检索结果-内蒙古大学图书馆

色谱 2011年第4期29卷 335-341页

作者：王志鹏暨南大学医学院微生物与免疫学教研室广东广州510632

建立了采用变性高效液相色谱（DHPLC）对α-血红蛋白稳定蛋白（AHSP）基因进行基因分型和突变筛查的新方法。将AHSP基因序列分成6个片段,因第一、二、四、六个片段均含有1~2个常见单核苷酸多态性（single nu-cleotide polymorphism,SNP... 详细信息

建立了采用变性高效液相色谱（DHPLC）对α-血红蛋白稳定蛋白（AHSP）基因进行基因分型和突变筛查的新方法。将AHSP基因序列分成6个片段,因第一、二、四、六个片段均含有1~2个常见单核苷酸多态性（single nu-cleotide polymorphism,SNP）位点,需单个标本分别进行检测;第三、五个片段不含有常见SNP位点,采用DHPLC结合DNA（脱氧核糖核酸）池的方法进行检测。以基因测序为金标准对所建立的AHSP基因检测方法进行方法学评价,结果显示：40个样品的DHPLC检测结果与测序结果之间完全吻合,说明所建立的检测方法能对AHSP基因6种常见SNP进行准确基因分型。应用DHPLC对365个样品的AHSP基因进行检测,发现2个罕见SNP（11 810G〉A和12 802C〉T）;同时还发现2个错义突变（AHSP D29V和AHSP V56G）,AHSP D29V突变为新突变,AH-SP V56G为罕见突变。结果表明采用DHPLC法可有效地对AHSP基因进行基因分型和突变筛查。

关键词：变性高效液相色谱 α-血红蛋白稳定蛋白基因基因分型突变筛查

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Plakoglobin基因在乳腺癌BRCA1基因突变的多态性

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中华医学遗传学杂志 1997年第6期14卷 347-350页

作者：黎国华梁志成暨南大学医学院微生物免疫教研室

为了探讨在携带乳腺癌易感基因（ＢＲＣＡ１）突变基因的乳腺癌家族中是否同时具有Ｐｌａｋｏｇｌｏｂｉｎ基因的改变，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和双向直接测序方法，对家族性乳腺癌中有乳腺癌易感基因ＢＲＣＡ１突变的两个德国家族... 详细信息

为了探讨在携带乳腺癌易感基因（ＢＲＣＡ１）突变基因的乳腺癌家族中是否同时具有Ｐｌａｋｏｇｌｏｂｉｎ基因的改变，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和双向直接测序方法，对家族性乳腺癌中有乳腺癌易感基因ＢＲＣＡ１突变的两个德国家族成员的Ｐｌａｋｏｇｌｏｂｉｎ基因多态性进行研究。结果表明，两个家族６７％（６／９）有Ｐｌａｋｏｇｌｏｂｉｎ基因多态性改变，且不同的ＢＲＣＡ１基因突变亦伴随不同形式的Ｐｌａｋｏｇｌｏｂｉｎ基因多态性。为研究乳腺癌的分子遗传学病因积累了资料。

关键词： Plakiogliobin 乳腺癌多态现象基因突变

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分泌型PD-L1真核表达载体的构建、表达及其体外效应的初步研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第11期26卷 1009-1012页

作者：胡萍季煜华李君武林绍强韦静李小兰黄泽棋暨南大学医学院微生物和免疫学教研室广州510632 暨南大学组织移植与免疫中心

目的构建分泌型PD-L1真核表达载体,并对其生物学活性进行初步研究。方法以RT-PCR方法从孕鼠胎盘中获得程序性死亡因子-1(programmed death-1,PD-1)配体PD-L1的胞外段基因片段,定向连接于pcDNA3．1上构建真核表达载体pcDNA-PDL1；用脂质... 详细信息

目的构建分泌型PD-L1真核表达载体,并对其生物学活性进行初步研究。方法以RT-PCR方法从孕鼠胎盘中获得程序性死亡因子-1(programmed death-1,PD-1)配体PD-L1的胞外段基因片段,定向连接于pcDNA3．1上构建真核表达载体pcDNA-PDL1；用脂质体将重组子导入NIT细胞,转染后的NIT命名为NITp。以Western blot鉴定重组蛋白的表达。MTT比色法检测NITp细胞培养上清对同种混合淋巴细胞培养反应的影响；用ELISA试剂盒检测NITp细胞培养上清对反应性T细胞分泌的细胞因子的影响。结果RT-PCR得到约730bp目的基因片段,测序结果显示该目的基因与Gen- Bank上的序列相符；Western blot分析提示NITp分泌性表达目的蛋白；NITp培养上清可抑制混合淋巴细胞增殖,其效应呈剂量依赖性；反应性T细胞分泌的细胞因子检测结果显示,培养上清中IL-4、IFN-γ、IL-2水平降低,与正常对照组差异有统计学意义。结论成功构建PD-L1基因真核表达载体pcDNA-PDL1,PD-L1蛋白对同种细胞刺激的增殖反应有抑制作用,并可在一定程度上抑制特异性T细胞的活化。

关键词： PD-L1 混合淋巴细胞培养细胞因子 1型糖尿病

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HCV-C蛋白抗原在人肝细胞株中的表达和鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第4期22卷 423-426页

作者：李君武许小亮李科暨南大学医学院微生物与免疫学教研室广东广州510632

目的:构建HCV-C蛋白基因的真核表达载体,并在正常人肝细胞HL-7702中表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中,扩增HCVcore基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其... 详细信息

目的:构建HCV-C蛋白基因的真核表达载体,并在正常人肝细胞HL-7702中表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中,扩增HCVcore基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人正常肝细胞HL-7702,用免疫组化染色(SP)法检测HCVC蛋白的表达,并通过Westernblot进行鉴定。结果:所克隆的HCV-C基因片段的大小为573bp,序列正确。成功地构建了pcDNA3.1(-)/core重组表达质粒。以其转染HL-7702细胞后,用SP免疫组化染色法检测到了C蛋白的表达。Westernblot显示,其相对分子质量(Mr)约为21000。结论:构建的真核表达载体pcD-NA3.1(-)/core在人肝细胞中能有效表达HCV-C蛋白,为以后相应抗体的制备打下了基础。

关键词： HCV C蛋白真核表达

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裸鼠实验性矽结节形成与免疫应答关系的探讨

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中国病理生理杂志 1995年第6期11卷 615-618页

作者：林晨杨柳张文兴司徒锐王惠华廖剑辉暨南大学医学院微生物和免疫学教研室暨南大学医学院病理学教研室

先天性胸腺缺陷的裸鼠及正常ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔注射二氧化硅（ＳｉＯ＿２）后，连续８周动态观察血清ＩｇＭ，ＩｇＧ，抗ｓｓＤＮＡ抗体的变化及其与矽结节形成的关系，结果表明：两组实验鼠在形成矽结节过程中，免疫反应不同，ＢＡ... 详细信息

先天性胸腺缺陷的裸鼠及正常ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔注射二氧化硅（ＳｉＯ＿２）后，连续８周动态观察血清ＩｇＭ，ＩｇＧ，抗ｓｓＤＮＡ抗体的变化及其与矽结节形成的关系，结果表明：两组实验鼠在形成矽结节过程中，免疫反应不同，ＢＡＬＢ／Ｃ鼠诱导形成的矽结节明显大于裸鼠组，ＢＡＬＢ／ｃ组鼠血清ＩｇＭ，ＩｇＧ，裸鼠组血清ＩｇＭ明显升高，两组鼠抗ｓｓＤＮＡ抗体均异常升高，ＢＡＬＢ／ｃ鼠组抗ｓｓＤＮＡ抗体阳性率明显高于裸鼠组，结果说明Ｔ细胞在矽结节形成过程中有一定作用，血清抗体的异常升高作为继发因素参与矽结节形成。

关键词：硅石免疫矽结节矽肺

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携带乙肝大包膜蛋白L基因与结核Esat6融合基因植物表达载体的构建及鉴定

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华北农学报 2011年第2期26卷 1-6页

作者：李君武宫君原刘鑫叶秋萍黄清华暨南大学医学院微生物与免疫教研室广东广州510632

构建包含编码结核杆菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物双元表达载体,并转化根癌农杆菌LBA4404。分别以质粒pPIC9K-L和结核杆菌基因组为模板进行PCR扩增,获得L和Esat6基因,然后运用部分重叠聚合酶链式反应扩增出L-Esat6... 详细信息

构建包含编码结核杆菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物双元表达载体,并转化根癌农杆菌LBA4404。分别以质粒pPIC9K-L和结核杆菌基因组为模板进行PCR扩增,获得L和Esat6基因,然后运用部分重叠聚合酶链式反应扩增出L-Esat6融合基因片段,连接到有玉米特异性启动子globulin-1的pEGG载体上,将G-L-Esat6融合基因片段酶切下,连接到含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。构建了真核表达重组质粒pCAMG-L-Esat6,测序分析表明,克隆的L和Esat6序列与NCB I上公布序列一致。成功构建与转化了包含编码乙肝病毒大包膜蛋白L基因和结核杆菌Esat6基因的植物表达载体,并将其转化入根癌农杆菌LBA4404中,为成功研制利用转基因植物生产抗乙肝和结核联合口服疫苗奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌乙肝病毒大包膜蛋白L基因 Esat6基因 globulin-l

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丙型肝炎病毒核心蛋白在QSG7701细胞中的表达和鉴定

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中国免疫学杂志 2005年第8期21卷 579-582,585页

作者：李君武许小亮江静王志鹏林绍强黄泽棋韦静李小兰暨南大学医学院微生物免疫教研室广州510632

目的:进行丙型病毒肝炎核心蛋白真核表达载体的构建,并在人源肝细胞QSG7701中进行表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出HCV核心(core)基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后... 详细信息

目的:进行丙型病毒肝炎核心蛋白真核表达载体的构建,并在人源肝细胞QSG7701中进行表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出HCV核心(core)基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701,用免疫组织化学SP法检测丙型肝炎病毒核心蛋白的表达,再通过Westernblot印迹法进行鉴定。结果:所克隆的core片段大小正确,序列正确;成功的构建了pcDNA3.1(-)/core重组表达质粒,瞬时转染QSG7701细胞,用SP免疫组化检测到了核心蛋白的表达,Westernblot印迹法显示其分子量约为21000。结论:丙型病毒肝炎核心蛋白的真核表达载体pcDNA3.1(-)/core在人肝细胞中能有效表达HCV核心蛋白,从而为进一步研究和解析核心蛋白在肝细胞癌变机制中的所起的作用提供了良好的核心蛋白表达系统,同时也为开发丙型肝炎DNA疫苗提供了前期条件。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白真核表达

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肿瘤坏死因子(TNF)对人鼻咽癌与肺癌细胞株作用的超微结构观察

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中华肿瘤杂志 1990年第2期12卷 89-91+163页

作者：赵启勋李新章暨南大学医学院微生物与免疫学教研室

本文用电镜观察了兔天然TNF对人类鼻咽癌与肺癌细胞株作用的超微结构变化。结果表明,TNF作用后的靶细胞病变主要在细胞质,而细胞膜的病变不明显。鼻咽癌细胞质呈高度空泡样变性,并见只有完整细胞膜的"亮细胞"。肺癌细胞线粒... 详细信息

本文用电镜观察了兔天然TNF对人类鼻咽癌与肺癌细胞株作用的超微结构变化。结果表明,TNF作用后的靶细胞病变主要在细胞质,而细胞膜的病变不明显。鼻咽癌细胞质呈高度空泡样变性,并见只有完整细胞膜的"亮细胞"。肺癌细胞线粒体的外膜扩张后,与内膜相分离,嵴完全消失。TNF对肿瘤细胞超微结构水平上的破坏性改变结果提示,它可能在鼻咽癌与肺癌等临床治疗上有一定意义。

关键词：肿瘤坏死因子细胞毒效应超微结构观察

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人类恶性畸胎瘤PA-1细胞的p53基因结构、功能状态及其意义

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中国免疫学杂志 2002年第8期18卷 546-549页

作者：李君武高崇暨南大学医学院微生物免疫教研室广州510632

目的:探讨人类恶性畸胎瘤PA-1细胞株p53基因的结构、功能状态及其意义。方法:采用DNA碱基序列分析、FASAY（酵母细胞中单个等位基因的功能分析）及Western blot（蛋白印迹分析）等方法对经20余年407-445继代培养的PA-1细胞株p53的基因... 详细信息

目的:探讨人类恶性畸胎瘤PA-1细胞株p53基因的结构、功能状态及其意义。方法:采用DNA碱基序列分析、FASAY（酵母细胞中单个等位基因的功能分析）及Western blot（蛋白印迹分析）等方法对经20余年407-445继代培养的PA-1细胞株p53的基因结构、功能状态进行了研究。结果:RT-PCR产物DNA定向序列分析显示具有野生及突变2个带（p53密码子239突变）,FASAY结果也显示p53一个等位基因是有活性的（野生的）,而另一个是非活性的（突变的）。Western blot未检测出突变的p53基因蛋白,而p21蛋白的表达水平比正常成纤维细胞低。结论:人卵巢恶性畸胎瘤PA-1细胞株经20年的继代培养后,一个p53等位基因发生错义突变,另一个仍然是野生型的。仅一个p53等位基因发生突变,不足以引起细胞的染色体不稳定性。因此,研究PA-1细胞稳定核型的维持结构,在确定有关染色体的稳定性与不稳定性的基因的方面是非常重要的。

关键词：人类恶性畸胎瘤 PA-1细胞 p53基因结构功能临床意义

来源：评论

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血清标本中HBsAg免疫复合物对检测HBsAg的影响

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中国病理生理杂志 1996年第2期12卷 172-174页

作者：林晨罗伟中刘小澄韦静宋爱华暨南大学医学院微生物免疫学教研室

０．５ｍｏｌ／ＬＨＣｌ处理ｌｈ后解离ＨＢｓＡｇ一抗Ｈｈ免疫复合物，并变性抗ＨＢｓＡｇ抗体而对ＨＢｓＡｇ免疫反应性无影响，３４例临床抗ＨＢｓ＋血清样品经ＨＣｌ处理前后，常规ＥＬＩＳＡ检测ＨＢＳＡｇ比较，结果：酸处理前Ｈ... 详细信息

０．５ｍｏｌ／ＬＨＣｌ处理ｌｈ后解离ＨＢｓＡｇ一抗Ｈｈ免疫复合物，并变性抗ＨＢｓＡｇ抗体而对ＨＢｓＡｇ免疫反应性无影响，３４例临床抗ＨＢｓ＋血清样品经ＨＣｌ处理前后，常规ＥＬＩＳＡ检测ＨＢＳＡｇ比较，结果：酸处理前ＨＢｓＡｇ阳性率为１１．７６％，处理后增加至４１．１８％（Ｐ＜０．０１），实验表明血清样品经酸处理后能明显提高临床乙肝ＨＢｓＡｇ检出率。

关键词：乙型肝炎表面抗原 ELISA

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