对EPCs和SMCs进行鉴定。以单纯EPCs作为对照,分别将第1、4、8及第16代SMCs与EPCs进行非接触或混合共培养,荧光显微镜观察EPCs吞噬Dil-Ac-LDL能力,激光共聚焦显微镜拍照并使用Image J1.48u图像分析软件进行细胞荧光强度分析。结果在非接触性共培养系统,与对照相比,第1、4、8代SMCs对EPCs吞噬Ac-LDL无明显影响,但是第16代SMCs却显著抑制其吞噬能力;在混合共培养系统,第1、16代SMCs均显著抑制EPCs吞噬Ac-LDL(分别为P<0.05与P<0.01)。结论EPCs吞噬Ac-LDL受SMCs传代培养以及接触方式的影响,合成型SMCs显著抑制EPCs吞噬Ac-LDL,提示应用EPCs移植治疗损伤血管可能存在"时机窗",血管损伤后极早或过晚应用EPCs移植均可能达不到修复血管损伤的最佳治疗效果。

关键词：内皮祖细胞血管平滑肌细胞 Ac-LDL 内皮细胞

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原代乳鼠心肌细胞培养方法的改进

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中华心血管病杂志 2014年第1期42卷 53-56页

作者：陶静马依彤李晓梅杨毅宁马翔陈邦党刘芬陈小翠盖敏涛新疆医科大学第一附属医院心脏中心乌鲁木齐830054 新疆心血管病研究所重点实验室

目的通过对传统乳鼠心肌细胞体外培养的条件、方法进行改进，得到纯度高、活力好、结构功能完整的心肌细胞。方法改进心室肌组织剪切方法，分别用胰酶、Ⅱ型胶原酶依次消化分离心肌组织，严格要求所需溶液pH值，差速贴壁法和化学抑制法... 详细信息

目的通过对传统乳鼠心肌细胞体外培养的条件、方法进行改进，得到纯度高、活力好、结构功能完整的心肌细胞。方法改进心室肌组织剪切方法，分别用胰酶、Ⅱ型胶原酶依次消化分离心肌组织，严格要求所需溶液pH值，差速贴壁法和化学抑制法相结合纯化心肌细胞。结果心肌细胞12h后开始贴壁生长，24h出现单个细胞自发性搏动，48h部分心肌细胞间形成交联，72h心肌细胞黏合成簇，96h后细胞伪足相互接触交织成密集的网，形成放射状排列的细胞簇，可见岛屿样搏动。细胞存活率、纯度均达98％以上。结论此种方法培养的心肌细胞纯度高、活力好、结构及功能完整，是一种可靠的原代乳鼠心肌细胞培养方法。

关键词：肌细胞心脏细胞培养技术

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血管平滑肌细胞传代培养对内皮祖细胞吞噬ac-LDL能力的影响及意义

血管平滑肌细胞传代培养对内皮祖细胞吞噬ac-LDL能力的影响及意义

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第十四届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：朱光旭周芳朱向情杨建勇阮光萍庞荣清黄岚康华莉潘兴华成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心、云南省干细胞工程实验室、云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室、昆明市干细胞与再生医学重点实验室昆明650032 第三军医大学新桥医院全军心血管疾病研究所重庆430003

目的建立细胞共培养体系,探讨共培养的传代血管平滑肌细胞(SMCs)对内皮祖细胞(EPCs)吞噬ac-低密度脂蛋白(ac-LDL)能力的影响及意义.方法应用含15％FBS、细胞生长因子100 μg/ml的DMEM/F12培养基培养EPCs,组织块法培养SMCs,分别应用Di... 详细信息

目的建立细胞共培养体系,探讨共培养的传代血管平滑肌细胞(SMCs)对内皮祖细胞(EPCs)吞噬ac-低密度脂蛋白(ac-LDL)能力的影响及意义.方法应用含15％FBS、细胞生长因子100 μg/ml的DMEM/F12培养基培养EPCs,组织块法培养SMCs,分别应用DiL标记乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)与FITC标记荆豆凝集素I(FITC-UEA-1)荧光双染以及α-SM-actin免疫荧光,对EPCs和SMCs进行鉴定.以单纯EPCs作为对照,分别将第1、4、8及第16代SMCs与EPCs进行非接触或混合共培养,荧光显微镜观察EPCs吞噬Dil-ac-LDL能力,激光共聚焦显微镜拍照并使用ImageJ 1.48u图像分析软件进行细胞荧光强度分析.结果在非接触性共培养系统,与对照相比,第1、4、8代SMCs对EPCs吞噬ac-LDL无明显影响,但是第16代SMCs却显著抑制其吞噬能力;在混合共培养系统,第1、16代SMCs均显著抑制EPCs吞噬ac-LDL(分别为P＜0.05与P＜0.01).结论 EPCs吞噬ac-LDL受SMCs传代培养以及接触方式的影响,合成型SMCs显著抑制EPCs吞噬ac-LDL,提示应用EPCs移植治疗损伤血管可能存在"时机窗",血管损伤后极早或过晚应用EPCs移植均可能达不到修复血管损伤的最佳治疗效果.

关键词：内皮祖细胞平滑肌细胞 ac-LDL 内皮细胞

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NFKB1基因启动子区-94ins/del ATTG多态性在新疆汉族和维吾尔族及哈萨克族人群中的分布特征及其与血脂的关系

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中国全科医学 2014年第32期17卷 3846-3850页

作者：董星辉李晓梅杨毅宁马依彤谢翔张金宇新疆医科大学第一附属医院心脏中心新疆乌鲁木齐市830054 新疆心血管研究重点实验室新疆医科大学临床研究院

目的探讨NFKB1基因启动子区-94ins/del ATTG多态性在新疆汉族、维吾尔族及哈萨克族人群中的分布特征及其与血脂的关系。方法采用整群随机抽样方法,于2008—2010年选择新疆乌鲁木齐、福海、吐鲁番、伊犁、克拉玛依、和田、阜康等7个地区... 详细信息

目的探讨NFKB1基因启动子区-94ins/del ATTG多态性在新疆汉族、维吾尔族及哈萨克族人群中的分布特征及其与血脂的关系。方法采用整群随机抽样方法,于2008—2010年选择新疆乌鲁木齐、福海、吐鲁番、伊犁、克拉玛依、和田、阜康等7个地区共26个乡镇,选取汉族人群604名,维吾尔族585名及哈萨克族566名。收集受试者一般资料,包括身高、体质量、吸烟、饮酒情况,并计算体质指数(BMI)。统一测定受试者血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清葡萄糖(Glu)水平。采集受试者外周静脉血3 ml,采用实时荧光定量PCR方法,检测其NFKB1基因启动子区-94ins/del ATTG多态性,并分析不同血脂水平组中该基因多态性的分布差异。结果三民族性别、年龄、Glu比较,差异均无统计学意义(P>0.05);三民族BMI、TC、TG、HDL-C、LDL-C、吸烟率及饮酒率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。三民族基因型分布比较,差异有统计学意义(χ2=12.062,P<0.05)。哈萨克族del/del基因型频率均低于汉族和维吾尔族(χ2=11.986,P<0.01)。三民族del等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。将汉族、维吾尔族和哈萨克族异常血脂组中del等位基因携带者(ins/del型+del/del型,ID+DD型)与血脂正常组中ID+DD型者分布频率比较,结果显示,三民族高TG血症组和TG正常组、高TC血症组和TC正常组、低HDL-C血症组和HDL-C正常组EBC中ID+DD型频率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);汉族高LDL-C血症组ID+DD型频率高于LDL-C正常组(χ2=4.763,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,携带del等位基因、年龄、TG、HDL-C为汉族人群患有高LDL-C血症的影响因素(P<0.05)。结论 NFKB1基因启动子区-94ins/del ATTG多态性分布频率在新疆汉族、维吾尔族、哈萨克族间存在差异;该基因多态性与汉族人群发生高LDL-C血症相关,del等位基因可能是汉族人群患高LDL-C血症的一个危险因素。

关键词： NFKB1基因多态性,单核苷酸新疆[维吾尔自治区] 汉族维吾尔族哈萨克族

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血小板源性生长因子B基因转染抑制缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡

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中国组织工程研究 2014年第38期18卷 6090-6098页

作者：陈邦党陈小翠马依彤杨毅宁马翔刘芬新疆医科大学第一附属医院及临床医学研究院新疆心血管病研究重点实验室新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 新疆医科大学第一附属医院心脏中心新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054

背景:血小板源性生长因子B(platelet-derived growth factor-B,PDGF-B)是一种有效的促血管生长因子,9型腺相关病毒(adeno-associated virus serotype,rAAV9)对心肌细胞具有良好的靶向亲和力,是目前缺血性心脏疾病基因治疗的理想载体。目... 详细信息

背景:血小板源性生长因子B(platelet-derived growth factor-B,PDGF-B)是一种有效的促血管生长因子,9型腺相关病毒(adeno-associated virus serotype,rAAV9)对心肌细胞具有良好的靶向亲和力,是目前缺血性心脏疾病基因治疗的理想载体。目的:探索rAAV9介导PDGF-B基因(rAAV9-PDGF-B)体外转染乳鼠心肌细胞,抵抗缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡的作用。方法:分离培养原代乳鼠心肌细胞,分别将感染复数为1×105,1×106及1×107 MOI携带rAAV9-PDGF-B基因的重组9型腺相关病毒及空病毒(rAAV9-eGFP)转染乳鼠心肌细胞,逐日在荧光显微镜下观察eGFP的阳性表达,采用流式细胞仪测定rAAV9载体的转染效率,Western blot和免疫荧光鉴定PDGF-B蛋白表达情况;并于rAAV9-eGFP及rAAV9-PDGF-B(107感染复数)转染第5天时,建立体外心肌细胞缺血缺氧损伤模型,通过TUNEL法检测心肌细胞凋亡数目,Western Blot检测Bax及Caspase-3凋亡相关蛋白的表达,研究PDGF-B基因过表达抗心肌细胞凋亡的作用及可能机制。结果与结论:rAAV9载体可有效转染乳鼠心肌细胞,eGFP和PDGF-B蛋白可在心肌细胞中高效正确表达,其表达强度随着转染时间和转染复数的增加而逐渐增强,第5天趋于稳定,此时各组转染率相比差异均有显著性意义(P<0.01)。rAAV9-PDGF-B组心肌细胞凋亡率低于rAAV9-eGFP组(P<0.05),且rAAV9-PDGF-B组凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3的表达与rAAV9-eGFP组比均显著下调(P<0.05)。结果表明,PDGF-B基因过表达可有效减轻缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡,其机制通过抑制Bax和Caspase-3蛋白表达而发挥作用,为rAAV9-PDGF-B载体用于缺血性心脏疾病的基因治疗提供依据。

关键词：组织工程腺病毒科病毒缺氧细胞凋亡组织构建血小板源性生长因子B 9型腺相关病毒基因转染心肌细胞缺血缺氧转染效率血管新生 BAX Caspase-3 国家自然科学基金

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AAV-9载体介导CaMEK基因转导减轻老龄小鼠在体心肌缺血再灌注损伤

AAV-9载体介导CaMEK基因转导减轻老龄小鼠在体心肌缺血再灌注损伤

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第二十五届长城国际心脏病学会议、亚太心脏大会2014暨国际心血管预防与康复会议

作者：陈邦党马依彤新疆医科大学第一附属医院及临床医学研究院心血管病研究重点实验室新疆医科大学第一附属医院心脏中心

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CBA启动子重组AAV9载体介导eGFP基因在小鼠肝脏中的高效表达

CBA启动子重组AAV9载体介导eGFP基因在小鼠肝脏中的高效表达

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第二十五届长城国际心脏病学会议、亚太心脏大会2014暨国际心血管预防与康复会议

作者：陈邦党马依彤新疆医科大学第一附属医院及临床医学研究院心血管病研究重点实验室新疆医科大学第一附属医院心脏中心

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CRELD1基因多态性与新疆维吾尔族先天性心脏病相关性研究

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中国现代医药杂志 2013年第8期15卷 1-4页

作者：胡易池杨毅宁谢翔李晓梅马依彤刘芬陈邦党新疆医科大学第一附属医院心脏中心新疆心血管病研究重点实验室新疆乌鲁木齐830011

目的研究CRELD1基因单核苷酸多态性与新疆维吾尔族先天性心脏病的关系。方法选择112例新疆维吾尔族先天性心脏病患者和112例年龄、性别匹配的对照者。选择CRELD1基因的6个SNPs(rs3894571、rs3846167、rs2302785、rs279552、rs17050660、... 详细信息

目的研究CRELD1基因单核苷酸多态性与新疆维吾尔族先天性心脏病的关系。方法选择112例新疆维吾尔族先天性心脏病患者和112例年龄、性别匹配的对照者。选择CRELD1基因的6个SNPs(rs3894571、rs3846167、rs2302785、rs279552、rs17050660、rs279551),应用TaqMan SNP基因分型的方法进行基因分型,分析CRELD1基因单核苷酸多态性与新疆维吾尔族先天性心脏病的相关性。结果患者年龄和性别在入选样本时进行了匹配,所以在分析时进行了剔除。对先心病患者母亲的年龄、文化程度、忧虑情绪、饮食状况等基本情况进行单因素分析,结果显示年龄、文化程度、忧虑情绪、饮食状况等因素与先心病发生有关联。病例组与对照组CC、CT及TT基因型频率分别为74.35%、22.28%、3.37%和83.03%、16.07%、0.90%,两组比较无统计学差异(χ2=5.488,P>0.05)。两组均以CC型为主,等位基因以C占优势,病例组TT基因型频率高于对照组,但是差异无统计学意义(P>0.05),而CT、CT+TT基因型频率和携带T等位基因频率高于对照组,有统计学意义(P<0.05)。应用Logistic回归分析先心病主要相关因素:母亲年龄、文化程度、忧虑情绪、饮食状况对结果的影响,rs3894571 CT、CT+TT、CT、等位基因T因素进入回归方程。结论 CRELD1基因核苷酸多态性与新疆维吾尔族先天性心脏病有相关性。

关键词： CRELD1 单核苷酸多态性先天性心脏病

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