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T=题名（书名、题名），A=作者（责任者），K=主题词，P=出版物名称，PU=出版社名称，O=机构（作者单位、学位授予单位、专利申请人），L=中图分类号，C=学科分类号，U=全部字段，Y=年（出版发行年、学位年度、标准发布年）

检索规则说明：

AND代表“并且”；OR代表“或者”；NOT代表“不包含”；(注意必须大写,运算符两边需空一格)

检索范例：

范例一：(K=图书馆学 OR K=情报学) AND A=范并思 AND Y=1982-2016
范例二：P=计算机应用与软件 AND (U=C++ OR U=Basic) NOT K=Visual AND Y=2011-2016

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文献类型

57 篇 专利
2 篇 会议

馆藏范围

59 篇 电子文献
0 种 纸本馆藏

日期分布

学科分类号

1 篇 农学
- 1 篇 畜牧学

主题

1 篇 分子机制
1 篇 绵羊
1 篇 遗传育种
1 篇 功能基因

机构

48 篇 新疆维吾尔自治区...
9 篇 新疆维吾尔自治区...
2 篇 新疆维吾尔自治区...

作者

36 篇 刘明军
29 篇 李文蓉
28 篇 张雪梅
27 篇 贺三刚
26 篇 张宁
22 篇 汪立芹
21 篇 黄俊成
19 篇 林嘉鹏
16 篇 赵云程
13 篇 陈童
13 篇 刘晨曦
12 篇 玛依拉
9 篇 唐森
7 篇 吴阳升
5 篇 白杰
5 篇 牛志刚
4 篇 史洪才
3 篇 杨楠
3 篇 郭志勤
3 篇 金贤华

语言

59 篇 中文

检索条件"机构=新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国-澳大利亚绵羊育种研究中心"

共 59 条记录，以下是21-30 订阅

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详细简洁

排序：

一种用于卵周隙内注射慢病毒生产转基因羊的方法

一种用于卵周隙内注射慢病毒生产转基因羊的方法

引用

作者：黄俊成汪立芹刘明军赵云程陈童林嘉鹏王静 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市克拉玛依东街151号

本发明提供一种用于卵周隙内注射慢病毒生产转基因羊的方法，将慢病毒载体与病毒包装质粒共转染为293T细胞，至48小时后离心，得慢病毒的浓缩液，将其注射于成熟24-25小时的卵母细胞卵周隙内，与精子结合实施体外受精，12小时后置于培... 详细信息

标准号: CN101760476A

本发明提供一种用于卵周隙内注射慢病毒生产转基因羊的方法，将慢病毒载体与病毒包装质粒共转染为293T细胞，至48小时后离心，得慢病毒的浓缩液，将其注射于成熟24-25小时的卵母细胞卵周隙内，与精子结合实施体外受精，12小时后置于培养液中培养，48小时后统计卵裂率和转基因率。其一取卵母细胞用体外成熟液洗涤3-4次，按25-30枚/滴入体积75-78μl/滴的体外成熟培养液，在5％CO₂、95％下培养；其二体外成熟的卵母细胞脱去卵丘细胞，慢病毒注射入细胞卵周隙内，用体外受精液洗涤2-4次，按25-30枚/滴入受精液内；解冻精液，移入受精液，离心弃上清液，沉淀精子加受精液滴，孵育；取受精12-18小时的卵，按上步处理后入四孔培养板内培养即可；其三为药剂慢病毒液、抽卵液、成熟液、显微操作液、SOF、受精液、培养液、养血清的必备。

关键词：受精液慢病毒培养液卵母细胞体外成熟卵周隙精子洗涤注射慢病毒载体注射入细胞病毒包装卵丘细胞体外受精转基因羊培养卵裂率浓缩液培养板转基因血清精液受精卵液清液体外显微质粒转染解冻沉淀细胞

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绵羊角蛋白31皮肤毛囊特异性启动子及其克隆

绵羊角蛋白31皮肤毛囊特异性启动子及其克隆

引用

作者：贺三刚李文蓉张雪梅张宁玛依拉刘明军 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市克拉玛依东街151号

本发明公开了一种绵羊角蛋白31皮肤毛囊特异性启动子及其克隆，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。本发明所提供的绵羊皮肤毛囊特异性表达K31基因5’调控区启动子，并通过报告基因分析确定该启动子的特征。本发明克隆得到的K31基因... 详细信息

标准号: CN102643816A

本发明公开了一种绵羊角蛋白31皮肤毛囊特异性启动子及其克隆，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。本发明所提供的绵羊皮肤毛囊特异性表达K31基因5’调控区启动子，并通过报告基因分析确定该启动子的特征。本发明克隆得到的K31基因5’启动子调控区序列只能在皮肤毛囊中特异性地启动下游基因的表达，能够满足目的基因在皮肤毛囊特异性的表达要求，能应用于转基因羊的培育。

关键词：启动子皮肤毛囊克隆报告基因分析核苷酸序列特异性表达绵羊皮肤目的基因特异性地下游基因转基因羊基因绵羊角序列表调控毛囊蛋白皮肤培育

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绵羊FGF5基因的克隆和慢病毒表达载体的构建

绵羊FGF5基因的克隆和慢病毒表达载体的构建

引用

作者：刘明军贺三刚李文蓉张雪梅张宁 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市沙依巴克区克拉玛依东街151号

本发明的绵羊FGF5基因的克隆和慢病毒表达载体的构建，确定绵羊Noggin基因编码区的全序列；将目的基因定向克隆于pLEX慢病毒表达载体中，获得FGF5和FGF5S基因慢病毒载体，生产重组病毒，感染293T细胞，验证重组蛋白的表达；其中扩增外显... 详细信息

标准号: CN102181448B

本发明的绵羊FGF5基因的克隆和慢病毒表达载体的构建，确定绵羊Noggin基因编码区的全序列；将目的基因定向克隆于pLEX慢病毒表达载体中，获得FGF5和FGF5S基因慢病毒载体，生产重组病毒，感染293T细胞，验证重组蛋白的表达；其中扩增外显子1的引物；扩增5-RACE引物；扩增外显子3的引物；扩增3-RACE的引物；以外显子3测序结果设计3-RACE引物：其中以5-RACE和3-RACE测序结果设计扩增FGF5全长的引物：扩增FGF5的全长cDNA序列，测序确定FGF5和FGF5S的全长序列；克隆与测序：将绵羊FGF5基因的扩增产物进行回收纯化后，利用T4DNA连接酶将其与连接PMD-18T载体，转化*** DH5α；利用氨苄青霉素平板筛选，并以PCR法和限制性酶切法鉴定，阳性克隆测序由上海生物工程公司完成。

关键词：引物扩增绵羊扩增外显子表达载体慢病毒上海生物工程阳性克隆测序氨苄青霉素基因编码区基因的克隆慢病毒载体限制性酶切定向克隆扩增产物目的基因重组病毒重组蛋白连接酶基因克隆筛选验证细胞感染回收连接转化

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一种高效提取绵羊皮肤组织蛋白的方法

一种高效提取绵羊皮肤组织蛋白的方法

引用

作者：张雪梅李文蓉贺三刚张宁刘明军 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市沙依巴克区克拉玛依东街151号

本发明提供的一种高效提取绵羊皮肤组织蛋白的方法，针对绵羊皮肤组织结构的复杂性，采用冷冻破碎法粉碎组织，然后摸索出适合绵羊皮肤组织的超声破碎条件，并通过涡旋使样品裂解更充分，以便能提高皮肤组织的利用率，尽可能少地破坏蛋... 详细信息

标准号: CN103087146A

本发明提供的一种高效提取绵羊皮肤组织蛋白的方法，针对绵羊皮肤组织结构的复杂性，采用冷冻破碎法粉碎组织，然后摸索出适合绵羊皮肤组织的超声破碎条件，并通过涡旋使样品裂解更充分，以便能提高皮肤组织的利用率，尽可能少地破坏蛋白内的分子结构，产出高质量的蛋白。该方法操作简单可靠，方便快捷，成本低廉，为体内皮肤组织蛋白提取提供了成熟的高效的技术方法。

关键词：绵羊皮肤组织蛋白蛋白超声破碎方便快捷粉碎组织高效提取技术方法冷冻破碎皮肤组织体内皮肤组织结构裂解涡旋产出

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一种促进绵羊卵母细胞体外发育的方法

一种促进绵羊卵母细胞体外发育的方法

引用

作者：黄俊成汪立芹林嘉鹏赵云程唐森玛依拉 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市克拉玛依东街151号

本发明提供的一种促进绵羊卵母细胞体外发育的方法，采用腺苷酸环化酶激活剂，即为FSK，磷酸二酯酶抑制剂，即为CIL，3-异丁基-1-甲基黄嘌呤，即为IBMX，联合对绵羊卵母细胞进行处理，提高其体外发育能力；具体步骤：摘取宰杀绵羊卵巢... 详细信息

标准号: CN102618496B

本发明提供的一种促进绵羊卵母细胞体外发育的方法，采用腺苷酸环化酶激活剂，即为FSK，磷酸二酯酶抑制剂，即为CIL，3-异丁基-1-甲基黄嘌呤，即为IBMX，联合对绵羊卵母细胞进行处理，提高其体外发育能力；具体步骤：摘取宰杀绵羊卵巢，置入生理盐水中清洗3-4次；吸有1ml加有100μMol/L的FSK和500μMol/LIBMX的抽卵液，带有9号针头的10ml注射器，抽吸卵巢表面2-8mm大小的卵泡，将注射器内回收的卵泡液打在35-60mm的皿内；在显微镜下捡出卵母细胞，放置在抽卵液中，用含有20μMol/LCIL的体外成熟液洗涤3次，置于CO₂箱培养；再用不含CIL的体外成熟液洗涤3次，置于CO₂箱培养，加入体外受精液滴内;用水浴解冻精液，与卵母细胞共同孵育；24小时后统计卵裂率，168小时后统计囊胚率。

关键词：卵母细胞体外成熟注射器卵液绵羊洗涤磷酸二酯酶抑制剂卵巢绵羊卵母细胞甲基黄嘌呤共同孵育卵巢表面生理盐水体外发育激活剂卵裂率卵泡液囊胚率受精液细胞体精液抽吸丁基化酶卵母卵泡酸环体外腺苷针头显微镜解冻宰杀培养发育回收

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一种用于绵羊卵母细胞体外的筛选培养方法

一种用于绵羊卵母细胞体外的筛选培养方法

引用

作者：黄俊成汪立芹赵云程陈童林嘉鹏 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市克拉玛依东街151号

本发明提供的一种用于绵羊卵母细胞体外的筛选培养方法，其一取宰杀半小时内的卵巢，置入温度30-40℃，含青霉素和链霉素的生理盐水中，3小时内清洗3-4次，捡出卵母细胞；用25-30μmol/L的亮甲酚蓝，置于35-39℃水浴中染色85-92分钟，... 详细信息

标准号: CN101760444A

本发明提供的一种用于绵羊卵母细胞体外的筛选培养方法，其一取宰杀半小时内的卵巢，置入温度30-40℃，含青霉素和链霉素的生理盐水中，3小时内清洗3-4次，捡出卵母细胞；用25-30μmol/L的亮甲酚蓝，置于35-39℃水浴中染色85-92分钟，细胞质呈蓝色，用体外成熟液洗涤3-4遍，按25-30枚/滴放入55-78μl/滴的体外成熟培养液中，在5％CO₂、95％的条件下培养；其二将体外成熟25-28小时的卵母细胞脱去卵丘细胞；体外受精液洗涤2-4遍，按25-30枚/滴的入50-70μl的受精液滴内；解冻精液，移入受精液，离心4-5分钟弃去上清液，将沉淀的精子，按2-4×10⁶个/ml的密度加入受精液滴，孵育；将受精12-18小时的卵取出，按上步方法处理移入四孔培养板内培养即可。其三所用试剂吸卵液、亮甲酚蓝成熟液、染色液SOF、受精液、培养液、羊血清的必备。

关键词：受精液体外成熟培养液卵母细胞甲酚洗涤细胞质卵巢卵丘细胞培养方法生理盐水青霉素链霉素培养板染色液细胞体染色血清精液受精精子卵母卵液清液水浴体外解冻绵羊沉淀宰杀培养筛选

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一种用于绵羊胚胎干细胞的无血清分离培养方法

一种用于绵羊胚胎干细胞的无血清分离培养方法

引用

作者：黄俊成赵云程汪立芹林嘉鹏陈童陈世彬 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市克拉玛依东路151号

本发明提供的一种用于绵羊胚胎干细胞的无血清分离培养方法，将体外培养的绵羊囊胚，采用Tyrode’s Solution去除透明带后，接种于绵羊胚胎干细胞无血清培养液中，并用针头固定，置于38.6℃、5％CO2饱和湿度条件下培养，培养中每48小时... 详细信息

标准号: CN101914487A

本发明提供的一种用于绵羊胚胎干细胞的无血清分离培养方法，将体外培养的绵羊囊胚，采用Tyrode’s Solution去除透明带后，接种于绵羊胚胎干细胞无血清培养液中，并用针头固定，置于38.6℃、5％CO₂饱和湿度条件下培养，培养中每48小时半量更换培养液，pH为6.8-7.2，原代培养7-9天；之后每3-4天采用常规机械法按1∶2-1∶4传代一次，即绵羊胚胎干细胞体外培养可传至16代。绵羊胚胎干细胞无血清培养液的配制：D-MEM/F-12+80ng/mL bFGF+3μMCHIR99021+10μL/mL N2+20μL/mL B27+10μL/mL NEAA+2mM L-Glutamine+0.2mM β-Mercaptoethanol。使用32号针头将裸胚固定于培养皿底部，避免损伤囊胚内细胞团并将裸胚滋养层细胞剥离。裸胚接种数量因以45-60枚/组为宜。该方法能使绵羊的胚胎干细胞原代集落形成率提高至33％(14/42)。

关键词：绵羊胚胎干细胞血清培养液囊胚绵羊接种培养皿培养液细胞体外培养胚胎干细胞饱和湿度常规机械培养方法体外培养血清分离原代培养针头固定透明带细胞团针头底部配制损伤剥离培养细胞固定

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利用锌指核酸酶敲除绵羊肌肉抑制素基因的方法

利用锌指核酸酶敲除绵羊肌肉抑制素基因的方法

引用

作者：刘明军张雪梅李文蓉张宁贺三刚刘晨曦玛依拉 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市克拉玛依东街151号

本发明公开了一种锌指核酸酶定点删除绵羊肌肉抑制素基因的方法，其针对绵羊Myostatin基因外显子3设计了识别39bp的特异靶位点序列，并构建锌指核酸酶质粒，将该质粒转染绵羊成纤维细胞，获得可以定点删除95bp和113bp的双等位基因删除... 详细信息

标准号: CN103290045A

本发明公开了一种锌指核酸酶定点删除绵羊肌肉抑制素基因的方法，其针对绵羊Myostatin基因外显子3设计了识别39bp的特异靶位点序列，并构建锌指核酸酶质粒，将该质粒转染绵羊成纤维细胞，获得可以定点删除95bp和113bp的双等位基因删除的单克隆细胞，表明锌指核酸酶定点删除Myostatin基因特异靶位点序列能够准确删除Myostatin基因外显子3并能准确分选出Myostatin基因被定点删除的细胞，证实了该序列的有效性，且获得删除的单克隆细胞无需抗生素筛选，兼顾了基因组靶向修饰和安全性两大优点，对培育无抗性标记基因、安全高效的转基因绵羊具有重要意义。

关键词：锌指核酸酶基因绵羊外显子3 细胞质粒抗性标记基因抗生素筛选转基因绵羊等位基因纤维细胞重要意义基因组靶向修饰转染肌肉证实培育

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幼畜卵母细胞体外两次受精方法

幼畜卵母细胞体外两次受精方法

引用

作者：郭志勤汪立芹杨梅吴伟伟陈童 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市克拉玛依东街151号

本发明提供的幼畜卵母细胞体外两次受精方法，受体均为45-100日龄母幼畜，经FSH超数排卵处理，取卵母细胞100枚/只以上待用；将体外成熟25-26小时的卵母细胞与精子混合，完成一次体外受精；5-6小时进行二次体外受精，过13-14小时，移于... 详细信息

标准号: CN101843530A

本发明提供的幼畜卵母细胞体外两次受精方法，受体均为45-100日龄母幼畜，经FSH超数排卵处理，取卵母细胞100枚/只以上待用；将体外成熟25-26小时的卵母细胞与精子混合，完成一次体外受精；5-6小时进行二次体外受精，过13-14小时，移于培养板培养，48小时后统计卵裂率即可。成熟的卵母细胞需用0.1％的透明质酸酶处理30-60s，经吹吸脱去部分卵丘细胞，加入2-5小时平衡好的50-70μl/滴的受精液内孵育；水浴解冻精液，放入CO₂箱，20-25分钟，取上清液离心2-5分钟，沉淀的精子按2-4×10⁶个/ml的密度加入受精液孵育；将受精5-6小时的卵取出，放入受精液中；用同前的方法解冻精子，加入受精液，经13-14小时，洗涤，移入平衡好的500μl/孔的四孔培养板内培养。该方法简单易行，能使牛、羊的幼畜受精率达到80-92％，囊胚率达到40-50％。

关键词：受精液幼畜卵母细胞受精培养板精子简单易行透明质酸酶排卵解冻精子卵丘细胞体外成熟体外受精卵裂率囊胚率受精率细胞体精液平衡超数次体二次卵母清液水浴解冻洗涤沉淀培养

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绵羊角蛋白31皮肤毛囊特异性启动子及其克隆

绵羊角蛋白31皮肤毛囊特异性启动子及其克隆

引用

作者：贺三刚李文蓉张雪梅张宁玛依拉刘明军 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市克拉玛依东街151号

标准号: CN102643816B

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